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肺泡Ⅱ型上皮细胞原代培养及高体积分数氧-停氧对其细胞内钙离子水平的影响
目的 原代培养肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ),并动态观察高体积分数氧(高氧)-停氧对其细胞内钙离子([Ca2+]I)的影响,为体外研究AECⅡ及阐明高氧肺损伤发病机制提供实验基础.方法 孕19 d SD大鼠麻醉消毒后超净台内剖腹取出所有胎鼠.用胎鼠肺组织进行AECⅡ分离、纯化及原代培养,倒置相差显微镜下观察其细胞的形态及生长状况.通过激光共聚焦显微镜观察其肺表面活性蛋白C(SP-C)免疫荧光的阳性表达鉴定AEC Ⅱ.鉴定为AECⅡ的细胞通以高氧(氧流量为3 mL/min,测氧仪检测氧体积分数为930～970 mL/L),持续约5 min后立即停氧,用激光共聚焦显微镜动态观察[ca2+]I的变化情况,记录其随时间改变的动态变化曲线,同时观察钙离子荧光强度的变化并连续拍摄照片.结果 例置相差显微镜观察AEC Ⅱ呈岛状分布,铺路石状,细胞核及核仁明显,胞核圆形,胞浆内较多颗粒.激光共聚焦显微镜下可见AECⅡ胞浆中呈现绿色荧光的SP-C阳性表达.予AECⅡ高氧刺激时,[Ca2+]I出现短暂下降后持续上升,上升至一定程度后又缓慢下降,甚至出现[Ca2+]I耗竭现象,并维持该水平.予停氧刺激,[Ca2+]I出现短暂下降后迅速上升,然后逐渐趋于平稳.随着[Ca2+]I水平的增减,Ca2+荧光强度相应的增强或减弱.结论 高氧及给氧后停氧均可使[Ca2+]I产生明显变化,可能是高氧导致AECⅡ损伤的重要途径之一.
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高体积分数氧对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞硫氧还蛋白及其还原酶表达的影响
目的 探讨高体积分数氧(高氧)对胎鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC Ⅱ)硫氧还蛋白(Trx)及硫氧还蛋白还原酶(TrxR)表达的影响.方法 无菌条件下取孕19 d SD大鼠的胎鼠肺组织,剪碎.采用1 g/L胰酶和1 g/L胶原酶消化19 d胎鼠肺组织块,经差速离心和反复贴壁法,分离、纯化、原代培养胎鼠AEC Ⅱ,待其生长至亚融合状态时,随机分为空气和高氧组.于培养箱内静置30 min后,空气组置于同一室内空气中,高氧组通以1 000 mL/L纯氧(2 l/min)10 min;然后密封培养瓶,置培养箱中培养.二组分别培养12、24、48 h,倒置相差显微镜下观察高氧对其细胞形态及活性的影响;并采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测其Trx mRNA和TrxR mRNA表达.采用SPSS 13.0软件进行组间两样本均数t检验.结果 细胞爬片上AEC Ⅱ纯度为(94±2)%,表明所获细胞适合研究使用.与空气组比较,随时间延长,高氧暴露各时间点AEC Ⅱ生长状态明显不良;悬浮细胞增多,但大多数细胞仍具有活力;高氧暴露可促使AEC ⅡTrx mRNA、TrxR mRNA表达增加,且二者分别于24 h(t=2.471 P=0.033)和48 h(t=2.916 P=0.015)表达强.结论 高氧暴露可促使胎鼠AEC ⅡTrx mRNA和TrxR mRNA表达上调;Trx和TrxR的表达上调可能是高氧肺损伤的重要保护作用机制之一.
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钠-钾ATP酶介导间充质干细胞修复大鼠急性肺损伤
目的 探讨间充质干细胞(MSCs)旁分泌作用修复急性肺损伤(ALI)的机制.方法 实验设阴性组、炎症组、修复组及对照组,每组大鼠分别注射磷酸盐缓冲液(PBS)、脂多糖(LPS)、LPS+MSCs和MSCs,72h后测定肺湿/干比及制作苏木素-伊红(HE)病理切片.体外共培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)及MSCs,设置阴性组、炎症组、修复组及对照组,共培养72h后提取大鼠AT-Ⅱ蛋白及mRNA,Western blot及定量聚合酶链反应方法观察Na-K-ATPaseα1亚基在蛋白及基因水平的改变以及测定AT-Ⅱ的Na-K-ATPase活性.结果 LPS明显造成大鼠ALI,鼠尾静脉注入MSCs可明显缓解炎症损伤;阴性组、炎症组、修复组及对照组肺湿干比分别为:4.33±0.24、5.21±0.21、4.34±0.19和4.44±0.14,MSCs可明显降低肺湿/干比(P=0.000).体外实验证实MSCs可明显提高AT-Ⅱ的Na-K-ATPase活性.阴性组、炎症组、修复组及对照组Na-K-ATPase的活性分别为0.54±0.01、0.68±0.02、0.75±0.01和0.62±0.00,炎症环境可提高Na-K-ATPase活性,P=0.000;MSCs明显提高Na-K-ATPase活性,P=0.000.4组α1亚基蛋白表达分别为0.737±0.039、0.610±0.022、0.780±0.029 和0.838±0.022,MSCs明显提高Na-K-ATPaseα1亚基的蛋白表达,P=0.000.MSCs同时促进α1基因的表达,4组mRNA表达分别为1.000±0.000、0.787±0.044、3.960±0.091及4.466±0.071,P=0.000.结论 MSCs不仅提高AT-Ⅱ的Na-K-ATPaseα1亚基在蛋白和基因的表达,同时提高Na-K-ATPase活性,从而缓解ALI.
关键词： 间充质干细胞 肺泡Ⅱ型上皮细胞 Na-K-ATPase -
不同浓度氧气对脂多糖诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞炎性反应的影响
目的 观察不同浓度氧气对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AT-Ⅱ)分泌炎性因子的影响并探讨其机制.方法 原代培养的AT-Ⅱ随机分为5组(n=6):A、B、C、D组,E组分别置于无菌培养箱:A箱37℃、21％O2、5％ CO2,B箱37℃、21％O2、5％ CO2,C箱37℃、40％O2、55％N2、5％ CO2,D箱37℃、60％O2、35％N2、5％ CO2,E箱37℃、90％O2、5％ N2、5％CO2;24 h后酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞白细胞介素-8(IL-8)含量,反转录-聚合酶链反应(PT-PCR)及Western blot检测各组细胞p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK) mRNA及蛋白表达水平.结果 A、B、C、D、E组IL-8含量分别为(40.22 ±7.25)、(109.35±10.19)、(213.98±30.51)、(369.71 ±21.73)、(489.32 ±42.35) ng/L;p38MAPK mRNA表达水平分别为0.066± 0.010、0.163±0.008、0.228 ±0.027、0.268 ±0.016、0.292±0.010;p38 MAPK蛋白表达水平分别为0.055±0.005、0.124 ±0.006、0.182±0.009、0.227±0.013、0.303±0.010.与A组比较B、C、D、E组IL-8含量、p38MAPK mRNA和蛋白表达水平明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05);与B组比较C、D、E组IL-8含量、p38MAPK mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05);C、D、E组间两两比较IL-8含量、p38MAPK mRNA和蛋白表达水平逐渐升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 40％～90％的氧气可使LPS诱导的AT-Ⅱ分泌IL-8呈浓度依赖性增加,其机制可能与胞内p38MAPK表达上调有关.
关键词： 高氧性肺损伤 肺泡Ⅱ型上皮细胞 脂多糖 白细胞介素-8 p38丝裂原活化蛋白激酶 -
人羊膜匀浆上清液对脂多糖致伤条件下肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖及炎症因子分泌的影响
目的 观察人羊膜匀浆上清液(human amniotic homogenate supernatant,hAHS)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致伤条件下大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar typeⅡepithelial cell,AT-Ⅱ)增殖及肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)和白细胞介素1β(interleukin 1 beta,IL-1β)分泌的影响.方法 ①取健康胎盘来源的新鲜人羊膜制备hAHS,配制含hAHS体积分数不同的5组培养基(对照组、10％hAHS组、20％hAHS组、40％hAHS组、80％ hAHS组)对大鼠AT-Ⅱ行分组培养,四甲基偶氮唑盐(microeulture tetrazolium,MTT)法测不同时间点OD630值.②对对照组、LPS致伤组、40％hAHS干预组大鼠AT-Ⅱ行分组培养,MTT法和酶联免疫吸附剂测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法测不同时间点OD630值和培养液中大鼠TNF-α和IL-1β含量.结果 ①对数期内前4组间各时间点比较,hAHS体积分数相对较高组别的OD630值也相对较高(即40％ hAHS组＞20％hAHS组＞10％hAHS组＞对照组),且第3～5天均有统计学差异(P＜0.05),而hAHS含量更高的80％hAHS组,各时间点均低于40％ hAHS组,且第3～5天有统计学差异(P＜0.05).②hAHS干预组在24 h后各时间点的OD630值不仅均高于LPS致伤组,也均高于对照组,且均有统计学差异(P＜0.05).与此同时,hAHS干预组各时间点大鼠TNF-α和IL-1β含量均低于LPS致伤组,且二者均分别于前6h各时间点组间差异有统计学意义(P＜0.05).结论 hAHS可显著促进体外正常培养条件下AT-Ⅱ的增殖,且对LPS致伤条件下AT-Ⅱ的增殖和TNF-α、IL-1β等促炎因子分泌具有保护和抑制作用.
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肝细胞生长因子对转化生长因子诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化的影响
目的:研究肝细胞生长因子(HGF)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肺泡上皮细胞转分化的影响.方法:应用TGF-β1诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞转分化.将人肺腺癌A549细胞株培养液分为4组:①对照组;②HGF组;③TGF-β1组;④HGF+TGF-β1组,应用倒置相差显微镜观察细胞形态变化;免疫细胞化学方法检测肌成纤维细胞特异性标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肺泡上皮细胞特异性标志物肺泡表面活性蛋白A(SP-A)的表达.结果:①TGF-β1组肺泡上皮细胞从原来典型的上皮细胞形态转变为长梭形肌成纤维细胞样形态.②TGF-β1组的细胞α-SMA的表达明显增加,SP-A的表达明显减低.③HGF组的细胞形态学、α-SMA、SP-A的表达与对照组无明显差异.④HGF+TGF-β1组,多数细胞保持原来肺泡上皮细胞的形态,a-SMA表达明显低于TGF-β1组、SP-A表达明显高于TGF-β1组.结论:HGF能够在一定程度上负性调控TGF-β1诱导的肺泡上皮细胞的转分化.
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肺纤维化形成过程中大鼠成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响
目的:研究在平阳霉素诱导的大鼠肺纤维化形成过程中肺成纤维细胞对肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响.方法:先将大鼠分成平阳霉素组和生理盐水组,平阳霉索组气管内给药复制大鼠肺纤维化动物模氆(平阳霉素3 mg／kg),牛理盐水组气管内注射等量生理盐水,分别于7,28 d处死平阳霉素组大鼠10只,牛理盐水组大鼠4只,其中平阳霉素组及生理盐水组各取3只提取肺成纤维细胞,平阳霉素组6只提取大鼠原代Ⅱ犁肺泡上皮细胞,分别进行培养.待两种细胞均已贴壁后,再进行如下分组即:①实验组:用平阳霉索组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h;②对照组:用生理盐水组肺成纤维细胞上清液加入平阳霉素组肺泡Ⅱ型上皮细胞并培养48 h.用半定量RT-PCR法检测实验组和对照组中肺泡Ⅱ型上皮细胞SP-A,TGF-(e)及HGF mRNA表达的变化.结果:①SP-A mRNA和HGF mRNA的表达实验组低于对照组(P
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体外培养肺泡Ⅱ型细胞Flk-1受体表达的研究
目的:研究体外培养的肺泡Ⅱ型细胞(AECⅡ)VEGF,Flt-1,Flk-1,SP-B的表达.方法:体外培养AECⅡ,采用免疫组织化学方法和电镜鉴定细胞,然后应用SABC法检测AECⅡ的VEGF,Flt-1,Flk-1, SP-B 的表达.结果:AECⅡ培养72 h,Flt-1,Flk-1,VEGF阳性表达,SP-B阴性表达.结论:体外培养的AECⅡ,表达Flt-1、Flk-1等受体,人工干预应用VEGF可能发生一系列信号转导,为医学研究应用VEGF提供理论依据.
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肺泡Ⅱ型细胞培养方法的探讨
目的:研究不同方法对体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间的影响.方法:不同浓度胰蛋白酶消化法和胰蛋白酶加胶原酶消化法消化、分离组织,低密度接种,常规浓度含血清培养和无血清培养,抗大鼠IgG包被与不包被,倒置显微镜观察细胞生长,检测细胞活力,免疫组织化学方法鉴定细胞纯度和电镜检测鉴定细胞.结果:两种方法消化、分离组织,肺泡Ⅱ型上皮细胞纯度、活力、产量、存活时间经统计学分析无显著性差异.结论:不同浓度胰蛋白酶消化分离肺组织程序相对简单、低密度接种、无血清培养所得细胞纯度能够满足体外研究肺泡Ⅱ型上皮细胞功能的需要,从而简化了体外培养肺泡Ⅱ型上皮细胞的程序.
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利多卡因对高氧暴露早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用
目的 观察利多卡因(Lido)对高氧暴露的早产大鼠肺泡型上皮细胞(AEC Ⅱ)增殖和凋亡的影响,为防治早产儿高氧肺损伤提供依据.方法 原代培养的早产大鼠AEC Ⅱ随机分为4组:空气组、高氧组、空气+Lido组、高氧+Lido组.高氧、高氧+ Lido组按5 L/min通入95% O2/5% CO2高纯混合气,10 min后密封.空气+ Lido,高氧+Lido组加入20 μg/mL Lido.各组均置于培养箱(37℃,5% CO2)中培养24 h,收集各组细胞,采用流式细胞仪检测AEC Ⅱ凋亡率和细胞周期;运用Western blot检测增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达.结果 与空气组比较,高氧组AEC Ⅱ凋亡率增高,G2/M,S期细胞比例明显降低(P＜0.01);PCNA蛋白表达明显下调(P＜0.01).而Lido干预后可使AEC Ⅱ凋亡率降低,G2/M、S期细胞比例增高,PCNA蛋白表达上调.结论 高氧可使早产大鼠AEC Ⅱ凋亡增加,增殖抑制;Lido对高氧所致的AEC Ⅱ损伤有直接的抑制作用.
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急性肺损伤幼鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞和SP-A变化相关性的研究
目的 该实验旨在研究急性肺损伤(ALI)时肺泡Ⅱ型上皮细胞(AEC-Ⅱ)超微结构变化和肺组织表面活性蛋白SP-A含量的变化关系,从而探讨ALI的发病机制.方法 48只Sprague-Dawley幼鼠被随机分为正常对照组和ALI组.腹腔注射脂多糖(I,Ps,4 mg/kg)建立ALI模型,正常对照组注射等量生理盐水.LPS注射后24,48,72 h每亚组各处死8只大鼠.取左肺下肺组织待透射电镜检查.用Western blot方法测定肺组织SP-A的相对含量.结果 ALI 24 h时,AEC-Ⅱ微绒毛消失.24 h及48 h时板层小体(lamellar body,Lb)数量增加,体积增大,密度减低,排空明显增强,呈指环状绕核排列,细胞增生活跃,代谢旺盛.48 h时Lb呈巨大空泡样变性.肺组织SP-A含量明显高于对照组(24 h时ALI组为6.52±0.62,对照组为5.02 4±0.35,P＜0.01;48 h时ALI组为6.65 4±0.62,对照组为5.01 4±0.36,P＜0.01).72 h时Lb破溃,数目明显减少,细胞核形态不规则,部分核边界不清,肺组织SP-A含量下降(ALI组为3.87 4±0.50,对照组为5.22 4±0.36,P＜0.01).结论 LPS致幼鼠ALI时AEC-Ⅱ和肺组织SP-A的变化为时间依赖性,随AEC-Ⅱ损伤程度的加重肺组织SP-A由代偿转为失代偿,可能是发生ARDS的重要机制之一.
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阿奇霉素对香烟烟雾致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用及其机制研究
目的 香烟烟雾提取物(CSE)可导致肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤、核因子-кB(NF-кB)活化和肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌增加,阿奇霉素对CSE诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞(A549)中的这些损伤是否有保护作用目前尚不清楚,该实验对此进行研究并探讨其作用机制.方法 体外培养A549,分为空白对照组、阿奇霉素阴性对照组、CSE组和CSE+阿奇霉素组,在8 h后使用倒置显微镜、免疫组化染色(SP)和酶联免疫法(ELISA)观察检测上述条件下A549细胞的形态、NF-кB活化和分泌TNF-α水平的变化.结果 CSE可导致细胞形态和结构的改变,同时诱导产生染色呈深棕黄色颗粒的强阳性NF-кB细胞,其TNF-α分泌水平达0.307±0.036 pg/mL,而CSE+阿奇霉素组细胞形态和结构有所恢复,NF-кB染色亦相对变浅,TNF-α水平较CSE组减少,为0.269±0.009 pg/mL,空白对照组、阿奇霉素阴性对照组无上述形态学变化,NF-кB染色为蓝紫色,TNF-α水平分别为0.234±0.028 pg/mL和0.259±0.014 pg/mL.结论 阿奇霉素可部分抑制CSE刺激的细胞NF-кB活化,减少TNF-α的分泌,减轻CSE对肺泡Ⅱ型上皮细胞的毒性作用.
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地塞米松对脂多糖诱导的急性肺损伤幼鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的影响
目的 肺泡Ⅱ型上皮细胞对维持肺表面活性物质的动态平衡和肺免疫功能具有极其重要的意义.地塞米松对急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的影响目前仍不清楚.该研究探讨急性肺损伤时及应用地塞米松干预后肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的动态变化.方法 72只21d SD幼鼠随机分为对照组、急性肺损伤组和地塞米松治疗组.肺损伤组的幼鼠腹腔注射脂多糖(LPS)(4mg/kg)以建立急性肺损伤模型.对照组注射等量生理盐水.地塞米松治疗组在注射LPS 1h后腹腔注射地塞米松(5mg/kg).每组随机选取8只幼鼠分别于注射LPS或生理盐水后24、48、72h处死.取左肺下1mm3的肺组织固定于2.5%戊二醛中待透射电镜检查.结果 注射LPS 24h后,肺损伤组大鼠AT Ⅱ细胞微绒毛消失,板层小体数量增加.24及48h板层小体呈指环状绕核排列.48h出现巨大空泡变性样的板层小体.细胞核形态不规则,部分核边界不清.72h板层小体数目明显减少,核仁从细胞核消失,一些细胞核出现核溶解.注射LPS后24h地塞米松治疗组板层小体聚集在AT Ⅱ细胞内同侧,并于该侧发生"胞吐"现象.48h线粒体肿胀、聚集,脊断裂,板层小体数目减少.72h板层小体数目增多,并重新呈指环状绕核排列.结论 LPS诱导的急性肺损伤肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的一系列变化呈时间依赖性.
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肺表面活性物质蛋白-D在脂多糖诱导的急性肺损伤幼鼠中的时序变化
目的肺表面活性物质蛋白D(SP-D)被认为是急性肺损伤(ALI)和急性呼吸窘迫综合征(ARDS)有价值的生物指标,但在急性肺损伤早期,肺组织SP-D的变化特征仍不清楚.该研究旨在探究脂多糖(LPS)诱导的SD幼鼠急性肺损伤时SP-D,SP-D mRNA的时序变化及肺泡Ⅱ型上皮细胞及板层小体的超微结构的变化.方法腹腔内注射LPS建立急性肺损伤模型.注射后6,12,24,36,48,72 h各处死8只大鼠.Western blot和RT-PCR方法测定肺组织SP-D和SP-D mRNA的含量.透射电子显微镜研究肺泡Ⅱ型上皮细胞超微结构的变化.结果LPS注射12 h后SP-D和SP-D mRNA含量均开始下降.SP-D mRNA于注射LPS后24～36 h降到低.SP-D在48 h达低点.透射电镜显示急性肺损伤组板层小体出现多样变形,特别是在注射后48 h.LPS导致板层小体的体积增大、数量减少,伴有大量空泡样变.结论在LPS诱导的急性肺损伤的早期SP-D的波动变化呈时间依赖性.肺组织SP-D在48 h时水平低,此时伴有肺泡Ⅱ型上皮细胞严重的多形性变.在ALI发病初期,肺组织低水平的SP-D与较差的临床预后有关.
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需肌醇酶1介导的内质网应激通路参与高氧所致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡
目的：探讨需肌醇酶1（IRE1）介导的内质网应激通路与高氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）凋亡的关系。方法原代培养早产大鼠AECⅡ，随机分为空气组和高氧组，建立高氧细胞损伤模型。在24、48及72?h收集细胞，倒置相差显微镜观察细胞形态变化；Annexin?V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；RT-PCR及Western?blot分别检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、IRE1、X盒结合蛋白1（XBP1）及C/EBP同源蛋白（CHOP） mRNA及蛋白表达；免疫荧光检测CHOP表达。结果随着给氧时间延长，高氧组AECⅡ伸展呈不规则形，出现空泡样改变；高氧组AECⅡ凋亡率与同时间点空气组比较明显增加（P<0.05）；随着氧暴露时间延长，高氧组GRP78、IRE1、XBP1及CHOP?mRNA及蛋白表达升高，且较同时间点空气组明显上升（P<0.05）；高氧组CHOP荧光强度高于同时间点空气组。高氧组CHOP蛋白表达与AECⅡ凋亡率、IRE1及XBP1蛋白表达呈显著正相关（r=0.97、0.85、0.88，均P<0.05）。结论高氧所致AECⅡ凋亡可能是通过激活IRE1-XBP1-CHOP通路来实现。
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肝细胞生长因子对高氧暴露早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞增殖与凋亡的影响
目的:观察肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)对高氧暴露体外培养的早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(Type Ⅱ alveolar epithelial cells,AEC Ⅱ)增殖、凋亡及功能的影响,探讨HGF对高氧肺损伤保护作用的机制.方法:原代培养早产鼠AEC Ⅱ,纯化后随机分为4组:空气组(Air)、高氧组(HO)、空气+HGF组(Air+HGF)、高氧+HGF组(HO+HGF).采用流式细胞术及免疫印迹(Western blot)法观察AEC Ⅱ的增殖和凋亡情况,RT-PCR分析各组肺泡表面活性物质蛋白(surfactant associated protein,SP)SPA,SPB,SPC mRNA表达.结果:(1)各组细胞周期比例及细胞凋亡显示,与Air组比,HO组Sub G1(代表凋亡细胞比例),G0期/G1期细胞比例明显增高(P＜0.01),G2期/M期细胞比例明显降低(P＜0.01);Air+HGF组S期细胞比例明显增高(P＜0.01).与HO组比,HO+HGF组G0期/G1期细胞比例显著降低(P＜0.01),S期和G2期/M期细胞比例明显增高(P＜0.01).(2)各组增殖细胞核抗原表达显示,HO组显著低于Air组(P＜0.01),Air+HGF组明显高于Air组(P＜0.05);HO +HGF明显高于HO组(P＜0.05).(3)各组SPA,SPB,SPC mRNA表达显示,HO组强度较Air组弱(P＜0.01),而HO+HGF组较HO组明显增加(P＜0.05).结论:高氧导致早产鼠AEC Ⅱ增殖抑制,凋亡增加,SPA,SPB,SPC mRNA表达降低,HGF可部分抑制这种变化,提示HGF对高氧肺损伤起一定的保护作用.
关键词： 肝细胞生长因子 肺泡Ⅱ型上皮细胞 高浓度氧 肺泡表面活性物质蛋白 早产大鼠 -
利多卡因对LPS致大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞损伤的保护作用
目的:观察利多卡因 (lidocaine,Lido)抗LPS所致的大鼠肺泡Ⅱ型上皮(AT-Ⅱ)细胞凋亡作用.方法:体外培养的大鼠AT-Ⅱ细胞暴露到LPS和Lido中24 h后,采用流式细胞仪(FCM)及电镜检测AT-Ⅱ细胞凋亡和坏死率;乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测LDH活性.结果:LPS可直接导致AT-Ⅱ细胞损伤,表现为AT-Ⅱ细胞坏死和凋亡发生率增高,LDH释放量增多.Lido能降低AT-Ⅱ细胞凋亡率.结论:Lido对LPS所致的AT-Ⅱ细胞凋亡和坏死有直接的抑制作用.
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内皮素-1对肺泡Ⅱ型上皮细胞肺表面活性物质合成的调控
采用离体培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞(ATⅡ)观察内皮素-1(ET-1)对肺表面活性物质(PS)合成的影响.结果显示:10-11～10-8mol.L-1的ET-1可促进PS的合成,量-效关系显著.与肺组织块培养相比,促进ATⅡ细胞PS合成所需的ET-1浓度较大.ET-1的促PS合成效应可被ETA受体拮抗剂BQ123阻断,而不受ETB受体拮抗剂BQ788影响.ET-1作用16h对ATⅡ型细胞的增殖无显著影响.结果表明,ET-1既可通过ETA受体直接促进ATⅡ细胞合成PS,又可通过其它肺细胞实现对ATⅡ细胞的间接调控.
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不同氧浓度暴露对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的损伤及CGRP的保护效应
目的 观察不同氧浓度对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞( AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用. 方法 将原代分离培养的孕19天早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,随机分为空气组、40％氧组、60％氧组、80％氧组及相关浓度氧CGRP组与相关浓度氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21％的空气或40％、60％、80％的氧气中暴露24 h；CGRP组在暴露前加入CGRP;CGRP拮抗剂组在CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP8-37).培养24h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平；用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率；用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SP-C)的mRNA表达. 结果 与空气组比较,40％、60％、80％氧组MDA、ROS及细胞调亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均显著降低(P均＜0.01).与氧气组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞调亡率均显著下降；而TAOC、SOD水平及SP-C mRNA表达均明显增高(P＜0.01).高氧CGRP拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无显著性. 结论 高于40％氧暴露24h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SP-C mRNA表达下降；随着氧浓度增加,损伤加重；而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SP-C mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.
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老年大鼠肺表面活性物质相关蛋白C mRNA表达
目的探讨老年大鼠肺表面活性物质相关蛋白C(SP-C)的变化.方法观察老年组大鼠(26月)及青年组大鼠(3月)光镜下肺组织结构、肺组织SP-C mRNA表达.结果老年组大鼠肺泡囊扩张、肺泡腔轻度扩大.肺组织SP-C mRNA表达降低,占青年组的50%.结论老年大鼠SP-C mRNA表达下降.肺泡Ⅱ型上皮细胞可能参与了肺老化过程.
关键词： 肺老化 大鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 肺表面活性物相关蛋白C
