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HIV Tat基因文献资料
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HIV-1 Tat真核表达载体的构建及在内皮细胞的表达
目的:构建HIV-1 Tat真核表达质粒,为研究Tat在HIV-1致病机制中的作用奠定实验基础.方法:以pCV1(tat and rey)质粒为模板,用PCR方法扩增HIV-1 Tat基因,克隆至P cDNA3.1(+)表达载体,酶切及测序鉴定重组体.重组质粒转染ECV304细胞,用RT-PCR、转染HIV-1 LTR荧光报告基因的方法检测tat基因的表达及活性.结果:经酶切及测序鉴定,成功构建pcDNA3.1(+)-Tat重组质粒.重组体转染ECV304细胞,建立稳定表达细胞株,应用RT-PCR可检测到Tat基因mRNA的表达;荧光仪检测Tat蛋白可明显促进荧光素酶在ECV304细胞内的表达.结论:成功构建HIV-1Tat真核表达载体,并建立了HIV-1 Tat内皮细胞稳定表达细胞株.
