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猕猴B病毒gB和gC合成基因重组杆状病毒质粒的构建
目的 构建猕猴B病毒gB和gC合成基因的杆状病毒重组质粒(rBacmid).方法 根据本室已经合成的猕猴B病毒gB基因和gC基因,利用BamHI和XhoI特异性酶切,将其亚克隆于昆虫杆状病毒的pFastBacHTA转座载体.将该阳性转座载体转化到DH10bac感受态细胞,从中筛选出阳性重组细菌,并提取重组质粒.结果 获得了重组质粒bacmid-gB和bacmid-gC.结论 该研究为猕猴B病毒gB和gC蛋白在杆状病毒系统内的表达奠定了基础.
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猕猴B病毒囊膜蛋白gD基因真核细胞表达载体的构建及表达
目的：构建猕猴B病毒囊膜蛋白gD的真核表达载体，并且检测其在293T细胞内的表达情况。方法首先通过基因合成手段获得含B病毒gD蛋白的基因片段，在经由PstⅠ和NotⅠ双酶切后连接到pEGFP-N3载体，随后将构建的pEGFP-N3-GD重组质粒转染到人胚胎肾上皮细胞系293T细胞。再用Western blot检测所提蛋白其在细胞内的表达情况，并用激光共聚焦分析其在细胞内的表达定位情况。结果成功获得携带gD基因的阳性重组质粒pEGFP-N3-GD，且pEGFP-N3-GD重组质粒能在293T细胞的表面正常表达。结论利用真核表达系统，既能够在细胞表面产生B病毒gD蛋白的特异性重组抗原，而且可用于B检测抗原的制备。
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猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因片段的合成和真核表达
目的：获得猕猴B病毒gB蛋白胞外区基因，并分析其表达特性。方法利用基因合成的方法合成B病毒gB蛋白胞外区的基因片段，经BamHⅠ和NotⅠ双酶切后连接到pEGFP-N3载体。将构建的pEGFP-N3-GB合重组质粒转染到293细胞。提取蛋白用Western blot检测其在细胞内的表达情况，并利用激光共聚焦分析在细胞内的表达定位。结果 pEGFP-N3-GB合重组质粒能在293细胞内正常表达，并且在细胞膜上表达。结论利用真核表达系统，可以产生B病毒gB蛋白的特异性抗原重组蛋白，且在细胞膜上表达。
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猕猴B病毒gB蛋白特异性抗原表位的合成和表达
目的 获得可以用于B病毒检测的gB蛋白特异性表位重组抗原.方法 利用基因合成的方法,合成包含B病毒gB蛋白主要特性抗原表位的基因,通过定向克隆的方法,将该基因克隆到原核表达载体pET-22b中,构建了重组表达质粒.筛选出阳性重组质粒,转化到BL21感受态细胞,利用IPTG进行诱导表达.结果 成功的获得了B病毒gB蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可溶的形式表达.结论 利用原核表达系统,可以产生B病毒gB蛋白特异性表位重组抗原,可以作为B病毒的检测抗原.
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猕猴B病毒gC蛋白特异性抗原表位的合成和表达
目的 获得B病毒gC蛋白的特异性表位抗原.方法 利用长片段基因合成的方法,合成B病毒C蛋白的特性抗原表位基因,将该基因连接到pMAL-5x载体,转化到BL21受体菌进行表达,并纯化表达产物.结果 成功的获得了B病毒gC蛋白的特异性抗原蛋白,该蛋白以可溶的形式表达.结论 利用原核表达系统,可以产生B病毒gC蛋白的可溶性抗原,可以作为B病毒的检测抗原.
