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猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因片段的合成和真核表达
目的：获得猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因，并分析其表达特性。方法利用基因合成的方法合成B病毒gB蛋白胞外区的基因片段，经BamHⅠ和NotⅠ双酶切后连接到pEGFP-N3载体。将构建的pEGFP-N3-GB合重组质粒转染到293细胞。提取蛋白用Western blot检测其在细胞内的表达情况，并利用激光共聚焦分析在细胞内的表达定位。结果 pEGFP-N3-GB合重组质粒能在293细胞内正常表达，并且在细胞膜上表达。结论利用真核表达系统，可以产生B病毒gB蛋白的特异性抗原重组蛋白，且在细胞膜上表达。
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猕猴B病毒gB蛋白特异性抗原表位的合成和表达
目的 获得可以用于B病毒检测的gB蛋白特异性表位重组抗原.方法 利用基因合成的方法,合成包含B病毒gB蛋白主要特性抗原表位的基因,通过定向克隆的方法,将该基因克隆到原核表达载体pET-22b中,构建了重组表达质粒.筛选出阳性重组质粒,转化到BL21感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达.结果 成功的获得了B病毒gB蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可溶的形式表达.结论 利用原核表达系统,可以产生B病毒gB蛋白特异性表位重组抗原,可以作为B病毒的检测抗原.
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牛传染性鼻气管炎病毒gB蛋白单克隆抗体的制备及初步应用
目的 制备牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis virus,IBRV)gB蛋白单克隆抗体,并建立双抗体夹心ELISA方法.方法 应用重组IBRV gB蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备单克隆抗体,利用IBRV全病毒免疫家兔制备多克隆抗体,采用方阵滴定法确定兔抗IBRV IgG多抗与单抗的适工作浓度,建立双抗体夹心ELISA检测方法,并对该方法进行灵敏度和特异性验证.结果 获得了1株稳定分泌抗IBRV gB单抗的杂交瘤细胞株,命名为2C4；兔抗IBRVIgG多抗和单抗的适工作浓度分别为2.620 9和2.634 1μg/ml,酶标二抗的适稀释度为1∶30 000；应用建立的双抗体夹心ELISA法对100份IBRV阳性血清样品进行检测,结果均呈阳性,符合率为100％；检测牛口蹄疫病毒、牛流行热病毒、牛副流感3型病毒的结果均呈阴性.结论 成功制备了IBRV gB蛋白单克隆抗体,并建立了IBRV双抗体夹心ELISA检测方法,可用于牛传染性鼻气管炎的诊断和流行病学调查.
