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P120ctn及E-cad在宫颈鳞癌组织和细胞系中的表达及生物学意义
目的:探讨P120连环蛋白(P120catenin,P120ctn)及E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在宫颈鳞癌组织和宫颈鳞癌细胞系(Caski、Siha)中的表达、分布及其生物学意义.方法:免疫组织化学、免疫细胞化学及RT-PCR检测正常宫颈组织、宫颈鳞癌组织、人脐静脉内皮细胞(HECV)、Caski、Siha细胞系中P120ctn及E-cad的表达与分布.结果:①正常宫颈组织中P120ctn及E-cad表达在胞膜,胞浆少见;宫颈鳞癌中P120ctn及E-cad胞膜表达降低,出现胞浆表达;②HECV细胞系中P120ctn大部分表达在胞膜,E-cad胞膜表达量较少;Caski、Siha细胞系中P120ctn胞膜表达量减少、胞浆表达量增加,E-cad胞膜胞浆表达都较少;③HECV及Caski、Siha细胞系中都有P120ctn与E-cad mRNA表达,P120ctnmRNA在HECV、Caski、Siha细胞系中无表达量差异,E-cad mRNA在Caski、Siha细胞系中表达量低于HECV.结论:P120ctn及 E-cad的异常表达与宫颈鳞癌发生发展密切相关,异常表达与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移有关,与年龄、临床分期无关.
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磷酸化P120ctn在宫颈腺癌Hela、鳞癌Caski细胞系中的表达及意义
目的:探讨P120连环蛋白(P120ctn)及磷酸化P120ctn在宫颈腺癌(Hela)、鳞癌(Caski)细胞系及正常人脐静脉内皮细胞系(HECV)中的表达,分析P120etn表达量的改变是否涉及P120ctn磷酸化修饰.方法:应用蛋白质印迹实验(western-blotting)检测Hela、Caski细胞系及HECV中P120ctn与磷酸化P120etn的表达.结果:①HECV、He-la、Caski细胞系中都有P120etn与磷酸化P120ctn的表达,P120ctn与磷酸化P120ctn在三种细胞系之间有统计学差异(P<0.05);②P120ctn在HECV细胞中表达量高于Hela、Caski细胞(P<0.05),Hela与Caski细胞之间没有表达量差异(P>0.05);③磷酸化P120etn在Hela、Caski与HECV三种细胞之间有表达量差异(P<0.05),HECV细胞表达量低,Hela其次,Caski细胞高.结论:磷酸化P120ctn在宫颈肿瘤细胞系中的表达量高于正常细胞系,P120ctn的磷酸化修饰可能参与了宫颈肿瘤细胞的生物学行为.
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百草枯所致血管内皮损伤与p120连环蛋白的关系及芒果苷的保护作用
目的 探讨百草枯中毒导致的内皮屏障功能障碍与p120连环蛋白(p120-ctn)的关系,以及芒果苷对p120-ctn的调节作用.方法 采用二室弥散模型培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC),并分为对照组(给予含10％胎牛血清的DMEM培养液)、百草枯组(给予终浓度为0.05 μmol/L的百草枯培养液)和芒果苷干预组(百草枯培养基孵育30 min后加入终浓度为20 μmol/L的芒果苷继续孵育).各组分别培养6、12、24、48、72 h后测定细胞通透性;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定p120-ctn异构体p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达;采用免疫荧光分析并镜下观察p120-ctn的分布.结果 与对照组比较,百草枯组和芒果苷组细胞通透性均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值[(29.86±3.98)％、(24.39±2.79)％比(11.71±1.67)％,均P＜ 0.05];而芒果苷组各时间点细胞通透性均显著低于百草枯组(均P＜0.05).百草枯处理6 h p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达(灰度值)及p120-ctn蛋白表达(灰度值)即较对照组明显降低(p120-ctn 1A mRNA:0.150±0.024比0.433±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.316±0.043比0.701±0.020,p120-ctn蛋白:0.485±0.031比0.763±0.038,均P＜0.01);而芒果苷组p120-ctn 1A、p120-ctn 3A的mRNA表达及p120-ctn蛋白表达于干预6h即较百草枯组明显增加(p120-ctn 1AmRNA:0.281 ±0.021比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:0.602±0.042比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.675±0.031比0.485±0.031,均P＜0.01),并均随时间延长呈增加趋势,于72 h达峰值(p120-ctn 1A mRNA:1.376±0.128比0.150±0.024,p120-ctn 3A mRNA:1.251±0.059比0.316±0.043,p120-ctn蛋白:0.844±0.050比0.485±0.031,均P＜0.01).荧光显微镜下观察,对照组p120-ctn主要分布在胞膜上,胞质内略有表达,胞核无表达;百草枯组随时间延长,细胞膜上p120-ctn表达逐渐减少,胞质和核内表达增多,细胞膜边缘模糊,细胞间隙增宽;芒果苷组相应时间点细胞膜上p120-ctn表达有所改善,胞质和核内表达减少.结论 p120-ctn下调与百草枯中毒后内皮通透性增加的机制相关,芒果苷可通过保护p120-ctn而减轻内皮损伤.
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β-catenin、p120ctn在尖锐湿疣及宫颈鳞癌中的表达和意义
目的 探讨β-连环蛋白及p120-连环蛋白(p120ctn)在尖锐湿疣及宫颈鳞癌组织中的表达及生物学意义.方法 采用免疫组化SP法分别检测β-catenin、p120ctn在尖锐湿疣和宫颈鳞癌中的表达.结果 β-catenin、p120ctn在尖锐湿疣和宫颈鳞癌组织中的表达程度和阳性表达率均显著低于正常对照组,有显著性差异(P＜0.01);尖锐湿疣组和宫颈鳞癌组β-catenin和p120ctn的表达程度比较有显著性差异(P＜0.01).结论 β-catenin、p120ctn在尖锐湿疣和宫颈鳞癌的发病机制中起一定的作用,可作为宫颈癌前病变的参考指标.
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Dishevelled-1,3影响肺癌细胞侵袭机制的研究
目的 散乱蛋白(Dvl)亚家族成员在非小细胞肺癌中均存在过表达,但不同亚型对肺癌细胞侵袭能力的影响和可能的机制尚不清楚.方法 检测转染Dvl-1和Dvl-3后肺癌细胞系T细胞转录因子(Tcf)转录活性的改变,β-连环蛋白(β-catenin)和p120连环蛋白(p120ctn)的表达,以及对细胞侵袭能力的影响.结果 Dvl-1和Dvl-3过表达后,肺癌细胞中pl20ctn蛋白水平均上调,但Dvl-3可明显上调pl20ctn mRNA水平.同时,Dvl-1过表达后Tcf转录活性明显上调,而Dvl-3未明显影响Tcf转录活性.应用β-catenin和p120ctn抗体抑制β-catenin和p120ctn蛋白作用后,可分别显著抑制由Dvl-1和Dvl-3增强的细胞侵袭能力.结论 Dvl-1可能主要通过经典Wnt通路中的β-catenin,而Dvl-3则可能主要通过与非经典Wnt通路相关的p120ctn影响肺癌细胞的生物学行为.
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钠泵抑制剂哇巴因对ECV304细胞连接相关分子表达的影响
目的:探讨钠泵抑制剂哇巴因对细胞连接相关分子表达的影响.方法:以不同浓度哇巴因作用ECV304细胞,用倒置相差显微镜和透射电镜观察细胞形态变化;通过四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长抑制作用;用Hoechst33342/PI双荧光染色、荧光显微镜分析细胞死亡特征;应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞连接相关分子钠泵β1亚单位、内皮钙黏蛋白、 P120连环蛋白1A和P120连环蛋白3A mRNA的表达.结果:哇巴因以浓度和作用时间依赖的方式抑制ECV304细胞生长;10 μmol/L哇巴因作用24 h,引起细胞坏死;0.1 μmol/L哇巴因作用24～48 h,细胞明显脱落,细胞间连接丧失,细胞出现染色质凝集、边移、凋亡小体形成等凋亡特征.RT-PCR结果显示钠泵β1亚单位、内皮钙黏蛋白和P120连环蛋白1A表达下降,P120连环蛋白3A表达上调.结论:哇巴因调节ECV304细胞连接相关分子表达从而影响其黏附和存活.
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宫颈鳞癌组织和细胞系中P120ctn及E-cad的表达及生物学意义
目的:探讨P120连环蛋白(P120 catenin,P120ctn)及E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在宫颈鳞癌组织和宫颈鳞癌细胞系(Caski、Siha)的表达、分布及其生物学意义. 方法:免疫组织化学法检测宫颈鳞癌组织,免疫细胞化学法及RT-PCR检测宫颈鳞癌细胞系中P120ctn及E-cad的表达与分布.结果:(1)正常宫颈组织中P120ctn及E-cad在胞膜,胞浆少见表达;宫颈鳞癌中P120ctn及E-cad胞膜表达降低,出现胞浆表达,P120ctn及E-cad的异常表达与癌细胞分化程度、淋巴结转移有关,与年龄、临床分期无关;(2)正常对照细胞即人脐静脉内皮细胞系(HECV)中P120ctn大部分在胞膜表达,Caski、Siha细胞系中P120ctn胞膜表达量减少,胞浆表达量增加;E-cad在HECV中胞膜胞浆表达较少,Caski、Siha中胞浆表达较少,胞膜表达更少;(3)HECV及Caski、Siha细胞系中都有P120ctn与E-cad mRNA表达,P120ctn mRNA在HECV、Caski、Siha细胞系表达量无显著性差异(P＞0.05),E-cad mRNA在Caski、Siha细胞系中表达量低于HECV(P＜0.05). 结论:P120ctn及 E-cad的异常表达与宫颈鳞癌发生发展密切相关,其异常表达与肿瘤细胞分化程度、淋巴结转移有关,两者异常变化可作为宫颈癌变的参考依据.
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P120ctn及相关蛋白在宫颈鳞癌中的表达及生物学意义
目的 探讨宫颈鳞癌患者P120连环蛋白(P120ctn)、β连环蛋白(β-cat)与E钙黏蛋白(E-cad)的表达及生物学意义.方法 应用免疫组化SP法检测P120ctn、β-cat及E-cad在正常宫颈组织和宫颈鳞癌组织中的表达.结果 ①正常宫颈组织中P120ctn、β-cat及E-cad表达在胞膜,胞浆少见;宫颈鳞癌中P120ctn、β-cat及E-cad胞膜表达降低,出现胞浆表达;β-cat还有胞核表达;三者异常表达与癌细胞分化程度、淋巴结转移相关.②P120ctn异常表达与β-cat及E-cad异常表达明显正相关.结论 P120ctn及相关蛋白异常表达可作为宫颈鳞癌诊断的辅助指标,并为判断疾病发展转移提供客观依据.
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连环蛋白家族新成员——P120ctn
连环蛋白家族早被分为α、β、γ3类,与E-钙粘蛋白共同作用参与细胞黏附.P120连环蛋白作为新发现的Cat家族成员之一,在保持细胞黏附中起重要作用,参与了胚胎组织和神经系统形成,同时也参与肿瘤发生发展,其表达缺失或下降将导致细胞分化丧失和具有侵袭性,容易发生浸润和转移.
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血管内皮钙黏蛋白对非小细胞肺癌侵袭转移的影响及其作用机制
目的 探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中血管内皮钙黏蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)的表达和其对细胞侵袭迁移能力的影响及作用机制.方法 采用免疫组织化学、RT-PCR法检测VE-cadherin在人NSCLC组织和癌旁组织中的表达;Westernblot法检测VE-cadherin在NSCLC细胞株中的表达;Transwell实验检测VE-cadherin对NCI-H460细胞侵袭迁移能力的影响;免疫荧光检测VE-cadherin与P120ctn在NCI-H460细胞上的定位;免疫共沉淀检测VE-cadherin与P120ctn的连接情况.结果 VE-cadherin在肺癌组织中表达水平较癌旁组织上调,其表达与NSCLC有无吸烟史、有无淋巴结转移有关(P＜0.05).VE-cadherin在PG、NCI-H460、A549细胞株表达水平不同,干扰VE-cadherin表达后,NCI-H460细胞侵袭迁移能力下调,低氧可诱导VE-cadherin在NCI-H460细胞表达增强,VE-cadherin与P120ctn存在结构上的连接.结论 VE-cadherin可能通过缺氧信号活化及P120ctn介导参与NSCLC侵袭、转移.
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p120连环蛋白表达变化对NF-κB信号通路的影响及有关机制
目的 通过甲醛(FA)刺激建立体外气道炎症反应模型,探讨甲醛刺激后人气道上皮细胞株(16HBE)中p120连环蛋白(p120ctn)的表达变化及其对核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的影响,从而进一步分析气道炎症发生发展的有关机制.方法 培养的16HBE细胞分为对照组和实验组,实验组用100 μmol/L的甲醛处理.采用Western blot技术检测甲醛处理不同时间后16HBE细胞p120ctn、NF-κB p65、NF-κB 抑制蛋白(IκBα)等蛋白的表达;定量酶联免疫吸附试验(ELISA)检测甲醛处理不同时间后16HBE细胞中白细胞介素8(IL-8)的表达,并与对照组进行比较.结果 ① p120ctn在正常16HBE细胞中含量丰富,甲醛刺激后,p120ctn表达下调,并呈时间依赖性.②甲醛刺激后引起16HBE细胞中NF-κB p65总蛋白表达量呈时间依赖性增加.③ELISA检测显示甲醛刺激后NF-κB靶基因IL-8表达明显增强.④ 甲醛刺激后NF-κB抑制蛋白IκBα表达减少;核内NF-κB p65表达增多.⑤甲醛刺激后p120ctn的表达与NF-κB的表达呈负相关.结论 在甲醛引起的气道炎症反应中,p120ctn可能通过IκBα降解、释放NF-κB p65入核及促进IL-8表达而负性调节NF-κB信号途径的活化,从而抑制气道炎症反应.
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CXCR3和P120ctn与乳腺癌关系的研究进展
乳腺癌是女性排名第一的恶性肿瘤,乳腺癌易发生侵袭转移,严重危害女性健康.随着分子生物学研究领域的快速发展,人们对乳腺癌发生及演进机制的了解不断深入,乳腺癌的分子生物学发病机制和预后因素的探讨已成为目前研究的热点.其中趋化因子受体3(CXC-chemokine receptor3,CXCR3)和P120连环蛋白(P120ctn)与肿瘤的发生、发展、侵袭、恶变有一定关系.该文就这两者与乳腺癌关系的研究概况作一综述.
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P120连环蛋白及其相关转录因子kaiso与肿瘤的关系
转录因子kaiso是新近发现的BTB-POZ蛋白家族的重要成员,是Armadillo连环蛋白及细胞辅助黏附因子P120连环蛋白(P120-catenin,P120ctn)的特异性绑定伙伴,已经被证实具有转录抑制功能.P120ctn可解除kaiso介导的转录抑制作用,并且P120ctn在肿瘤中的亚细胞定位影响着kaiso蛋白的活性.Kaiso不像其他典型的POZ蛋白,其拥有双重的DNA序列识别,并且kaiso的细胞质和细胞核定位依赖于肿瘤组织的微环境.对于P120ctn来说,基于它在细胞内的定位不同,它发挥了不同的作用,比如钙粘蛋白依赖性的细胞间的粘附,肌动蛋白细胞骨架的再塑造和位于细胞核内时对kaiso活性的影响.本文就核内P120ctn和其伙伴转录因子kaiso以及他们在肿瘤基因表达调控中的角色予以综述.
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p120ctn在皮肤基底细胞癌组织中的表达及意义
目的 探讨p120ctn (p120连环蛋白)在皮肤基底细胞癌组织中的表达及意义.方法 采用免疫组化SP法检测p120ctn在30例皮肤基底细胞癌和10例正常皮肤组织中的表达.结果 正常皮肤p120ctn细胞膜着色,呈线状强表达.BCC中细胞膜表达较弱,2组间差异有统计学意义(P＜0.05),少数细胞浆内表达.结论 p120ctn异常表达在基底细胞癌发生发展中可能起作用.
