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α-2b干扰素干预动脉粥样硬化的实验研究
目的:探讨α-2b干扰素(IFN α-2b)抑制动脉粥样硬化(AS)的体内机制.方法:随机将家兔分为空白对照组(NC组)、病毒感染动脉粥样硬化组(Ⅴ组)和干扰素治疗病毒感染动脉粥样硬化组(IFN组),复制AS模型,于第1、3、5、7周酶法测血清总胆固醇、甘油三酯.7周后主动脉苏丹Ⅳ染色测AS斑块面积/总面积,HE染色观察主动脉形态学改变.用免疫组化法测胸主动脉中的PCNA的表达和单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)的表达.结果:主动脉粥样硬化斑块面积NC组和IFN组的低于Ⅴ组(P＜0.05).PCNA的表达IFN组低于Ⅴ组(P＜0.05).HSV-Ⅰ的表达IFN组低于Ⅴ组(P＜0.05).结论:病毒是AS的始动因素,并且可能是促使血管平滑肌细胞(VSMC)增生、AS进展的主要原因.IFNα-2b抑制病毒的作用,可能是其抑制AS的形成及发展的重要机制之一.
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肠道病毒71型抵抗Ⅰ型干扰素诱导的抗病毒作用
目的 研究肠道病毒71型(EV71)抵抗Ⅰ型干扰素(interferon,IFN)诱导的抗病毒作用.方法 将1000 U/ml的Ⅰ型干扰素(α,β)加入HeLa细胞后,去除上清中的干扰素,感染带有GFP的重组单纯疱疹病毒(HSV-1)和EV71,观察GFP的表达和PCR检测HSV-1核酸,判断Ⅰ型干扰素对HSV-1的作用.通过RT-PCR方法检测EV71 2A基因的表达从而判断EV71病毒的复制能力.结果 Ⅰ型干扰素(α,β)诱导HeLa细胞产生抗病毒蛋白而有效地抑制重组HSV-1 GFP的表达和核酸扩增.而EV71 2A的RT-PCR结果证实EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)作用后的HeLa细胞中有效增殖.结论 Ⅰ型干扰素(a,β)诱导产生抗病毒蛋白；EV71可在Ⅰ型干扰素(α,β)诱导产生抗病毒蛋白的HeLa细胞中有效增殖.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型感染胎鼠原代神经元细胞模型的建立
目的建立单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)感染胎鼠原代皮质神经元细胞模型.方法取孕14～16 d昆明小鼠皮质神经元进行细胞培养并感染HSV-Ⅰ.观察倒置光学显微镜下神经元形态变化,并应用流式细胞仪检测二者的百分比.应用间接免疫荧光方法观察正常及病毒感染组神经元和星形胶质细胞的变化.用特异性HSV-Ⅰ荧光抗体检测神经元受染情况,并利用MTT比色实验检测细胞活性.结果原代培养神经元数量、形态良好.用阿糖胞苷抑制星形胶质细胞生长后,神经元纯度较高.培养3 d时加入HSV-Ⅰ感染神经元,HSV-Ⅰ特异性免疫荧光反应阳性,受染神经元形态变化,活性降低.结论HSV-Ⅰ可直接感染原代培养神经元细胞,为进一步研究单纯疱疹病毒脑炎的发病机制提供了较好的体外模型.
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硫修饰和脂质体包裹对反义寡聚核苷酸抑制HSV1复制的影响
目的:探讨硫修饰和脂质体包裹对反义寡聚核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,AODN)抑制单纯疱疹病毒Ⅰ型(herpes simplex virus Ⅰ,HSV1)复制的影响.方法:将AODN、反义寡聚核苷酸脂质体(antisense oligodeoxynucleotides liposome,AODNL)、硫代反义寡聚核苷酸(antisense phosphorothioat oligodeoxynucleotides,SAODN)和硫代反义寡聚核苷酸脂质体(antisense phosphorothioat oligodeoxynucleotides liposome,SAODNL)配制成20、10、5、2.5和1.25 μg/ml,加入至96孔培养板,再加入102组织培养半数感染量(50% tissue culture infective dosage,TCID50)病毒,培养24小时,细胞冻融后取上清液,加至24孔培养板的细胞中,吸附1小时,去病毒液,加入空斑上层液,培养72小时,空斑计数.做病毒阳性对照,计算药物的病毒抑制率.结果:各组药物浓度与抗病毒药效之间无相关性(P＞0.05).AODN组与AODNL组、SAODN组和SAODNL组相比有显著性差异(P＜0.05),SAODN组与SAODNL组之间有显著性差异(P＜0.05),AODNL组与SAODNL组间无显著性差异(P＞0.05).结论:脂质体包裹、硫修饰或两者结合抑制病毒复制的作用都显著强于游离反义寡聚核苷酸,脂质体包裹的作用比硫修饰强.
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环氧化酶2抑制剂联合阿昔洛韦抑制Ⅰ型单纯疱疹病毒复活的实验研究
目的 探讨选择性环氧化酶2(COX-2)抑制剂对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)复活的抑制作用,以及联合使用阿昔洛韦的协同效应.方法 本文为实验研究.实验小鼠完全随机分为6组,其中5组选取HSV-1在三叉神经节潜伏的小鼠,A组同时使用氯诺昔康和阿昔洛韦;B和C组分别单独使用两药;D、E两组腹腔注入生理盐水;第6组F组为未感染病毒的正常小鼠.6组中除E组外均进行紫外线照射.将角膜擦拭液或三叉神经节组织和293指示细胞共同培养,观测指示细胞有无出现病理性变化以鉴别有无病毒复制.结果 A、B、C 3个用药组的角膜和三叉神经节中病毒复活率与对照D组相比明显降低(角膜X2a-D=36.88,X2b-D=22.43,X2c-D=20.32,P＜0.05;三叉神经节X2a-D=49.91,X2b-D=29.16,X2c-D=24.89,P＜0.05);但联合用药的A组与单独用药的B、C组对角膜病毒复活率的比较差异无统计学意义(X2A-B=2.75,)(2A-C=3.66,0.05＜P＜0.1);对三叉神经节病毒复制比较差异有统计学意义(X2a-B=4.78,X2a-C=6.97,P＜0.05).结论 选择性COX-2抑制剂氯诺昔康能显著抑制紫外线诱导的HSV-1的复活,联合使用阿昔洛韦眼液无显著的协同效应.该类药可为预防单纯疱疹病毒性角膜炎的复发提供新方法.
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小鼠单纯疱疹病毒Ⅰ型潜伏感染模型的建立
目的建立简便易行的单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)潜伏感染动物模型.方法BALB/c小鼠60只随机分为3组,分别为鼻黏膜病毒滴入组、尾静脉接种组和角膜划痕接种组,进行单纯疱疹病毒Ⅰ型接种.6周后行小鼠三叉神经节病毒抗原检测和病毒DNA片段检测,以确认潜伏感染的存在.结果尾静脉接种组小鼠三叉神经节病毒DNA片段的检出率为9/12,角膜划痕组小鼠三叉神经节病毒DNA片段的检出率为13/16,均高于鼻黏膜接种12/20;小鼠三叉神经节病毒抗原表达均为阴性;尾静脉接种组死亡率4/15,高于其他两组.结论鼻黏膜病毒滴入、尾静脉注射和角膜划痕接种均可建立小鼠HSV-1潜伏感染模型,以角膜划痕法引起疱疹病毒急性感染症状轻恢复快,潜伏感染发生率高,为理想的建立HSV-1潜伏感染的方法.
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病毒宁体外抗Ⅰ型单纯疱疹病毒的活性研究
目的 研究中药制剂病毒宁体外抗单纯疱疹病毒(HSV-1)作用,确定病毒宁体外抗HSV-1活性.方法 药物对细胞毒性进行测定.结果 病毒宁在1.5～0.1875 g/L稀释度时,对HSV-1有明显杀灭作用(P<0.05);病毒宁在1.5～0.375 g/L稀释度时,能显著阻断HSV-1对细胞感染,并显著抑制病毒在细胞内的增殖(P<0.05).结论 中药制剂病毒宁在体外具有明显的抗HSV-1作用,其大无毒浓度1.5 g/L,佳稀释浓度为1.5～0.375 g/L.
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单纯疱疹病毒Ⅰ型糖蛋白B核酸疫苗安全性的初步评价
目的:通过检测免疫小鼠的血液生理学、血液生化学指标,以及8个重要组织器官的病理学,初步评估单纯疱疹病毒I型糖蛋白B核酸疫苗(pcDNA3-gB)的安全性.方法:将24只昆明种小鼠随机分为对照组、100、300和500 mg·L-1组,每组6只.各组分别于小鼠股四头肌肌肉注射1mL生理盐水、100,300和500 mg·L-1 pcDNA3-gB.末次免疫10 d后,进行血液生理学、血液生化学、肝、肾、心、脑、脾、角膜、视网膜、三叉神经节的病理学检查.结果:各组小鼠均存活,且血红细胞计数(RBC)、血红蛋白浓度(HB)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均体积(MCV)、红细胞平均血红蛋白(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCHC)、血小板记数(PLT)、白细胞计数(WBC)、红细胞体积分布宽度(RDW)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、碱性磷酯酶(ALP)、总胆红素(T-BIL)、尿素(BUN)、肌肝(Cr)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、血糖(GLU)及组织病理学与对照组比较差异均无显著性(P>0.05).结论:不同剂量pcDNA3 gB免疫小鼠后,对小鼠的生命、血液生理学、血液生化学、组织病理学指标均无明显影响,初步说明pcDNA3gB是安全的.
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牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
目的 制备牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gB蛋白单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA方法.方法 应用重组IBRV gB蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,利用IBRV全病毒免疫家兔制备多克隆抗体,采用方阵滴定法确定兔抗IBRV IgG多抗与单抗的适工作浓度,建立双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法进行灵敏度和特异性验证.结果 获得了1株稳定分泌抗IBRV gB单抗的杂交瘤细胞株,命名为2C4；兔抗IBRVIgG多抗和单抗的适工作浓度分别为2.620 9和2.634 1μg/ml,酶标二抗的适稀释度为1∶30 000；应用建立的双抗体夹心ELISA法对100份IBRV阳性血清样品进行检测,结果均呈阳性,符合率为100％；检测牛口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛副流感3型病毒的结果均呈阴性.结论 成功制备了IBRV gB蛋白单克隆抗体,并建立了IBRV双抗体夹心ELISA检测方法,可用于牛传染性鼻气管炎的诊断和流行病学调查.
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银黄注射液体外抗病毒作用研究
本实验旨在了解本品体外对FMl、HSV-Ⅰ的作用,为临床用于病毒感染性疾病提供实验依据.1 材料1.1 药物银黄注射液,50 mL/瓶,每1 mL含绿原酸12.5 mg和黄芩苷20 mg,由泸州医学院药物研究所提供,批号:980511;病毒唑(阳性对照药),0.1 g/mL,由焦作市康力药业股份有限公司生产,批号:980513.
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人乳头瘤病毒、疱疹病毒Ⅰ型及人巨细胞病毒与口腔鳞癌关系的研究
目的:研究口腔鳞癌与人乳头瘤病毒(HPV)、疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)和人巨细胞病毒(HCMV)的关系.方法:采用斑点杂交和PCR技术检测32例口腔鳞癌、14例口腔白斑和10例正常口腔粘膜中HPV16、HSV-Ⅰ及HCMVDNA.结果:在正常口腔粘膜、白斑及口腔鳞癌中HPV16、HSV-Ⅰ及HCMVDNA感染率分别为0%、35.7%、50.0%,40.0%、50.0%、43.3%和0%、14.3%、28.1%,口腔鳞癌及白斑组织中HPV16-DNA的检出率均高于正常口腔,且差别具有显著性(p＜0.05);但HSV-Ⅰ和HCMVDNA在口腔疾患中的检出率与正常比较无显著差别(p＞0.05).结论:HPV16感染与口腔鳞癌的发生相关;HSV-Ⅰ和HCMV可能参予口腔鳞癌的发生及发展,并且与HPV16有协同致癌的作用.
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银黄注射液体内外抗Ⅰ型疱疹病毒的实验研究
目的 观察银黄注射液的体内外抗疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)作用.方法 用HSV-Ⅰ Sm44株颅内感染BALB/C小鼠复制动物模型,记录小鼠存活时间;用HSV-Ⅰ Sm44株感染的Vero细胞为实验系统,观察细胞病变程度,从而了解银黄注射液抗HSV-Ⅰ的药效.结果 体外实验表明,先用药后感染病毒,银黄注射液0.22 mg·ml-1以上可抑制HSV-Ⅰ Sm44株对Vero细胞的病理损伤,病毒唑0.25 mg·ml-1以上可抑制HSV-Ⅰ Sm44株对Vero细胞的病理损伤,先感染HSV-Ⅰ后用药,银黄注射液0.22 mg·ml-1不能抑制Vero细胞的病理损伤;动物实验表明,静注66 mg·kg-1·d-1银黄注射液可显著延长感染HSV-Ⅰ Sm44株的小鼠存活天数(P＜0.01),作用优于病毒唑,肌注作用差.结论 体外实验,银黄注射液阻断Vero细胞感染HSV-Ⅰ Sm44株作用强于对已感染该病毒的Vero细胞的保护作用;对HSV-Ⅰ Sm44株感染小鼠有保护作用,静注比肌注效果好,静注大剂量保护作用优于病毒唑.
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中脑导水管周围灰质立体定向注射单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体介导人前脑啡肽原基因对甲醛炎性痛大鼠的镇痛效应
目的:观察中脑导水管周围灰质(PAG)立体定向注射介导人前脑啡肽原基因(HPPE)的单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)扩增子载体对甲醛炎性痛大鼠的镇痛效应.方法:成年雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体SHPZ组,pHSVIRES-LacZ空白载体SHZ组和生理盐水NS组(n=51).3组大鼠PAG立体定向注射SHPZ,SHZ 和NS后于第3天、1周、2周、3周、4周、5周和6周时进行福尔马林实验观察镇痛效应.对注射后1 周组(每组取9只)进行福尔马林实验后处死大鼠取出PAG标本观察HPPE转染表达情况, 通过X-gal染色原位检测报告基因LacZ的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测HPPE mRNA的表达,放射免疫法检测PAG组织中L-脑啡肽(L-EK)浓度. 结果:PAG立体定向注射SHPZ后, X-gal原位染色、RT-PCR和放射免疫法检测均显示外源HPPE能有效表达.对甲醛诱发的炎性疼痛中,疼痛加权评分(PIS)于第1周、2周、3周、4周、5周时在第1相和第2相与空白载体对照组或生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05),于第6周时第2相PIS与空白载体对照组或生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05),对甲醛的镇痛效应可被腹腔注射纳洛酮拮抗.结论: SHPZ能成功地将外源HPPE基因转染到PAG神经元细胞中,并使之有效表达, HPPE的表达产物对甲醛炎性痛大鼠产生镇痛效应.
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大鼠鞘内注射单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子载体介导人前脑啡肽原基因的表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应
目的:大鼠鞘内注射介导人前脑啡肽原基因(HPPE)单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)扩增子载体,观察LacZ和HPPE在脊髓神经元细胞中的共表达及对甲醛炎性痛的镇痛效应.方法:纯种雄性SD大鼠随机分为pHSVIRES-HPPE-LacZ载体组(SHPZ),pHSVIRES -LacZ空白载体组(SHZ),生理盐水组(NS),又分为分别注射SHPZ,SHZ和NS后3 d,1周,2周,3周,4周,5周时观察镇痛效应组,并对1周组观察HPPE转染表达,每组6只.采用改良Yaksh法对大鼠进行鞘内置管后,将构建好的含HPPE的重组单纯疱疹病毒I型扩增子载体注入大鼠鞘内,通过X-gal染色原位检测报告基因LacZ的表达,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测HPPE的表达,放射免疫法检测脊髓组织脑啡肽浓度,并观察转染含HPPE基因载体对大鼠甲醛炎性疼痛的镇痛效应.结果:pHSVIRES-HPPE-LacZ在体感染大鼠中枢神经细胞后,用X-gal染色、RT-PCR和放射免疫检测方法均证实外源脑啡肽基因能有效表达.对甲醛诱发的炎性疼痛中,疼痛加权评分(PIS)于1周,2周,3周,4周时在第1相和第2相与对照组比较有显著差异,于第5周时第2相PIS接近对照组,对甲醛的镇痛效应可被鞘内注射纳洛酮拮抗. 结论: SHPZ能成功地将外源HPPE转染到脊髓神经元细胞中,使之有效表达,提示扩增子载体SHPZ是良好的慢性疼痛转基因治疗工具;HPPE的表达产物可对甲醛炎性痛产生镇痛效应.
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单纯疱疹病毒型特异性的鉴别诊断
单纯疱疹病毒(herpes simplex virus,HSV) 分为HSV-1、HSV-2两个型别.两型的DNA有50%的同源性.目前血清学检测无法区分HSV型别.有效地鉴别HSV两型对疾病的诊断治疗和患者的身心健康至关重要.现对Ⅰ、Ⅱ型单纯疱疹病毒的鉴别诊断方法作一综述.
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扇贝糖胺聚糖对Ⅰ型单纯疱疹病毒的抑制作用
目的 研究扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)不同浓度及不同作用时间对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-Ⅰ)的抑制作用.方法 以HSV-Ⅰ SM44株感染非洲绿猴肾细胞(Vero细胞),观察病毒感染后的细胞变性反应(CPE),并检测不同浓度SS-GAG及不同作用时间对HSV-Ⅰ复制的抑制作用.结果 与病毒对照组相比,SS-GAG各浓度组(100、50、25 mg/L)能有效保护经HSV-Ⅰ感染的Vero细胞,使细胞活性增强(F=27.54,P<0.01);并减弱HSV-Ⅰ导致的病变效应,抑制病毒的复制,并且随着药物作用时间的延长,药物抗病毒效应逐渐增加, 高达88.64%.结论 SS-GAG体外具有明显的抗HSV-1病毒作用.
