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gp160嵌合基因文献资料
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HIV-1 gp160多表位嵌合基因的构建及表达蛋白的免疫原性分析
目的:HIV感染引起的AIDS已经成为严重影响人类健康和社会发展的全球性疾病.酶联免疫吸附试验和免疫印迹检验组合则被认为是HIV检测的"金标准".因此本实验构建gp160的抗原多表位融合基因及在原核系统的高表达,为HIV抗体测定提供特异、价廉的抗原.方法:选定HIV-1 gp160基因中三个片段包含较多抗原表位的区域,设计带有酶切位点的引物,用PCR的方法从HIV-1HXB2全基因扩增编码这三个片段的基因序列,通过质粒提取、酶切、测序方法鉴定基因片段的正确性,SDS-PAGE和Western Blot测定融合蛋白的抗原特异性.结果:构建的HIV-1 gp160多表位嵌合基因的原核表达质粒,酶切和测序结果表明基因序列正确,基因全长969bp.在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达的重组蛋白分子量为37 kDa,以包涵体的形式存在.结论:应用western blot测定10例正常人和12例HIV/AIDS病人血浆显示HIV-1 gp160多表位融合蛋白具有良好的抗原特异性.成功构建了高表达HIV-1 gp160多表位蛋白的原核表达系统,纯化的融合蛋白有较强的抗原特异性.
