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喹乙醇致大鼠肝脏损伤的实验研究
目的 探讨喹乙醇(0LA)染毒对实验大鼠肝脏炎症反应及抗氧化酶活性的影响,为OLA致肝损伤机制研究提供理论依据.方法 健康雄性SD大鼠32只(SPF级),随机分为对照组、20 mg/kg OLA组、40 mg/kg OLA组和60 mg/kg OLA组,每组实验动物8只.不同剂量OLA染毒组大鼠通过灌胃给不同浓度等体积的OLA溶液;对照组灌胃等体积双蒸水.染毒4周后处死大鼠,留取肝组织做病理观察,应用酶联免疫吸附(ELISA)测定肝组织中白细胞介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和乳酸脱氢酶(LDH)活性,以及肝脏总抗氧化能力(T-AOC)和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性.结果 随着OLA染毒剂量的增加,血清中ALT、AST、ALP和LDH含量逐渐升高;肝组织中T-AOC和SOD、GSH-Px、CAT活性逐渐降低.与对照组比较,OLA组肝组织中TNF-α分别升高了11.68％、12.74％和19.33％,差异有统计学意义(P ＜0.05);IL-6分别升高了45.99％、70.81％和82.92％,差异有统计学意义(P＜0.05);大鼠肝组织TNF-α和IL-6含量与染毒剂量呈正相关(r=0.948,P=0.026和r=0.954,P=0.023).大鼠肝脏病理观察,OLA组大鼠肝脏汇管区炎性细胞浸润明显.结论 OLA染毒可致大鼠肝组织中发生炎症反应,继而引起肝组织损伤.
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细胞色素P450酶系对喹乙醇诱导的肾细胞凋亡的影响
目的 采用体外细胞培养系统,研究肝脏微粒体细胞色素P450同工酶对喹乙醇(OLA)毒性的影响,筛选和确定影响喹乙醇毒性的主要细胞色素P450同工酶,探索CYP450酶系选择性介导OLA-ROS-细胞凋亡途径.方法 (1)以体外培养的人类肾小管上皮细胞(HK-2)作为检测OLA致肾小管毒性的细胞模型,以脏微粒体混合酶系(S9)加入到HK-2细胞培养中模拟体内代谢环境,将CYP450同工酶(CYP2D6、NADPH:P450还原酶、CYP2A、CYP3A、CYP2C、CYP2E1和CYP1A1/CYP1A2)的化学抑制剂分别加入培养体系中,造成不同P450同工酶活性抑制状况,通过细胞增殖抑制率(MTT)试验来检测OLA单独染毒或OLA与抑制剂联合染毒情况下的细胞毒性.(2)通过流式细胞仪DCF法检测各CYP450同工酶抑制剂对OLA所致HK-2细胞ROS产生情况的影响,筛选HK-2细胞内影响OLA作用的主要CYP450同工酶,推测其代谢路径.结果 (1)MTT检测发现,OLA+S9+α-萘黄酮组与OLA+S9组之间以及OLA+4-甲基吡唑+S9组与OLA+S9组之间细胞活性差异有统计学意义(P＜0.05),表明通过抑制CYP4501A酶以及CPY2E1活性可以使OLA的细胞毒性减轻.(2)OLA能够呈剂量依赖性的诱发细胞内ROS含量升高,且加入CYP1A抑制剂以及CPY2E1抑制剂后,可显著减少HK-2细胞ROS的产生量.结论 OLA通过CYP1A和CYP2E1的代谢诱导HK-2细胞生成ROS,进而可能诱发HK-2细胞的凋亡产生细胞毒性和肾毒性.
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喹乙醇致肾脏毒性的内质网应激相关凋亡途径研究
目的 通过喹乙醇染毒人源肾小管上皮细胞(HK-2细胞)并检测活性氧(ROS)和凋亡相关蛋白的表达,探讨喹乙醇肾脏毒性产生过程及其可能的内质网应激相关凋亡机制.方法 分别以不同浓度(1、2、3、4、5、6、7和8μmol/ml)喹乙醇染毒HK-2细胞24 h,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖率以确定剂量-效应关系;Hoechst-33258荧光染色检测各组细胞凋亡形态,流式细胞仪检测各组细胞凋亡率和细胞内活性氧含量;免疫印迹法(Western blot)检测内质网应激相关凋亡蛋白葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、葡萄糖调节蛋白94(GRP94)和凋亡促进因子CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)的表达.结果 根据MTT毒性实验结果,喹乙醇对HK-2细胞凋亡效应的适宜剂量确定为1、2、3和4 μmol/ml.在喹乙醇不同剂量观察组中,喹乙醇染毒2μmol/ml以上剂量组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94和CHOP表达增加,喹乙醇各染毒剂量均可见活性氧水平增加(P＜0.05);在喹乙醇不同染毒时间观察组中,喹乙醇染毒12和24 h组,细胞凋亡率、内质网凋亡相关蛋白GRP79、GRP94表达增加,喹乙醇染毒6、12和24 h组,活性氧水平、内质网凋亡相关蛋白CHOP表达增加(P＜0.05).结论 喹乙醇可致肾小管上皮细胞发生细胞凋亡从而造成肾脏毒性,凋亡的发生可能与内质网应激相关凋亡途径相关.
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喹乙醇诱导细胞凋亡通路的研究进展
喹乙醇作为一种抗菌促生长类兽药,能够通过环境转归和生物链富集作用危害人类健康.本文从构效关系和上下游通路角度出发,以细胞凋亡发生阶段为主线,对喹乙醇诱导细胞凋亡分子机制加以综述,综合分析了喹乙醇代谢产生ROS,诱导p53、Bax、Bcl、c-myc、p38MAPK蛋白表达和转录水平变化及对caspase酶系、细胞色素c的影响等过程.在此基础上提出了喹乙醇致细胞凋亡的可能途径,以期为喹乙醇健康损伤效应位点和方式的进一步研究提供依据.
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高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中的喹乙醇
为测定水产品中喹乙醇的残留量,建立了高效液相色谱-串联质谱联用(HPLC-MS/MS)的测定方法.均质后的试样经水提取、液-液分配净化后,采用ZORBAX SB-C18色谱柱,并以0.1%乙酸+乙腈(70+30,体积分数)为流动相,色谱分离后直接进入串联质谱检测器.采用电喷雾正离子,多反应监测(MRM)模式检测,外标法定量.方法的检出限为10 μg/kg,浓度在0.5～500μg/kg范围内,线性良好(r=0.998 9),添加浓度在10～500μg/kg时,不同水产品基质的回收率在74.3%～93.5%之间,相对标准偏差(RSD)小于5.6%.本方法检出限低,回收率高,定性可靠,定量准确,适合于水产品中喹乙醇残留的检测.
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超高效液相色谱-串联质谱法测定纯牛奶中喹乙醇及其代谢物
目的 建立可靠的前处理方法,采用超高效液相色谱-串联质谱法检测纯牛奶中喹乙醇及其代谢物3-甲基-喹嗯啉-2-羧酸(MQCA).方法 样品经盐酸水解,乙腈-乙酸乙酯(1∶1,V/V)提取,分析了直接浓缩及分别经PAX、PEP固相萃取小柱净化、富集的结果;以乙腈-0.05％氨水为流动相,经Inertsil ODS-3色谱柱(2.1 mm×100mm,3μm)分离,采用多反应监测正离子模式进行定性及定量分析.结果 直接浓缩具有较好的回收率,喹乙醇的方法检出限为0.06 μg/kg,方法定量限为0.20μg/kg,在0.20、1.00、5.00 μg/kg 3个加标水平下回收率分别为69.8％、111％、97.4％;MQCA的方法检出限为0.02 μg/kg,方法定量限为0.10 μg/kg,在0.10、1.00、3.00 μg/kg 3个加标水平下回收率分别为75.8％、112％、117％.结论 该检测方法适用于纯牛奶中喹乙醇及其代谢物残留的检测.
关键词： 喹乙醇 3-甲基-喹噁啉-2-羧酸 超高效液相色谱-串联质谱 纯牛奶 兽药残留 -
HPLC-PDAD/MS法检测中兽药散剂中违规添加2种喹喔啉二氧化物的研究
目的:建立检测止痢散等7种中兽药散剂中违规添加喹乙醇、乙酰甲喹的HPLC-PDAD法,并用MS进行确证.方法:根据处方和临床治疗量配制阴性中兽药散剂和阳性供试品；用90％乙腈提取,HPLC-PDAD法进行检测,并用MS进行确证.结果:检出限为0.05 g·kg-1,喹乙醇和乙酰甲喹在止痢散中的平均回收率分别为93.69％和101.22％.结论:该方法快速、简便、准确,可用于中兽药散剂中违规添加喹乙醇、乙酰甲喹的检测.
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淡水鱼中喹乙醇含量的液相色谱测定法
目的 建立高效液相色谱(HPLC)法测定淡水鱼中喹乙醇含量的快速、简便分析方法.方法 鱼糜经提取、净化处理后,利用HPLC对提取液中喹乙醇进行分离,定量测定.结果 喹乙醇线性范围为10～100μg/ml,相关系数0.9999,回收率93.5％～119.5％,检出限250μg/kg,精密度1.34％.结论 该法是一种简便、快捷、准确、可靠的测定淡水鱼中喹乙醇含量的方法.
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瘦肉型猪水肿病的诊断与防治
吉林省镇赉县某养猪场自行繁殖的瘦肉型猪长白猪在60日龄前后分别完成了猪瘟、丹毒等预防注射.在管理上全期舍饲.为了取得更快的生长优势,在饲料中另加喹乙醇100g/t,由50日龄起连续喂服60余天,在3 4月龄时猪群中,突然发生以痉挛、抽搐、运动障碍、眼睑水肿和高烧为主征的病猪1头,经抢救无效死亡.以后又间断发生类似的病猪19头,发病率(20/178)11%,死亡率(7/20)35%,通过病理学、病原学检查诊断为猪水肿病.
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喹乙醇耐药基因oqxAB的发现与流行
喹乙醇是一种喹噁啉-N1,N4-二氧化物,作为动物生长促进剂而被广泛使用,曾被认为是一种相对安全的抗菌药物.随着该药物在养殖业中的长期使用,其耐药问题也逐步被认识.2003年从丹麦猪粪中分离出一株大肠杆菌,含有介导喹乙醇耐药的接合型质粒pOLA52.次年研究发现质粒pOLA52携带外排泵基因oqxAB,不仅介导喹乙醇耐药,还能降低细菌对氯霉素、喹诺酮类药物的敏感性.因此,2009年oqxAB基因也被归为一种质粒介导的喹诺酮类药物耐药(Plasmid-mediatedquinolone resistance,PMQR)基因.本文对喹乙醇耐药基因oqxAB的发现与流行做一综述.
关键词： 喹乙醇 oqxAB 质粒介导的喹诺酮类药物耐药性 -
喹乙醇喂鸡不能再用
2003年7月养殖大户王幕养了两千只蛋鸡,已有170天,一天只产十几斤蛋,几天前因急着催鸡产蛋,在饲料中添加了喹乙醇原粉,已喂了七天,喂后第5天开始产蛋更少,第6天就出现死鸡三十只,第7天死了四十七只.诊为喹乙醇中毒,损失惨重.
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高效液相色谱法测定猪肉中的喹乙醇残留量的研究
目的 为测定猪肉中喹乙醇的残留量,建立高效液相色谱的测定方法.方法 本文重点研究了喹乙醇残留测定的样品前处理部分,采用不同有机溶液和水进行不同比例混合,优化了样品前处理的条件及测定条件.终采用均质后的试样在60℃水浴的条件下经甲醇+水(50 +50)提取10 min、再经过正已烷的液-液分配净化后,采用旋转蒸发和真空浓缩技术进行浓缩、定容,后经高速离心后取上清液上机.以0.1％乙酸+乙腈(70+ 30,V/V)为流动相,色谱柱分离后以DAD检测器(二极管阵列检测器)进行测定,外标法定量.结果 方法的检出限为40 μg/kg,浓度在2.0μg/ml～10.0 μg/ml范围内,线性良好(r=0.9998),添加浓度在0.5 mg/kg～2.25 mg/kg时,回收率在83.2％～ 84.6％之间,相对标准偏差1.2％ ～2.2％.结论 本方法检出限低,回收率高,定性可靠,定量准确,适合于猪肉中喹乙醇残留的检测.
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高效液相色谱法快速检测肉类食品中的喹乙醇残留
目的 建立肉类食品中喹乙醇残留的高效液相色谱快速检测方法.方法 筛选高效液相色谱法检测喹乙醇残留的佳色谱条件,选用Phenomenex-C18柱(4.6mm×250mm,5μm)为色谱柱,流动相为水-甲醇(15∶85),流速为1.0 ml/min,柱温35 ℃,检测波长为373 nm,同时检测肉类食品中的喹乙醇残留及加标回收率,作方法学验证.结果 喹乙醇在0.1060 μg/ml ～ 10.60 μg/ml的浓度范围内,线性良好,线性方程Y=22288X+ 406.65,r=0.9992.当样品添加一定浓度的标准时,方法回收率为73.6％～ 83.4％,RSD在0.85％～2.00％之间(n=3).结论 以高效液相色谱法快速检测肉类食品中的喹乙醇残留,操作简便、定量准确可靠,适用于肉类食品中非法添加的喹乙醇的检测.
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超高效液相色谱法测定肉制品中喹乙醇
目的:建立超高效液相色谱测定肉制品中喹乙醇的方法.方法:采用5％甲醇作为提取液,Oasis HLB固相萃取小柱净化进行样品前处理,超高效液相色谱-紫外检测器测定.色谱柱XTerra(R) Ms C18 3.5 μm×2.1 mm×100 mm,流速:0.3 ml/min,流动相:甲醇∶水=10∶90,柱温30℃,检测波长260 nm,进样量:10μl.结果:喹乙醇方法检出限0.04 mg/kg,在0 mg/L ～ 10.0 mg/L范围内呈良好线性关系,相关系数r=0.9992.方法平均回收率为85.9％,RSD为4.2％.结论:本方法适用于肉制品中喹乙醇的测定.
关键词： Oasis HLB固相萃取小柱 超高效液相色谱 肉制品 喹乙醇 -
喹乙醇残留速测金标试纸条的研制
目的 应用胶体金免疫层析技术,研制出一种准确、快速、简便检测喹乙醇残留的试纸条.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记喹乙醇单克隆抗体,将金标抗体喷涂于玻璃纤维上,喹乙醇偶联抗原和羊抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维素膜上作检测线和质控线,经过竞争反应后目测结果.结果 制备的试纸条特异性好,与常用的几种抗生素无交叉反应,试纸条对鸡肝脏、鱼肉和饲料样品中喹乙醇的低检测量分别为1.5 μg/g、1.5 μg/g和2.0 μg/g.结论 该法简单方便,非常适合现场快速检测喹乙醇.
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斑马鱼体内喹乙醇的检测技术及富集特性研究
目的 优化鱼体内喹乙醇及代谢物的检测技术,探明兽药抗菌剂喹乙醇的生物富集特性.方法 选择斑马鱼作为受试生物,通过检出效率试验确定了斑马鱼体内喹乙醇及代谢物MQCA的检测方法;采用半静态试验测定了2个暴露水平下喹乙醇的生物富集特性.结果 乙腈超声提取-柱层析净化-高效液相色谱/质谱联用测定法(HPLC/MS)可同步检出斑马鱼体内喹乙醇及代谢标志物MQCA的含量;斑马鱼体内喹乙醇在的大富集量分别出现在第4天(暴露浓度0.25mg/L)和第6天(暴露浓度lmg/L),生物富集系数为0.18～0.30,实验期内代谢物MQCA的大残留浓度为0.013～0.016mg/kg,出现在第2天(喹乙醇暴露浓度lmg/L)和第4天(喹乙醇暴露浓度0.25mg/L).结论 本文建立的喹乙醇及其代谢物的检测技术准确可靠,单一水溶液暴露方式下斑马鱼对喹乙醇的富集性较低,本研究为该类药物的慢性毒性评价提供了基础数据支撑.
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动物喹乙醇中毒浅析
喹乙醇(Olaquindox)属喹哑琳类药物,是价廉、有很好抗菌促生长作用的饲料添加剂,在养殖业中得到了广泛的应用.但是喹乙醇很容易引起动物中毒,鸡、鸭、鱼对喹乙醇均较敏感.因此我们要重视喹乙醇的蓄积毒性作用及其残留肉食中对人体健康的危害.有关喹乙醇的致突变性问题仍须深人研究.
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p38MAPK在喹乙醇诱导HepG2细胞凋亡中的作用
目的:研究p38 MAPK信号通路在喹乙醇诱导的HepG2细胞凋亡中的作用.方法:分别用不同浓度(0、200、400、800μg/ml)的喹乙醇染毒HepG2细胞24h和800μg/ml喹乙醇染毒HepG2细胞不同时间(0、0.5、1、2、4、6、12、24 h)后,采用Western blot法检测细胞内磷酸化p38蛋白和p38总蛋白的表达情况,以p38 MAPK磷酸化水平反映p38 MAPK信号通路的活性.分别采用0、10、20μmol/L的p38 MAPK特异性抑制剂SB203580预处理HepG2细胞1h后,再用800μg/ml喹乙醇染毒24h,采用Annexin VFITC/PI法检测细胞凋亡.结果:随着喹乙醇染毒浓度和时间的增加,HepG2细胞的p38磷酸化蛋白表达量逐步增加,其中800μg/ml喹乙醇染毒细胞24h的实验组与对照组相比,p38磷酸化蛋白的表达量明显上调(P＜0.01).10、20μmol/L的SB203580对喹乙醇诱导细胞凋亡有促进作用,细胞的凋亡率分别为35.4％±2.83％、40.2％±3.98％,较喹乙醇对照组(23.1％±3.59％)明显升高(P＜0.05).结论:喹乙醇能激活p38 MAPK信号通路,且p38 MAPK信号通路的激活参与抑制喹乙醇介导的HepG2细胞凋亡的过程.
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喹乙醇诱导HepG2细胞线粒体的氧化损伤
背景与目的:探讨喹乙醇(olaquindox)对人肝癌细胞(HepG2)线粒体的氧化损伤作用. 材料与方法:用0、200、400和800μg/ml喹乙醇处理HepG2细胞24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法确定喹乙醇对HepG2细胞的IC50分子探针2',7'-二氯荧光黄双乙酸盐(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFDA)和双氢溴乙啶(dihydroethidium,DHE)检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量;罗丹明123检测线粒体膜电位(△Ψm)变化;钙离子荧光探针Fluo-3AM检测胞浆游离钙离子浓度并用定量PCR方法检测线粒体DNA(mtDNA)和核DNA(nDNA)的损伤情况. 结果:随着喹乙醇浓度的增加,HepG2细胞的存活率逐渐降低(P均<0.01),呈时间-剂量-反应关系;不同浓度的喹乙醇作用细胞24 h后,随着喹乙醇浓度的增加细胞内ROS和胞浆游离钙离子浓度显著增加(P<0.05或P<0.01),△Ψm明显降低且呈剂量-反应关系;喹乙醇能引起HepG2细胞mtDNA和nDNA损伤(P均<0.01),且mtDNA损伤程度显著高于nDNA,并呈剂量-反应关系. 结论: 喹乙醇在体外实验中,可诱导HepG2细胞线粒体氧化性损伤.
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穿梭质粒pSP189/哺乳动物Vero细胞检测系统在喹乙醇诱变分子机制研究中的应用
背景与目的:将短暂复制型穿梭质粒pSP189与非洲绿猴肾细胞(Vero细胞系)组成穿梭质粒/哺乳动物细胞诱变检测系统,并将该系统应用于喹乙醇的诱变性检测.材料与方法:质粒经6.6μg·ml-1喹乙醇处理后,转染Vero细胞,从细胞中回收质粒转化E.coli MBM7070指示菌筛选突变体.结果:喹乙醇处理组的诱变频率(24×10-4)明显高于溶剂对照组(1.2×10-4);试验进一步对61个突变子中的24个突变子质粒靶基因进行序列分析,发现喹乙醇引起质粒靶基因核苷酸序列改变主要表现为点突变和连续缺失,且以引发点突变为主,占总数的70%.点突变主要集中在G:C碱基对,且包含在5'-NNTTNN-3'的序列中,其中的N位易发生突变,主要表现为G:C-T:A或G:C-A:T置换;而缺失以连续缺失为主,包含在含ANGGCCNAAA的序列中.结论:喹乙醇能诱发质粒pSP189靶基因突变.
