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两种核酸提取方法在寨卡病毒实时荧光RT-PCR检测中的比较
目的 比较硅胶膜法和磁珠法在寨卡病毒核酸检测中的使用效果,以选择适合的核酸提取方法用于临床样本的寨卡病毒检测.方法 对北京首例输入性寨卡病毒感染病例的尿液和唾液样本同时用硅胶膜法和磁珠法提取总RNA,用一步法和两步法实时荧光RT-PCR进行寨卡病毒核酸检测,比较检测效果的差异.结果 在一步法中,用硅胶膜法从尿液中提取RNA,寨卡病毒检测阳性;用磁珠法从尿液和唾液中提取的RNA,检测均为阴性.在二步法中,用硅胶膜法从尿液和唾液中提取的RNA,检测均为阳性,而磁珠法提取的样本均未检出.结论 硅胶膜法提取核酸比磁珠法更适合于寨卡病毒荧光RT-PCR检测.
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2012-2014年龙岩市手足口病病原学监测结果分析
目的 了解2012-2014年龙岩市手足口病病原学特征和流行病学特征,为龙岩市手足口病的防控提供病原学依据.方法 用荧光RT-PCR方法对龙岩市各监测哨点医院送检的1 644例手足口病病例样本,进行肠道病毒核酸检测,并对检测结果进行统计描述和分析.结果 1 644例手足口病病例中,检出肠道病毒核酸阳性1 290例,阳性率为78.47％,其中EV71阳性290例,阳性率为17.64％;CoxA16阳性286例,阳性率为17.40％;未分型肠道病毒711例,阳性率为43.25％;EV71 +CoxA16混合感染3例,阳性率为0.18％.重症病例以EV71为主;患者年龄11 d～47岁,平均(2.37±1.92岁),患者主要为≤3岁幼儿,共1 1 15例,占86.43％,不同性别患者阳性率差异无统计学意义(x2=2.29,P＞0.05).手足口病全年各月均可发病,具有明显的季节性,病例数主要集中在4～7月,占病例总数的44.40％.2012-2014年共报告重症病例26例,死亡 1例,死亡病例病原体为EV71型.EV71为重症病例和死亡病例的主要病原体.结论 2012-2014年引起龙岩市手足口病的流行有明显的季节性,≤3岁幼儿为手足口病防控的重点人群,2012年手足口病病原构成以EV71为主,2013年和2014年手足口病病原构成发生变化,由其他肠道病毒占主导地位,因此应加强未分型样本的监测工作.
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荧光RT-PCR同步检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A组16型方法的建立及应用
目的 建立快速、灵敏、特异的肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的荧光PCR检测及分型方法.方法 针对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的特异性保守基因vp1基因分别设计一对引物和对应的探针,对荧光RT-PCR反应体系进行优化,验证方法的特异性、灵敏度和重复性,并对临床样品进行检测分析.结果 该方法对肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的检测有高度特异性,与甲肝、腮腺炎、风疹、乙型脑炎等病毒均无交叉反应,检测灵敏度可达10拷贝/μl;43例患儿肛拭子标本中肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型检测率分别为37.21%(16/43)和13.95%(6/43).结论 荧光RT-PCR法分型检测肠道病毒71型和柯萨奇病毒A16型的方法具有快速、便捷、特异、灵敏等特点,适用于肠道病毒的早期诊断.
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大肠癌患者外周血CK20表达及p53基因突变的研究
目的建立高效,快速的外周血Cytokeratin20(CK20)表达的检测方法,探讨大肠癌患者外周血中CK20的表达与微转移的关系,研究大肠癌与P53基因突变的关系.方法,运用荧光监测技术结合RT-PCR,检测36例大肠癌患者术前后不同时间外周血中的CK20的表达,用SSCP技术对大肠癌患者进行P53基因突变检测.结果36例患者术前的外周血中检出CK20表达的有27例,阳性率为75%手术后24h患者外周血中检出CK20表达的有30例,阳性率为83.3%,术后早期化疗结束后仅13例为阳性,阳性率为36%.36表达可以监测癌症微转移的发生,简便快速,检出率高.
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应用SYBR Green I荧光定量RT-PCR测定糖尿病大鼠肾皮质TGF-β1表达水平
SYBR Green I荧光定量RT-PCR法检测正常、糖尿病和牛磺酸治疗组大鼠TGF-β1 mRNA /β-actin mRNA比值为(7.0±0.8)×10-3,(64.4±8.0)×10-3和(16.7±2.0)×10-3;终点法RT-PCR检测比值分别为0.28±0.12,0.58±0.16和0.43±0.10.与终点法RT-PCR相比,TGF-β1 mRNA SYBR Green I荧光定量RT-PCR实时检测法,方便快捷,敏感特异.
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不同试剂盒对流感病毒提取效能的比较
目的：比较4种试剂盒对流感病毒RNA提取的相对效率、成本和耗时情况，为临床流感病毒RNA提取检测提供参考。方法：将流感病毒参考株悬液作10-1-10-4系列稀释，采用4种试剂盒对实验样本进行核酸提取，采用荧光R T-P C R对其提取效率进行平行检测，比较分析这4种试剂盒对流感病毒RNA提取效率的差异和试剂盒价格及提取时间。结果：各试剂盒提取不同稀释度流感病毒样本的相对效率存在显著差异，其中High Pure Viral RNA Kit提取效率高。综合相对提取效率、成本等因素，性价比较高的为B试剂盒。结论：不同核酸提取试剂盒可影响RT-PCR对病毒核酸提取的检测效果，临床各实验室应综合实验的目的和自身实验室条件等因素进行合理选择。
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2013-2015年乌鲁木齐市手足口病病原学检测分析
目的 了解2013-2015年乌鲁木齐市手足口病病原学特征和流行病学特征,为该市手足口病的防控提供病原学依据.方法 采用实时荧光RT-PCR方法对乌鲁木齐市各区县疾控送检的2 267份手足口病病例标本进行肠道病毒核酸检测,并对检测结果进行统计描述和分析.结果 2 267例手足口病病例中,检出肠道病毒核酸阳性1 798例,阳性率79.31％,其中EV 71阳性529份、Cox A16阳性673份,其他肠道病毒阳性593份,EV 7l和Cox A16混合感染3份,阳性率分别为23.33％、29.69％和26.16％、0.13％;主要为＜5岁儿童,共1 718例,占75.78％;不同性别阳性率差异有统计学意义(x2=9.62,P＜0.05).全年各月均可发病,具有明显的季节性,主要集中在5～7月,占病例总数的78.83％.结论 2013-2015年乌鲁木齐市手足口病的流行有明显的季节性,＜5岁儿童为手足口病防控的重点人群.
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2012年上半年惠州地区手足口病的实验室检测结果分析
目的 对惠州市2012年1-6月手足口病实验室检测结果进行分析了解手足口病病例肠道病毒的感染情况,为制定预防和控制肠道病毒感染策略提供依据.方法 采集2012年1--6月我院送检的疑似手足口病患者的粪便、肛拭子、咽拭子和脑脊液等标本3480份,应用荧光RT-PCR技术检测样本中的肠道病毒(EV)、肠道病毒71型(EV71)、柯萨奇病毒A组16型(CA16).结果 共检出758份EV阳性标本,478份EV71阳性标本,138份CA16阳性标本,阳性率分别为65.69%,39.02%和12.53%,差异有统计学意义(P<0.05);男女患者的感染率分别为63.25%和36.75%,差异有统计学意义(P<0.05);0-4岁的儿童是手足口病的高发人群;4-6月份是2012年上半年手足口病发病高峰期,感染肠道病毒,EV71型和CA16型人数占所有肠道病毒,EV71型和CA16型感染者的84.43%(20.71%+36.15%+36.15%),91.42%(22.59%+40.17%+28.66%),76.53%(28.98%+27.54%+19.57%%);手足口病城区和乡镇的分布比例分别为41.70%和58.30%,差异有统计学意义(P<0.05).结论 惠州地区2012上半年手足口病的病原以肠道病毒71型为主;0-4岁儿童是感染肠道病毒的高危人群;4-6月份是手足口病发病高峰期;手足口病的感染率乡镇高于城镇.
关键词： 手足口病 荧光RT-PCR 肠道病毒 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 -
武汉地区小牛和羊戊型肝炎病毒感染调查
目的 调查湖北省武汉市小牛和羊戊型肝炎病毒(HEV)感染情况.方法 从武汉地区分别采集小牛和羊血清样本397份和503份,用酶联免疫诊断试剂盒检测HEV抗原和抗体.对抗原或抗体阳性者用荧光RT-PCR检测HEV核酸,对阳性者采用套式RT-PCR进行扩增,并进行克隆和序列分析.选取核酸阳性样品接种猴子.结果 羊血清中HEV抗体阳性率为21.87%(110份),抗原阳性率为12.33%(62份);抗原和抗体同时阳性者占2.78%(14份)小牛血清中HEV抗体阳性率为2.02%(8份),抗原阳性率为0%.仅1份羊血清为HEV核酸阳性,序列分析显示为HEV 4型.结论 武汉地区小牛HEV感染率较低,但羊的感染率相对较高.
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不同方法对手足口病的检查对比分析
目的:探讨不同方法对于手足口病的检查效果.方法:确诊手足口病患儿120例,分离一份血清,采用散射免疫比浊析法测定cTnI含量；分离一份血清进行荧光RT-PCR分析.结果:cTnI检测的阳性率为81.7％,荧光RT-PCR法检测的阳性率为98.3％,两者比较,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:荧光RT-PCR法检测手足口病感染病毒的阳性率高,有利于手足口病的确诊,值得在有条件的医院推广应用.
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河南省信阳市动物中新布尼亚病毒感染情况调查
目的：了解河南省信阳市动物中新布尼亚病毒感染情况，为研究其传播途径和防治策略奠定基础。方法在信阳市商城县和光山县采集动物血液，应用荧光RT-PCR方法检测血液标本中是否携带新布尼亚病毒核酸，采用双抗原夹心ELISA方法检测新布尼亚病毒总抗体。结果在调查点采集到5种动物血清标本合计312份，结果均未检测到新布尼亚病毒核酸；141份动物血清检测到新布尼亚病毒总抗体，总体阳性率为45．19％，鼠、牛、羊、猪和狗分别为1．06％，100．00％、76．27％、3．57％和75．00％，5种动物的抗体阳性率有统计学意义。结论河南省信阳市牛、羊、狗等家养动物中存在新布尼亚病毒抗体，可能为该病毒的储存宿主。
关键词： 新布尼亚病毒 发热伴血小板减少综合征 荧光RT-PCR ELISA -
2011年-2012年龙岩市手足口病标本病毒检测结果分析
目的 通过对2011年-2012年龙岩市临床诊断病例进行病原学检测,了解手足口病的感染情况和病原学特征,为手足口病的诊断提供科学依据.方法 采用荧光RT-PCR方法对2011年-2012年龙岩市手足口病患者及其密切接触者848份标本进行肠道病毒及EV71、COXA16的检测.结果 肠道病毒总阳性率为64.86％,其中EV71阳性率为23.94％,COXA16阳性率为19.70％,其他肠道病毒阳性率为21.23％;5岁以下儿童是主要感染人群,占实验室检测人数的91.04％,阳性率达65.80％.结论 龙岩市2011年-2012年手足口病以EV71为主要病原,同时应加强其他肠道病毒的监测,做好预防控制措施.
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深圳市环境水体肠道病毒监测
目的:研究肠道病毒在环境水体中的分布情况.方法:本次研究选择了五个采水点,从2010年4月-2011年12月连续每月采样,利用实时荧光RT-PCR检测水样中的肠道病毒.结果:105份水样中,肠道病毒检测呈阳性的有72份,占68.57％;各采水点之间肠道病毒的检出率无明显差异.结论:水体中肠道病毒广泛存在,有必要加强水环境中肠道病毒的监测并进一步研究水中肠道病毒对公众健康带来的风险.
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肠道病毒71型免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法的建立及应用
目的 建立肠道病毒71型(EV 71型)免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法.方法 根据EV 71型VP1基因保守序列设计高特异性、高保守性的引物和探针,运用设计序列和缓冲液建立一种免提取核酸的荧光RT-PCR检测方法,并与传统RT-PCR方法进行比较.结果 本研究建立的方法能够检测出EV 71型病毒株和EV 71型核酸标准品,而对柯萨奇病毒A4、A6、A10、A24型和诺如病毒、肠道腺病毒、札如病毒、麻疹病毒、风疹病毒的扩增均为阴性,阴性对照结果中无非特异性扩增和无假阳性结果.灵敏度检测结果显示,对EV 71型核酸标准品低检测浓度为6.13 × 102copies/μL,灵敏度标准曲线为y=-3.329 8x+ 41.571(r=0.999 4).对临床样本检测结果显示,本研究方法与传统RT-PCR检测方法检测结果的Kappa值为0.82,一致性强度等级为强.结论 本研究建立的EV 71型免提取核酸荧光RT-PCR检测方法特异性强、灵敏度高,适用于EV 71型的临床样本筛选分析.
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荧光RT-PCR与RT-LAMP检测GⅡ4型诺如病毒的比较和应用
目的 建立在临床或疾控上可进行简单、快速、灵敏、有效的GⅡ4型诺如病毒的检测方法.方法 根据GⅡ4型诺如病毒基因组保守序列建立实时荧光RT-PCR和RT-LAMP检测方法,研究两者的敏感性、特异性和灵敏度,并进行临床应用.结果 建立了GⅡ4型诺如病毒的实时荧光RT-PCR和RT-LAMP检测方法,敏感性和特异性良好,灵敏度相当.结论 实时荧光RT-PCR和RT-LAMP可在临床或疾控应用.
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三种方法检测沙门氏菌的比较研究
目的 探讨建立快速、准确的沙门氏菌检测方法. 方法 采用常规方法、Vitek免疫诊断分析系统(Ⅵ-DAS)和荧光RT-PCR对沙门氏菌进行检测,并对其灵敏性和特异性进行比较.结果 荧光RT-PCR的灵敏度高,VIDAS及荧光RT-PCR检测沙门氏菌的特异性均达100%. 结论 VIDAS及荧光RT-PCR均能对沙门氏菌进行快速检测,在应对突发公共卫生事件中将能发挥重要作用.
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荧光定量RT-PCR快速检测人副流感病毒3型的研究
[目的]利用荧光定量RT-PCR技术建立一种快速检测人副流感病毒3型的方法. [方法]根据人副流感病毒3型NP基因的相对保守序列分别设计一对引物及Taqman探针,建立、优化反应体系后,利用10倍稀释法检验方法的灵敏度并建立定量标准曲线;特异性检验后利用临床标本与传统的细胞培养法进行比较.[结果]人副流感病毒3型检测反应的灵敏度为0.016TCID50,标准曲线相关系数为1.00,扩增效率为89.8%,6种非人副流感病毒3型病原体检测均为阴性,说明此方法具有很高的准确性、稳定性和特异性. [结论]本研究建立荧光定量RT-PCR技术可以准确检测人副流感病毒3型,不仅灵敏度高、稳定性好,而且可以对病毒滴度进行定量检测.
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磁珠法和滤膜法提取核酸在手足口病荧光定量检测中的比较
目的 分析比较磁珠法和滤膜法提取病毒核酸的重复性及灵敏度.方法 选用国产的磁珠法和滤膜法试剂同时提取核酸检测临床手足口病标本,荧光相对定量比较两种方法的重复性及灵敏度.结果 磁珠法提取核酸的标本用量较少,成功率较高,磁珠法试剂检测重复性较好,灵敏度较高.结论 磁珠法提取核酸在手足口病的荧光定量检测中优于滤膜法.
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应用荧光RT-PCR方法定性检测H5亚型禽流感病毒
在活禽及其产品国际贸易中,缩短对AIV的检测时间,有利于其快速通关.荧光RT-PCR是近发展和应用的一种新的检测技术.北京出入境检验检疫局与深圳匹基生物工程公司共同研制出了AIV荧光RT-PCR检测试剂盒,并起草了中华人民共和国国家标准(GB/T 19438.2-2004).本实验室参照该方法对送检的多份样品进行禽流感病毒检测,整个试验过程不到4h,与传统方法比较大大缩短了检测时间,值得在检验检疫系统广泛应用.
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荧光RT-PCR快速检测技术检测鸭场环境中禽流感病毒
本研究应用荧光RT-PCR方法和鸡胚病毒分离方法,对两个禽流感发病后康复鸭场和一个健康鸭场采集的环境样品、部分健康和死鸭的拭子脏器进行检测,结果显示荧光RT-PCR方法同病毒分离方法的符合情况较好,阴性符合率为100%,病毒分离检出阳性样品经荧光RT-PCR检测全部为阳性.表明该方法在检测禽流感病毒的环境释放方面有重要应用价值,能够检出环境样品中的禽流感病毒.但其中的8份样品荧光RT-PCR显示为弱阳性或可疑,鸡胚分离的结果为阴性.推测这些样品中的病毒虽被灭活,但核酸并没有完全降解.
