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局部亚低温对再灌注治疗时间窗的影响
目的:脑缺血再灌注期间进行局部亚低温干预,观察其对再灌注治疗时间窗的影响并研究其机制.方法:将72只Wistar大鼠随机分为假手术组6只;大脑中动脉闭塞(MCAO)24小时组6只;常温再灌注组30只;亚低温再灌注组30只.动物均在再灌注24小时后处死,但MCAO 24小时组大脑中动脉闭塞24小时后直接处死.采用TTC染色观察梗死体积,用干-湿质量法测定脑含水量,用原位末端标记(TUNEL)观察神经细胞凋亡的变化,采用免疫组化法检测大鼠模型的Bcl-2、Bax及水通道蛋白4(aquaporin4,AQP4)的表达.结果:与脑梗死的近期结局MCAO 24小时组的梗死体积、脑含水量、TUNEL阳性细胞数、及Bcl-2、Bax、AQP4的表达相比较:常温组MCAO 2～3小时再灌注24小时有统计学差异(P＜0.01),MCAO 4～6小时再灌注24小时没有统计学差异(P＞0.05);亚低温组MCAO 2～4小时再灌注24小时各组有统计学差异(P＜0.01);MCAO 5～6小时再灌注24小时没有统计学差异(P＞0.05).亚低温再灌注组各时相点的梗死体积、脑含水量、TUNEL阳性细胞数、Bax、AQP4的表达均显著低于相应常温组,Bcl-2的表达显著高于常温组(P＜0.01,P＜0.05).结论:再灌注期间实施局部亚低温可延长再灌注治疗时间窗,其机制可能与抑制Bax的表达提高Bcl-2的表达从而抑制凋亡,抑制AQP4的表达从而保护脑微循环有关.
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鼻咽鳞癌组织中p53和bcl-2蛋白的表达及临床意义
目的:研究细胞凋亡相关基因p53和bcl-2在鼻咽鳞癌中的表达及相互关系,初步探讨他们在鼻咽鳞癌的发生、发展中的生物学意义.方法:应用免疫组化SP法对64例鼻咽鳞癌组织标本的p53和bcl-2基因蛋白表达进行检测.同时取10例鼻咽部炎症组织标本作对照.结果:64例鼻咽鳞癌中p53和bcl-2基因蛋白表达的阳性率分别为76.56%(49/64)和89.06%(57/64),其阳性表达率与鼻咽鳞癌颈部淋巴结转移有关,均P=0.01;而与患者的年龄、性别、临床分期和临床近期疗效无关.10例鼻咽部炎症标本的p53和bcl-2基因蛋白的表达均为10%(1/10).结论:鼻咽鳞癌组织中有p53和bcl-2基因蛋白的高表达,他们在鼻咽鳞癌的发生发展中可能起了重要作用.
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非小细胞肺癌组织中bcl-2蛋白的表达与预后
目的:研究抗凋亡基因bcl-2在非小细胞肺癌组织中的表达、相互关系及对预后的影响和意义.方法:应用SP法检测94例非小细胞肺癌的石蜡包埋标本中bcl-2蛋白的表达,同时取10例正常肺组织作对照.结果:在非小细胞肺癌组织中,bcl-2蛋白在鳞癌中的阳性率为63.64%(35/55),腺癌中为41.02%(16/39),两者差异无统计学意义.χ2=3.83,P＞0.05;bcl-2蛋白在中分化的鳞癌和腺癌中阳性率为61.11%(22/36),在低分化的鳞癌和腺癌中阳性率为64.86%(24/37),与高分化的鳞癌和腺癌(23.81%,5/21)分别相比差异有统计学意义,χ2=5.98,P＜0.05和χ2=7.46,P＜0.01;bcl-2阳性表达患者3年生存率为27.45%(14/51),而阴性表达患者3年生存率为51.16%(22/43),两者差异有统计学意义,χ2=4.59,P＜0.05.在正常肺组织标本中,表达为阴性.结论:bcl-2蛋白高表达患者临床预后差,故bcl-2蛋白的表达可作为判断预后指标之一.
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凋亡和相关蛋白bcl-2在肺癌组织中的表达及对预后的影响
目的:研究细胞凋亡及凋亡相关蛋白bcl-2在肺癌组织中的表达水平,及其对预后的影响.方法:应用DNA缺口末端标记技术和免疫组化方法检测116例肺癌患者组织中细胞凋亡和bcl-2蛋白表达水平.结果:116例肺癌患者中,细胞凋亡数量达到或超过0.1%的病例占48.3%(56/116),bcl-2蛋白阳性表达的病例占51.7%(60/116);单因素分析显示,肺癌患者预后的影响因素有凋亡(x2=8.31,P=0.0039)、bcl-cl-2(x2=4.41,P=0.0357)、淋巴结转移(x2=19.34,P=0.0001)和TNM分期(x2=18.54,P=0.0001);COX模型多因素分析显示,淋巴结转移(x2=19.28,P=0.0010)和bcl-2蛋白阳性表达(x2=5.80,P=0.0160)是肺癌患者的预后不良因素.结论:凋亡及凋亡相关蛋白bcl-2影响肺癌患者的生物学行为及预后.
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骨肉瘤细胞凋亡相关基因的表达及其临床意义
目的探讨反映骨肉瘤预后的蛋白标记物.方法对骨肉瘤石蜡组织作免疫组化和Tunel染色,研究p53、c-myc和bcl-2基因的表达与肿瘤细胞凋亡指数(AI)的关系,及其与病理类型和患者预后的关系.结果 p53、c-myc和bcl-2的表达水平与细胞凋亡指数呈负相关,与病理类型无相关性.p53、c-myc、bcl-2和细胞凋亡指数与患者远期生存密切相关.结论 p53、c-myc和bcl-2的表达水平以及细胞凋亡指数可作为判断骨肉瘤恶性程度和预后的指标,可指导临床进行治疗.
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喉鳞癌蛋白激酶C与Bcl-2基因表达的相关性
目的探讨蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)及Bcl-2基因在喉鳞癌组织表达及细胞凋亡中的意义.方法采用免疫组化SP法检测28例喉癌手术切除的组织标本中PKC、Bcl-2基因的表达情况,25例声带息肉作为对照.结果喉鳞癌组织中Bcl-2基因的阳性细胞表达率显著高于对照组(P＜0.01),PKC蛋白的阳性细胞表达率显著高于对照组(P＜0.01),且PKC与Bcl-2基因的表达呈明显正相关(r=0.0875).结论喉癌组织细胞中PKC表达增多与凋亡抑制密切相关,推测喉癌组织细胞凋亡抑制可能是通过PKC这一信号转导途径实现的.
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通痹灵对CIA大鼠软骨细胞凋亡及其调控基因p53、Bcl-2表达作用的比较研究
目的探讨中药通痹灵在类风湿关节炎(RA)发病中对软骨细胞凋亡及其基因p53、Bcl-2调控的作用机制.方法采用大鼠CIA模型,分别予通痹灵、甲氨蝶呤片(MTX)、雷公藤治疗36 d,关节软骨免疫组化染色,计算机图像分析系统对软骨p53、Bcl-2基因蛋白及细胞凋亡的表达进行分析,比较各组差异.结果 CIA大鼠软骨细胞中存在高度活跃的p53蛋白表达,通痹灵可以下调细胞中过度活跃的p53蛋白表达,MTX高剂量及雷公藤高剂量的作用不显著;大鼠软骨细胞Bcl-2蛋白表达呈抑制状态,通痹灵低剂量组明显上调Bcl-2蛋白的低表达水平,其次为雷公藤高剂量组;大鼠软骨细胞存在明显的凋亡亢进,通痹灵明显下调细胞凋亡水平.结论通痹灵能通过调整过度表达的p53蛋白与低表达的Bcl-2蛋白,抑制软骨细胞的过度凋亡;MTX与雷公藤对凋亡的作用与Bcl-2基因家族的调控密切相关,与p53相关基因的相关性不显著.
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反义bcl-2 和反义survivin对人神经母细胞瘤细胞系SK-N-MC细胞生长的作用
目的研究反义bcl-2和反义survivin(svv)对人神经母细胞瘤(NB)细胞系SK-N-MC细胞生长的作用.方法利用基因重组技术,采用定向克隆构建在真核细胞中能够稳定表达反义bcl-2 或反义svv 的逆转录病毒载体PBabe puro-Asbcl-2和PBabe puro-Assvv,并分别经脂质体LipofectamineTM介导转染人NB细胞株SK-N-MC细胞,经嘌呤霉素(2.0 μg/ml)筛选得到抗性克隆,同时以空载体Pbabe puro 转染SK-N-MC作为对照;以免疫组化和Western 印迹分析反义bcl-2、反义svv对细胞内源性Bcl-2、SVV蛋白质的表达抑制作用,应用MTT法研究细胞(5×103 /孔)的生长和增殖情况,并接种于裸鼠(3只/组),观察107 个细胞在6周时的成瘤情况,以研究反义bcl-2、反义svv对SK-N-MC细胞生长的作用.结果反义bcl-2转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Asbcl-2中的Bcl-2表达明显降低,反义svv转染后的细胞SK-N-MC/PBabe puro-Assvv中的SVV表达也明显降低;且这两种细胞均生长缓慢, 裸鼠移植瘤体积均明显小于SK-N-MC原始细胞或转染空载体的细胞接种形成的移植瘤.结论稳定表达的反义bcl-2、反义svv均能够有效抑制SK-N-MC细胞内源性相应蛋白质Bcl-2、SVV的表达,提示这两个基因在NB细胞的肿瘤形成中均具有一定的作用.
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藻酸双酯钠对大鼠急性脑缺血再灌注后Bcl-2,Bax表达的影响
目的:探讨大鼠急性脑缺血再灌注后Bcl-2,Bax表达及藻酸双酯钠对大鼠急性脑缺血再灌注后Bcl-2,Bax表达的影响.方法:实验于2004-01/04在华北煤炭医学院形态实验室完成.96只健康雄性Wister大鼠用随机数字表法随机分成4组:脑缺血组(42只)、藻酸双酯钠治疗组(42只)、假手术组(6只)、正常对照组(6只).前两组又分为7组:即缺血2 h再灌注1,3,6,12,24,48和72 h组(n=6).采用线栓法制作大鼠大脑中动脉阻断再灌注模型,用免疫组织化法分别检测缺血组与藻酸双酯钠治疗组大鼠脑缺血2 h再灌注1,3,6,12,24,48和72 h Bcl-2,Bax的表达水平.结果:①皮质缺血周边区Bcl-2及Bax的阳性表达随再灌注时间不同而不同,分别于缺血2 h再灌注3 h[(56.50±7.87)个/高倍视野]及再灌注24 h[(61.00±8.88)个/高倍视野]达高峰.②与缺血组相比,藻酸双酯钠治疗组Bax的表达于再灌注后12 h[(36.67±7.03)个/高倍视野]、24 h[(50.50±6.09)个/高倍视野]、48 h[(36.67±6.77)个/高倍视野]及72 h[(29.83±5.38)个/高倍视野]均显著减少(P＜0.05,P＜0.01),Bcl-2的表达未见明显变化(P＞0.05).结论:藻酸双酯钠可抑制脑缺血再灌注后Bax的表达,对神经细胞具有保护作用.
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胃癌中bcl-2表达及临床病理意义
目的:通过观察bcl-2蛋白在胃癌组织及癌旁组织中的表达,探讨bcI-2所介导的细胞凋亡在胃癌发病中的作用.方法:应用免疫组化染色检测42例胃癌患者胃癌组织及癌旁组织中bcl-2蛋白的表达.结果:bcl-2在胃癌组织及癌旁组织的阳性表达分别为66.7%和28.6%.在胃癌组织中bcl-2的表达高于癌旁组织,有显著性差异(P＜0.05).bcl-2的表达与胃癌分化程度有关(P＜0.05),而与临床病理分期,淋巴结转移无关(P＞0.05).结论:bcI-2所介导的细胞凋亡与胃癌发生和演进有关.
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bcl-2基因反义寡核苷酸增强放射线诱导Raji细胞凋亡的研究
目的研究bcl-2基因反义寡核苷酸作用淋巴瘤细胞株Raji后,放射线对细胞凋亡的影响.方法bcl-2基因反义寡核苷酸作用Raji细胞后,台盼蓝拒染法计数活细胞;免疫荧光标记观测细胞Bcl-2蛋白水平;用姬姆萨染色和碘化丙啶染色法、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用Raji细胞,显著抑制细胞的生长,并呈时间依赖性,活细胞数分别与单用放射线组及无义寡核苷酸联合放射线组相比,统计学上有显著性差异(P＜0.05).bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线联合作用于Raji细胞后显著抑制bcl-2蛋白表达,蛋白水平分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组比较,差异有显著性(P＜0.05).bcl-2基因反义寡核苷酸与放射线同时作用于Raji细胞后,姬姆萨染色可见凋亡细胞,通过流式细胞仪检测的细胞凋亡率显著增加,分别与单用放射线组或无义寡核苷酸联用放射线组相比,具有显著性差异,P＜0.05.结论bcl-2反义寡核苷酸能增强放射线诱导Raji细胞凋亡.
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预处理对老年鼠脑缺血bcl-2表达及细胞凋亡的影响
目的观察缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用. 方法将SD老年大鼠分为2组:缺血预处理 10 min再灌注 24 h再次缺血 24 h组(PI)及单纯缺血对照组(CI), 采用尼龙线栓法制作大鼠局灶性脑缺血模型,通过免疫组化染色技术及原位末端标记技术(TUNEL)检测大鼠大脑皮质bcl-2蛋白的表达和细胞凋亡情况. 结果 PI组较CI组缺血皮层bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.01).PI组缺血皮层凋亡细胞较CI组明显减少(P<0.05). 结论缺血预处理使缺血脑组织bcl-2蛋白表达增强,抑制凋亡细胞产生,说明缺血预处理对再次脑缺血有保护作用.
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妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘细胞凋亡的研究
目的 研究妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡与胆酸水平的关系,初步探讨ICP患者胎儿预后不良的原因.方法 采用原位末端标记法(TUNEL)检测ICP组和正常妊娠组胎盘细胞凋亡指数,免疫组织化学方法检测两组凋亡基因bax、bcl-2和caspase-3的表达水平,通过对细胞凋亡指数和凋亡相关基因的检测,了解胎盘细胞的凋亡情况,探讨ICP患者发生胎儿预后不良是否与胎盘细胞凋亡有关.结果 ICP组胎盘细胞凋亡率明显高于正常妊娠组(P＜0.05),且促进细胞凋亡基因bax、caspaae-3表达增加,抑制细胞凋亡基因bcl-2表达降低;随着胆酸水平的升高,bax/bcl-2比例升高,细胞凋亡增加.结论 ICP患者存在胎盘细胞过度凋亡现象,并与血清胆酸水平有相关性;胎盘细胞过度凋亡使胎盘功能减退,导致胎儿预后不良.
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化疗前后子宫颈癌细胞凋亡与Bcl-2、Bax基因表达的相关性研究
目的 探讨化疗诱导子宫颈癌细胞凋亡与癌组织Bcl-2、Bax基因表达的关系.方法 选择30例经单一拓扑替康化疗的子宫颈癌患者治疗前和治疗后癌组织标本60个样本,用原位分子杂交方法检测癌组织中Bcl-2 mRNA与Bax mRNA表达情况,TUNEL法检测细胞凋亡水平.结果 子宫颈癌单一拓扑替康化疗后组织疗效评定,有效率为36.7%(11/30);化疗前后凋亡阳性率分别为36.7%、66.7%,化疗后凋亡阳性率有所增高,但差异无统计学意义(P＞ 0.05).Bcl-2 mRNA在子宫颈癌化疗前后的表达阳性率分别为60.0%和36.7%,差异无统计学意义(P＞0.05);Bax mRNA在子宫颈癌化疗前后的表达阳性率分别为43.3%和80 .0%,差异有统计学意义(P＜0.05);组织学有效的病例化疗前癌组织中Bcl-2 mRNA 及Bax mRNA的阳性率分别为63.6%(7/11)、63.6%(7/11),组织学无效病例的阳性率分别为63.2%(12/19)、31.6%(6/19),差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论拓扑替康具有诱导子宫颈癌细胞凋亡的作用,其作用与上调Bax的表达相关 .化疗前癌组织Bcl-2 mRNA及Bax mRNA表达量与拓扑替康组织学疗效无相关性.
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晶状体上皮细胞凋亡及bcl-2、bax表达与年龄相关性白内障形成的关系
目的:探讨晶状体上皮细胞凋亡与年龄相关性白内障发生的关系.方法:用透射电镜观察2例年龄相关性白内障患者和1例正常人晶状体上皮细胞的超微结构.用脱氧核苷酸末端转移酶缺口标记原位细胞检测法(the terminal deoxynucleotidyl transferasa(TdT)-medinted dUTP nick-end label-ing,TUNEL)检测晶状体上皮的凋亡细胞.采用链霉菌亲生物素蛋白-过氧化物酶标免疫组织化学法(streptavidin-peroxidase,SP)染色,镜下检测46例年龄相关性白内障患者和13例健康成年人、7例胚胎的晶状体上皮细胞的bax基因与bcl-2基因的表达情况.结果:在年龄相关性白内障患者的晶状体上皮细胞的超微结构中可见凋亡之细胞,健康成年人晶状体上皮细胞正常.年龄相关性白内障患者的晶状体上皮细胞凋亡百分率为21.20%,健康成年人的晶状体上皮细胞凋亡百分率为0.25%.年龄相关性白内障患者晶状体上皮细胞的bax基因表达为100%,bcl-2基因表达为0%,健康成年组和胚胎晶状体上皮细胞的bax基因表达为0%,bcl-2基因表达为100%.结论:晶状体上皮细胞的凋亡在年龄相关性白内障的发生中起重要作用.
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caspase-3、bcl-2基因及Ki-67在胃癌前病变中的表达及意义
目的探讨caspase-3、bcl-2基因及Ki-67在胃癌前病变不同转归中的作用.方法采用免疫组化SP法检测60例胃癌患者胃癌及癌前病变组织标本[胃粘膜中度以上肠上皮化生和(或)异型增生]及其正常胃粘膜组织标本的Ki-67、caspase-3、bcl-2的表达.结果①Ki-67、caspase-3、bcl-2标记指数在癌前病变组表达明显高于正常组,差异有显著意义(P<0.01);②caspase-3、bcl-2和Ki-67表达在胃癌组织均显著高于癌变前组织(P<0.01).结论在胃癌发生发展过程中,caspase-3、bcl-2蛋白表达起重要作用,且发生癌变前细胞增殖活性已明显升高.
关键词： 胃肿瘤 癌前状态 基因caspase-3 基因Bcl-2 Ki-67 -
Rab25 siRNA诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究
目的:通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,探讨Rab25siRNA对肿瘤细胞凋亡的生物学效应及作用机制.方法:构建针对Rab25的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达,用Hoechst 33258染色和TUNEL法研究Rab25 siRNA诱导细胞的凋亡;用免疫组化法分析抑制Rab25的表达对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.结果:Rab25 siRNA可诱导肿瘤细胞凋亡;蛋白水平检测表明抑制Rab25表达使Bcl-2表达下降,Bax表达增强.结论:Rab25 siRNA可诱导细胞凋亡,Rab25影响卵巢癌细胞生存途径是通过调节Bcl-2/Bax表达含量发挥作用.
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bcl-2、Bax和c-myc基因在前列腺增生症中表达的意义
目的 探讨良性前列腺增生症(BPH)各区细胞bcl-2、Bax和c-myc基因表达在BPH发病中的意义.方法 对33例病人的88份标本采用免疫流式细胞光度术分区检测上述3种基因的标记率和表达量.结果 bcl-2基因在周边区(PZ)、移行区(TZ)和中央区(CZ)的标记率分别为17.50%、25.40%、17.70%;TZ 明显高于PZ和CZ(P＜0.01),PZ和CZ的标记率相比较差异无显著性(P＞0.05);Bax基因在 PZ、TZ和CZ的标记率分别为15.10%、18.00% 和16.00%,3个区差异无显著性(P＞0.05);c-myc基因在PZ、TZ、CZ 的标记率分别为13.90%、16.60% 和17.80% ,3个区差异无显著性(P＞0.05). bcl-2基因在PZ、TZ、CZ的表达量分别为54.00、73.00、44.96,TZ明显高于PZ和CZ(P＜0.01),PZ与CZ之间差异无显著性(P＞0.05);Bax基因在PZ、TZ、CZ的表达量分别为44.96、48.00、 45.00,3个区比较差异无显著性(P＞0.05);c-myc基因在PZ、TZ 、CZ的表达量分别为44.96、52.00和46.03,TZ高于PZ(P＜0.05),TZ与CZ、PZ和CZ相比差异无显著性(P＞0.05).结论 TZ抗凋亡基因bcl-2和增殖基因c-myc的高表达是引起前列腺增生的主要原因.
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凋亡抑制基因在人卵巢癌细胞敏感株及耐药株中的表达
目的 探讨凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌细胞敏感株(A2780)及耐药株(AD6)中的表达及其在卵巢癌多药耐药发生中的分子机制.方法 采用DNA电泳、流式细胞技术及半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)技术,检测不同浓度(3.0、6.0、9.9μg/ml)顺铂诱导的人卵巢癌细胞敏感株A2780及耐药株AD6的细胞凋亡及其Bcl-2和Bcl-XL基因的表达水平.结果 ①DNA凝胶电泳显示,不同浓度的顺铂均能诱导A2780和AD6细胞产生凋亡,呈现典型的凋亡梯度(DNA Ladder).②流式细胞仪分析结果显示,不同顺铂浓度作用下A2780和AD6细胞凋亡率不同,AD6明显低于A2780(P＜0.05).③RT-PCR结果显示,A2780和AD6细胞均表达Bcl-2、Bcl-XL,但在AD6细胞株中2基因的表达明显强于A2780.在6.0μg/ml顺铂作用下A2780和AD6细胞株中2基因表达下调,但仍以在AD6的表达强于A2780.结论 顺铂可诱导卵巢癌细胞凋亡,凋亡抑制基因Bcl-2和Bcl-XL在人卵巢癌多药耐药细胞株中高表达,是导致其细胞凋亡受抑制和对药物敏感性降低的重要原因.
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胎盘凋亡及凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达
人类胎盘在胎儿-胎盘-母体的关系上起中心轴的作用,如功能上失调会导致母体和胎儿的病理性变化.胎盘细胞凋亡是在各种不同生理和病理条件下发生的一种十分重要的生物学现象.近年来关于胎盘凋亡过程的研究虽处于早期阶段,但是进展很快.一些研究表明,凋亡可能在胎盘组织结构的改建及功能的完善等方面发挥着重要的作用[1].
