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氯通道阻断剂对氧化应激诱导晶状体上皮细胞凋亡影响
目的 观察氯通道阻断剂5-硝基-2 (3-苯丙胺)苯甲酸(NPPB)和二异硫氰基芪-2,2’-二磺酸(DIDS)对氧化应激诱导的晶状体上皮细胞(HLE-B3)凋亡的影响,初步探讨其抑制细胞凋亡的机制.方法 实验研究.于2010年11月至2011年6月在福建医科大学附属协和医院实验室以晶状体上皮细胞HLE B-3为实验对象,用500 μmol/L叔丁基过氧化氢(t-BHP)诱导细胞氧化应激损伤作为t-BHP处理组,常规培养的细胞作为对照组.在t-BHP存在或不存在下分别加入5、100、200 μmol/L的氯通道阻断剂NPPB或DIDS培养12 h,通过MTT法检测各组细胞存活率;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;AO/EB双荧光染色观察细胞凋亡形态学改变;采用分光光度法检测细胞中丙二醛(MDA)、三磷酸腺苷(ATP)的含量及超氧化物歧化酶(SOD); Fluo-3/AM荧光探针检测细胞内钙离子含量的变化.结果 与空白对照组相比,t-BHP处理组细胞存活率及凋亡率降低、抗氧化酶SOD活性和细胞内ATP含量降低、细胞内MDA及钙离子含量升高,差异比较有统计学意义(P＜0.01);与t-BHP处理组比较,NPPB或DIDS处理组(100、200 μmol/L)皆可使得细胞存活率增高及凋亡率降低,并明显减少氧化应激引起的凋亡形态,增强SOD活性及提高ATP含量,降低细胞内MDA及钙离子含量,差异比较均有统计学意义(P＜0.01).结论 氯通道阻断剂NPPB和DIDS能抑制氧化应激诱导的HLE-B3细胞凋亡,减轻细胞的损伤.其机制可能与降低晶状体上皮细胞内钙负载及改善其氧化还原稳态的失衡有关.
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丹参素对LED光源诱导的人晶状体上皮细胞光损伤影响的研究
目的 采用发光二极管(light emitting diode,LED)光源制作人品状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)光损伤模型,观察丹参素对LED光源诱导LECs光损伤细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量及凋亡的影响.方法 实验研究.使用LED光源20000勒克斯(LUX)照射LECs及加入丹参素培养的LECs 24 h,使用流式细胞术检测LECs内ROS的表达及细胞凋亡情况,分别使用Real-time PCR和Western blotting检测凋亡相关基因BAX mRNA和蛋白表达,使用四甲基噻唑蓝(MTT)法检测细胞增殖.观察不同处理组间LECs在照射后细胞内以上各项指标的差异.结果 光照组和丹参素光照组LECs细胞ROS平均荧光强度分别为15.83±5.81和7.67±0.63,细胞总凋亡率分别为(5.22±1.63)％和(1.57±1.21)％,光照组BAX基因的表达水平是丹参素光照组的(9.51±3.23)倍,以上检测指标两组间差异均有统计学意义(P＜0.05). 光照组、对照组和丹参素光照组BAX蛋白条带的校正后灰度值分别为0.297、0.065和0.100.MTT实验光照组与对照组和丹参素光照组,在570 nm处的吸收值A570分别为1.002±0.017、1.230±0.025、1.116±0.033,三组间比较差异有统计学意义(P＜0.01),各组之间比较差异均有统计学意义P ＜0.05).结论 丹参素可以明显降低光损伤诱导的人品状体上皮细胞内的ROS水平,降低细胞凋亡的发生,丹参素对于光诱导的晶状体上皮细胞损伤的保护作用可能是通过清除细胞内的ROS来实现的.
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吲哚青绿对兔晶状体上皮细胞增殖影响研究
目的 研究吲哚青绿(indocyanine green,ICG)对体外培养的兔晶状体上皮细胞(rabbit lens epithelial cells,RLECs)增殖的影响,探讨其在白内障术中晶状体前囊膜染色技术应用中的安全性、可靠性,并为其是否可在临床推广应用提供理论依据.方法 实验研究.行RLECs体外培养,将不同浓度的ICG加入第二代RLECs中,分别在24 h、48 h、72 h采用MTT比色法及血球板计数法观察不同浓度的ICG对体外培养的RLECs增殖的影响,并在光镜下观察其形态学变化.结果 (1)MTT比色法结果显示:浓度为0.5％和1％的ICG在24 h对RLECs即有明显的促增殖作用,与阴性对照组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);随作用时间延长,在48、72 h各实验浓度的ICG均对RLECs有明显的促增殖作用,与阴性对照组相比差异具有统计学意义(P＜0.05);在同一作用时间内,随ICG浓度增高,对RLECs的促增殖作用逐渐增强,各浓度组间差异具有统计学意义(P＜0.05).(2)血细胞板计数法结果:24h血细胞板计数法结果与MTT比色法结果一致.随实验时间的延长,RLECs的黏附性明显增高,无法消化,致使48 h、72 h细胞计数无法进行.结论 ICG能促进体外培养的RLECs的增殖,因此对后囊混浊的形成有促进作用.为减少后囊混浊的发生,白内障手术中应谨慎应用ICG.
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白花丹醌对人晶状体上皮SRA细胞株增殖和凋亡影响
目的 研究白花丹醌对人晶状体上皮SRA细胞株增殖和凋亡作用,探讨其防治后发性白内障的生物学活性.方法 实验研究.于2013年1～7月在桂林医学院科技实验中心应用白花丹醌孵育人晶状体上皮SRA细胞株48 h后,采用MTT法和流式细胞仪测定人晶状体上皮SRA细胞的增殖和凋亡.结果 白花丹醌呈浓度依赖性抑制人晶状体上皮SRA细胞的增殖,诱导其凋亡,70 μmol/L白发丹醌对SRA细胞的抑制率达(35.90±2.00)％,并诱导(9.83±0.35)％的SRA细胞凋亡.结论 白花丹醌抑制人晶状体上皮SRA细胞增殖,诱导其凋亡,具有潜在的抗晶状体上皮细胞增殖的生物学作用.
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紫外线诱导的人晶状体上皮细胞氧化损伤与小窝蛋白1mRNA表达量下降有关
目的 紫外线(UV)照射导致的氧化损伤是晶状体上皮细胞凋亡的原因之一,而小窝蛋白(Caveolin)参与晶状体上皮细胞凋亡过程.本实验拟研究紫外线造成的氧化损伤中Caveolin-1表达变化与晶体上皮细胞凋亡之间的关系,同时探讨阿司匹林(ASA)作为抗氧化剂对Caveolin-1表达及晶状体上皮细胞凋亡的影响.方法 UVB(4.43 mw/cm2)照射人晶状体上皮细胞系SRAOI/04(0 s,5 s,10 s,20 s),按照是否加入阿司匹林分为实验组和对照组.分别检测实验组和对照组细胞活性;利用AnnexinV-EGFP法检测细胞凋亡率:real time RT-PCB方法定量分析Caveolin-1 mRNA的量随照射剂量不同,及加入抗氧化剂前后所产生的变化.结果 随UV照射时间延长,单纯紫外线照射组细胞活性,Caveolin-1 mRNA表达量下降,细胞凋亡率增加.加入阿司匹林后,细胞活性增加.5 s,10 s组Caveolin-1 mRNA的表达量较对照组升高,细胞凋亡率较对照组下降(P＜0.05).但是照射20 s的条件下,加药后的细胞凋亡率及Caveolin-1 mRNA的表达量较未加药组无变化(P＞0.05).结论 UV照射可造成人晶状体上皮细胞凋亡.Caveolin-1 mRNA表达量减少,推测Caveolin-1表达量的变化可能与凋亡有关.低剂量的阿司匹林(3μmol/L)可以在一定程度上减少UV照射造成的晶状体上皮细胞凋亡,增加Caveolin-1的表达;但大剂量阿司匹林(＞30 μmol/L)会起到相反的作用,因此找到一个合适安全的剂量范围具有一定临床意义.
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不同损伤条件下热休克蛋白27在人晶状体上皮细胞中的表达
目的 观察不同损伤条件下热休克蛋白27( HSP27)在人晶状体上皮细胞系SRA01中的表达情况.方法 体外培养人晶状体上皮细胞系SRA01,在添加香烟烟雾凝聚物(CSC,25 mg/mL)或过氧化氢(H202,50 mmol/L)条件下培养30 min后,恢复至正常培养条件.分别于处理0,2,4,6,16,24 h时,采用免疫细胞化学、RT-PCR法检测细胞中HSP27的表达情况.结果 在生理和应激情况下,人晶状体上皮细胞内均有HSP27的表达.应激损伤后4h,HSP27 mRNA和蛋白的表达明显增加,8h达高峰,24 h仍维持在较高水平.CSC组细胞HSP27的表达较过氧化损伤组弱(P＜0.05).结论 体外培养的人晶状体上皮细胞中存在HSP27的表达.不同损伤应激可诱导HSP27的表达增加,HSP27可能通过对抗应激作用保护晶状体上皮细胞.
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肿瘤坏死因子对晶状体上皮细胞的粘附移行作用
目的:探讨肿瘤坏死因子α (tumor necrosis factor α, TNF-α) 对晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附移行作用,以及在此过程中整合素分子的表达情况.方法:借助细胞粘附实验和移行实验研究TNF-α对体外培养的牛晶状体上皮细胞在细胞外基质上的粘附和移行,以及整合素抗体封闭后对细胞的影响.TNF-α对细胞表面整合素的表达调节经免疫荧光染色后由流式细胞仪检测.结果:TNF-α可以明显促进晶状体上皮细胞在Ⅳ型胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白上的粘附移行.抗体封闭实验表明整合素β1、α2、α3、α5亚基参与细胞的粘附,在细胞移行中发挥主要作用的是α亚基而非β亚基.流式细胞仪检测表明TNF-α可上调晶状体上皮细胞中整合素的表达.结论:胶原、层粘蛋白、纤维连接蛋白是晶状体囊的主要成分,肿瘤坏死因子α促进晶状体上皮细胞与晶状体囊膜成分的粘附移行,该作用的发挥至少部分通过TNF-α上调整合素分子在细胞上的表达而实现.
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miR-125a-3p在老年白内障中通过靶向p53抑制晶状体上皮细胞凋亡
目的 探究miR-125a-3p与p53之间的关系及miR-125a-3p在老年性白内障中的调控作用.方法 通过对取自白内障患者的晶状体进行microRNA microarray来发现表达有差异的microRNA,再通过靶基因预测,找到调控p53的mi-croRNA;通过目标microRNA的类似物体外瞬转来研究对p53的调控作用.结果 经过microRNA microarray扫描后,得到近169个有差异的microRNA,经过靶基因预测筛选出miR-125a-3p;通过miR-125a-3p类似物的体外转染可抑制p53的表达,进而抑制晶状体上皮细胞凋亡.结论 miR-125a-3p可能与白内障的发病机制有关.
关键词： miR-125a-3p P53 白内障 晶状体上皮细胞 细胞凋亡 -
去整合素Kistrin对兔眼LECs增殖的抑制
目的 探讨不同浓度的去整合素Kistrin对兔眼后发性白内障(Posterior capsular opacification,PCO)发生过程中晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LECs)增殖的抑制作用,以明确Kistrin的眼内有效浓度.方法 制备兔眼PCO模型,行白内障摘除术,术毕3个实验组前房分别注入40 μg/L、80 μg/L、160 μg/L的Kistrin,对照组前房注入林格氏液.术后在裂隙灯显微镜下观察PCO发生情况及形态,于术后14 d及3个月时取材,分别检测晶状体囊膜上LECs增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达.结果 术后第14天实验组LECs的PCNA表达均较对照组降低(P<0.05);第3个月时仅80 μg/L组较对照组明显降低(P<0.05);两个时间点80 μg/L组LECs的PCNA表达均较其余实验组明显降低(P<0.05),40 μg/L组与160 μg/L组间无显著性差异(P>0.05).同一浓度术后第14天与3个月时LECs的PCNA表达比较,仅80 μg/L组差异无显著性,余三组比较差异有显著性.结论 80 μg/L Kistrin术后早期及3个月均可有效地抑制兔眼PCO的发生,可作为进一步研究去整合素抑制PCO形成研究的较适宜浓度.
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老年白内障晶状体上皮细胞凋亡及凋亡基因的表达
目的 探讨老年白内障与晶状体上皮细胞凋亡的关系.方法 TUNEL法检测凋亡细胞百分率;免疫组化法检测P53、bax在老年白内障晶状体上皮细胞中的蛋白表达;RT-PCR检测p53、bcl-2在老年白内障晶状体上皮细胞中的mRNA的表达水平.结果 凋亡细胞百分率为5%～47.4%,P53蛋白在老年白内障晶状体上皮细胞中的表达率为15%～28%,bax蛋白的表达率为5%～16%,p53 mRNA的表达率为0.48～0.78,bax mRNA的表达率为0.34～0.67.结论 老年白内障的发生与晶状体上皮细胞凋亡存在一定的相关性.
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老年性白内障晶状体上皮细胞凋亡及caspase-3表达
目的 探讨晶状体上皮细胞(LECs)凋亡及凋亡相关基因caspase-3表达与老年性白内障发生的关系.方法 选择老年性白内障患者25例为研究组,收集患者行白内障手术时环形撕囊后获取的晶状体前囊膜标本.同时收集成人尸体解剖非白内障眼球所获取的晶状体前囊膜标本10例为对照组.采用免疫组化法检测两组的晶状体前囊膜组织中凋亡相关基因caspase-3的表达,并应用TUNEL方法检测两组LECs的凋亡情况.结果 研究组LECs凋亡细胞百分率为(30.4±3.7)％,对照组LECs凋亡细胞百分率为(0.27±0.12)％.研究组显著高于对照组(t=11.59,P＜0.01).研究组LECs caspase-3蛋白的阳性表达率为84.0％(21/25),而对照组为10.0％(1/10),研究组显著高于对照组(t=12.05,P＜0.01).25例老年性白内障患者的LECs中caspase-3蛋白的表达与细胞凋亡数间呈正相关(r=0.621,P＜0.01).结论 LECs凋亡及caspase-3表达在老年性白内障的发生发展过程中起重要作用.
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衰老与年龄相关性白内障的关系
年龄相关性白内障(age-related cataract,ARC)又称为老年性白内障,已成为致盲的主要原因.随着年龄的增长,晶状体的有关化学成分、含量和代谢都发生了改变,使晶状体逐渐老化,透明度降低,终导致本病的发生.笔者就新近资料对衰老与年龄相关性白内障的关系作一综述.
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茶多酚对高糖诱导人晶状体上皮细胞凋亡的影响
目的:探讨茶多酚对高糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLECs)凋亡的影响 方法:建立高糖诱导的HLECs模型,用不同浓度的茶多酚干预,MTT比色法检测细胞存活率,电子显微镜观察细胞形态,透射电镜观察细胞内超微结构变化,Western Blotting检测凋亡相关蛋白的表达水平结果:高浓度葡萄糖抑制了HLECs活性,葡萄糖干预后细胞活性下降到42.65％± 4.12％,与阴性对照组(96.07％±4.02％)比较差异具有统计学意义(P＜0 01)用不同浓度茶多酚处理后,HLECs活性分别提高到55.33％± 4.15％,72.90％± 3.36％和76.00％± 3.79％,与氧化损伤组比较差异具有统计学意义(P＜0.05);高浓度葡萄糖改变了HLECs形态及生长情况,而用茶多酚干预的高糖条件下的HLECs则较好的保持了上皮细胞的形态;高浓度葡萄糖诱导HLECs凋亡反应的发生,引起凋亡相关蛋白表达水平改变,茶多酚抑制了Bax水平的升高,促进了Bcl-2水平的下降.结论:茶多酚可以抑制高糖诱导的HLECs的凋亡,对糖尿病性白内障具有预防作用.
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后发性白内障的发生机制及防治研究现状
后囊膜混浊(posterior capsule opacification,PCO)又称后发性白内障,是现代白内障囊外摘除术后常见的并发症.后发性白内障的发生与患者手术时的年龄,囊袋的大小,囊口的连续性,血房水屏障破坏释放的炎症介质,残留的晶状体上皮细胞及晶状体皮质的多少,以及所植入的人工晶状体的材质等.研究者对手术方式的改进及人工晶体材料设计进行研究,以降低白内障囊外摘除术后后囊膜混浊的发生率,但它仍然是一个重大的没有解决的难题.Nd:YAG激光后囊膜切开术是目前治疗PCO常用的有效方法,但仍会出现一定的并发症,并且治疗费用较高.研究者进一步改进手术技术,人工晶体材料设计和在使用药物治疗方面,选择即安全有效和较少的费用消除PCO.
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槲皮素可缓解过氧化氢诱导的人晶状体上皮细胞凋亡
目的 探讨槲皮素是否对过氧化氢诱导的晶状体上皮细胞(HLE-B3)氧化损伤具有缓解作用.方法 用H2O2处理HLE-B3细胞,建立氧化应激模型.用MTT方法 检测细胞活力变化,同时利用ROS检测细胞内槲皮素对细胞氧化损伤的缓解效果.结果 槲皮素单独处理不会促进细胞增殖.在H2 O2处理下,槲皮素可有效减少细胞内活性氧的堆积,进而抑制H2 O2对晶状体上皮细胞造成的氧化损伤.结论 槲皮素能够显著缓解H2 O2诱导的氧化应激损伤.
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炎症介质通过刺激炎症细胞分泌炎症因子促进晶状体细胞增殖
目的：探讨炎症介质（脂多糖，LPS）对晶状体上皮细胞增殖能力的作用。方法利用脂多糖以及人单核细胞系（ THP－1）模拟晶状体上皮细胞炎症微环境，利用MTT方法检测细胞活力。结果脂多糖单独刺激不能诱导细胞增殖，但是与THP－1预孵育后，获得的条件培养基可刺激晶状体上皮细胞增殖。结论炎症细胞分泌的炎症因子是促进晶状体细胞增殖的主要因素。
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天麻素对高糖条件下人晶状体上皮细胞氧化应激的影响
目的 探讨天麻素对高糖诱导的人晶状体上皮(human lens epithelial,HLE)细胞氧化应激的影响.方法 建立高糖诱导的HLE细胞氧化损伤模型,用不同浓度的天麻素干预,MTT检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,透射电镜观察超微结构变化,比色法检测凋亡因子表达变化.结果 MTT结果显示用1.0×10-6mol·L-1和1.0×10-5 mol·L-1天麻素处理后,HLE细胞活性分别提高到(62.00±3.74)％和(79.57±5.26)％,与氧化损伤组(45.42 ±4.14)％比较差异具有统计学意义(P＜0.05);流式细胞计数结果显示预先给予1.0×10-6 mol·L-1和1.0 ×10-5 mol·L-1的天麻素作用后,HLE细胞凋亡率分别下降到(30.33±3.92)％和(13.45％±2.53)％,与氧化损伤组(43.83 ±4.25)％比较差异具有显著性(P＜0.05);电镜观察结果显示伴随天麻素作用浓度的增加,细胞形态亦逐渐得到改善;此外,天麻素可以抑制高糖诱导的HLE内凋亡因子的表达,抑制效应与剂量正相关.电镜观察结果显示伴随天麻素作用浓度的增加,细胞形态亦逐渐得到改善.此外,天麻素可以抑制高糖诱导的HLE内凋亡因子的表达,抑制效应与剂量正相关.结论 天麻素可以抑制高糖诱导的人HLE细胞的凋亡,对糖尿病性白内障具有预防作用.
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黄芪甲苷对高糖条件下人晶状体上皮细胞氧化应激的保护作用
目的 探讨黄芪甲苷(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对高糖刺激下人晶状体上皮(human lens epithelium,HLE)细胞氧化应激的影响.方法 采用40 mmol·L-1的葡萄糖培养HLE细胞建立细胞氧化损伤模型,用不同浓度的黄芪甲苷干预,CCK-8比色法检测细胞活力,倒置显微镜观察细胞形态并拍照,Hoechst-PI双染法观察细胞核凋亡,H2DCFDA检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测caspase-3,caspase-9的表达情况.结果 CCK-8结果显示,用5μmol·L-1、10 μmol·L-1黄芪甲苷处理后,HLE细胞存活率分别提高到(60.86±3.11)％和(80.67±3.70)％,与高糖组(43.65±3.43)％比较差异具有统计学意义(P＜0.05);细胞形态学观察结果及Hoechst-PI双染法结果显示,黄芪甲苷能够抑制HLE细胞凋亡;H2DCFDA荧光探针染色结果显示,黄芪甲苷处理后HLE细胞内ROS生成量下降,氧化损伤细胞减少;此外,黄芪甲苷可以抑制高糖诱导的HLE内caspase-3及caspase-9的表达,其抑制效应与剂量正相关.结论 黄芪甲苷可以抑制高糖诱导的人HLE细胞氧化损伤及凋亡的发生,对糖尿病性白内障具有预防作用.
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晶状体上皮细胞DNA损伤的SCGE测定法
目的 研究晶状体上皮细胞DNA的损伤.方法 应用单细胞凝胶电泳(SCGE)法测定氧化、辐射及细胞外高糖、高钙环境对晶状体上皮细胞DNA的损伤.结果 对照组中晶状体上皮细胞呈圆形无拖尾,表明其DNA未受损伤.各处理组细胞呈不同程度的典型彗星图像,头尾分明,与对照组相比差异具有显著性(P＜0.001).结论 以SCGE法测定出多种因素均可导致体外培养的晶状体上皮细胞DNA损伤,考虑其可能与白内障的形成有关.
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单细胞凝胶电泳在检测晶状体上皮细胞DNA氧化损伤中的应用
随着对晶状体上皮细胞氧化损伤的深入研究,多种方法被用来检测晶状体上皮细胞DNA的氧化损伤程度,近年来国内外所应用的单细胞凝胶电泳技术而得到了越来越普遍的重视,相关实验研究亦日渐增多,现就总结此项技术在检测晶状体上皮细胞DNA氧化损伤中的应用作一综述.
