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内质网应激诱导细胞凋亡机制的研究进展
内质网应激在多种疾病的发病机制中起到关键作用,持续或强烈的内质网应激反应可诱导细胞凋亡,然而对内质网应激诱导细胞凋亡的机制尚不清楚.近几年的研究发现未折叠蛋白反应(unfolded protein response,UPR)通路既可促进细胞生存又可诱导细胞凋亡,与UPR的多条通路对蛋白翻译、过氧化物质产生、Bcl-2蛋白表达、钙离子浓度、microRNA表达及JNK通路等的精确调节有关.
关键词： 内质网应激 细胞凋亡 需肌醇酶1 蛋白激酶R样内质网激酶 活化转录因子-6 -
需肌醇酶1介导的内质网应激通路参与高氧所致早产大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞凋亡
目的：探讨需肌醇酶1（IRE1）介导的内质网应激通路与高氧暴露肺泡Ⅱ型上皮细胞（AECⅡ）凋亡的关系。方法原代培养早产大鼠AECⅡ，随机分为空气组和高氧组，建立高氧细胞损伤模型。在24、48及72?h收集细胞，倒置相差显微镜观察细胞形态变化；Annexin?V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；RT-PCR及Western?blot分别检测葡萄糖调节蛋白78（GRP78）、IRE1、X盒结合蛋白1（XBP1）及C/EBP同源蛋白（CHOP） mRNA及蛋白表达；免疫荧光检测CHOP表达。结果随着给氧时间延长，高氧组AECⅡ伸展呈不规则形，出现空泡样改变；高氧组AECⅡ凋亡率与同时间点空气组比较明显增加（P<0.05）；随着氧暴露时间延长，高氧组GRP78、IRE1、XBP1及CHOP?mRNA及蛋白表达升高，且较同时间点空气组明显上升（P<0.05）；高氧组CHOP荧光强度高于同时间点空气组。高氧组CHOP蛋白表达与AECⅡ凋亡率、IRE1及XBP1蛋白表达呈显著正相关（r=0.97、0.85、0.88，均P<0.05）。结论高氧所致AECⅡ凋亡可能是通过激活IRE1-XBP1-CHOP通路来实现。
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内质网应激及未折叠蛋白反应通路研究进展
目前,内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)及未折叠蛋白反应(Unfolded protein response,UPR)通路是毒理学研究中的热点.当毒物进入机体后,将影响内质网等细胞器的结构和功能,从而干扰和破坏机体的内稳态,引起暂时性或持久性的病理反应,甚至危及生命.但机体有防御机制,由毒物引起的ERS可通过诱发UPR来维持内质网稳态和恢复细胞功能,是细胞适应的一种自身保护机制.ERS以及相伴随的UPR对决定细胞的结局起重要作用.本文主要阐述UPR信号通路的组成、激活机制和调控机制等内容.
关键词： 内质网应激 未折叠蛋白反应 需肌醇酶1 蛋白激酶样内质网激酶 转录激活因子6 -
内质网应激中IRE1级联反应对动脉粥样硬化的作用
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酵母双杂交系统筛选IRE1相互作用的蛋白质
目的:寻找与需肌醇酶1(IRE1)相互作用的蛋白质,研究该基因的功能及其在肝细胞凋亡中的作用.方法:采用酵母双杂交方法,分别以hIRE1α(人IRE1α)N端段1～465位氨基酸及C端段468～977位氨基酸为诱饵,与人睾丸cDNA文库质粒先后转化AH109酵母菌株,经三重/四重营养缺陷培养基及X-α-GAL半乳糖苷酶试验筛选,将PCR鉴定为阳性的酵母质粒转入大肠杆菌,提取质粒并测序,进行生物信息学分析.后通过酵母回转杂交实验对获得的相互作用加以验证.结果:成功构建诱饵质粒pGBKT7-IRE1N及pGBKT7-IRE1C,并在酵母中正确表达融合蛋白,自激活检测及毒性检测均为阴性.分别筛选出8个及15个与IRE1相互作用的蛋白质;通过回转实验验证,确定了能与IRE1 C端段相互作用的基因SHISA5,其编码产物为SCOTIN,是P53相关定位于内质网的凋亡诱导蛋白.结论:SCOTIN与IRE1的相互作用提示内质网应激诱导的凋亡与P53通路有关.
