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一种快速筛查志贺氏菌的荧光纳米免疫层析方法的建立
本文以建立志贺氏菌荧光纳米颗粒免疫层析法为目的。首先，制成志贺氏菌单抗-荧光纳米颗粒偶联物，以双抗体夹心模式制备志贺氏菌免疫层析试纸条。利用微型手持荧光检测仪读出质控线和检测线上的荧光信号，并利用荧光强度来半定量检测志贺氏菌。结果显示：用本研究建立的荧光纳米颗粒试纸条检测30株菌，对宋内志贺氏菌和福氏志贺氏菌呈阳性结果，其余菌株的呈阴性结果，试纸条灵敏度为9.0×104CFU/mL。用志贺氏菌免疫层析试纸条和标准法检测60份样品，两种方法的总符合率为88.3%。结论：本研究成功建立了志贺氏菌的荧光纳米免疫层析检测方法，能够快速检测志贺氏菌，具有良好的特异性和灵敏性，便于开展现场快速检测。
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一种快速筛查金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析方法的建立
目的 建立一种快速筛查金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析检测方法.方法 以荧光纳米颗粒作为示踪标记物,采用双抗体夹心法检测金黄色葡萄球菌A蛋白,制备了稀土离子标记的免疫层析试纸条,在紫外激发光源下判断反应结果.对该方法的特异性、敏感性和样本检测的适用性进行了分析.结果 所制备的试纸条具有良好的特异性,与表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、单核细胞增生李斯特菌、沙门菌、志贺菌、大肠杆菌、O1/O139群霍乱弧菌、副溶血性弧菌均无交叉反应.用该试纸条检测纯菌液和未经培养的粪便、呕吐物的灵敏度为7.2× 104 CFU/ml,检测经培养的模拟污染食物样本、粪便样本的检测限低为7.2× 102 CFU/ml,反应在15 min内完成.结论 本研究成功建立了金黄色葡萄球菌的荧光纳米免疫层析检测方法,能够快速检测食品、奶制品、呕吐物、粪便中的金黄色葡萄球菌,具有良好的特异性和灵敏性,便于开展现场快速检测.
关键词： 荧光纳米颗粒 免疫层析试纸条 金黄色葡萄球菌A蛋白 -
疟疾胶体金免疫层析试纸条使用结果评价
疟疾的确诊靠实验室诊断,其中适用于基层卫生机构或野外,并能快速简便筛查,WHO推荐采用免疫层析检测法.2003年我们在大理州首次运用胶体金免疫层析法(下称胶金法)开展了疟疾检测,并与镜检法作对照,现将结果报告如下.
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免疫层析试纸条检测感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体的研究
目的 建立一种肉类旋毛虫感染的快速免疫学检测方法.方法 以胶体金标SPA和旋毛虫肌幼虫ES抗原制备免疫层析试纸条,对不同剂量旋毛虫幼虫感染小鼠后不同时间的血清及肉汁抗体进行检测,并与ELISA、镜检法及消化法的检测结果进行比较.结果 用100、300、500条旋毛虫幼虫感染小鼠后6周,3组小鼠的血清及肉汁抗体阳性率均达100%;试纸条法对血清与肉汁的抗体检出率差异无统计学意义(χ2=0.22, P＞0.05).试纸条法和ELISA检测100条幼虫感染小鼠肉汁的阳性率分别为91.3%和100%(χ2=2.09, P＞0.05),检测300、500条幼虫感染小鼠肉汁的阳性率均为100%;试纸条法和镜检法对3组小鼠感染后5～7周的肉汁和膈肌检测的阳性率均为98.6%.消化法检查每克肌肉虫荷＜33条幼虫的6份标本,试纸条5份阳性,每克肌肉中含有6条幼虫时可被试纸条法检出.感染旋毛虫小鼠肌肉4 ℃保存1～7 d及-20 ℃保存1～7个月的肉汁抗体阳性率均为100%.结论 免疫层析试纸条可用于新鲜肉、冷藏肉及冷冻肉中抗旋毛虫抗体的检测.
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免疫层析试纸条检测实验感染猪肉汁抗旋毛虫抗体的研究
目的 观察免疫层析试纸条对实验感染猪肉汁中抗旋毛虫抗体的检测效果.方法 以胶体金标SPA和旋毛虫肌幼虫ES抗原制备了免疫层析试纸条.将30头家猪随机分为2组:实验感染组20头,每头经口感染5000条旋毛虫幼虫,正常对照组10头.感染后10w用试纸条进行血清及肉汁抗体检测,并与镜检法进行比较.结果 应用试纸条检测旋毛虫幼虫感染的家猪血清及肉汁的抗体阳性率均为100%(20/20),肌肉压片镜检法的幼虫检出率亦为100%(20/20),每克腿肌虫荷为111～400条幼虫(平均为231.36条).应用试纸条和镜检法对正常对照组肉汁及膈肌时均为阴性.感染猪肌肉-20℃保存8个月的肉汁抗体阳性率亦为100%(20/20).结论 试纸条检测肉汁中旋毛虫抗体可用于新鲜肉及冷冻猪肉中旋毛虫检疫的初筛.
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免疫层析试纸条检测轻度感染小鼠肉汁抗旋毛虫抗体的研究
目的 观察免疫层析试纸条对轻度感染小鼠肉汁中抗旋毛虫抗体的检测效果.方法 以胶体金标SPA和旋毛虫肌幼虫ES抗原制备免疫层析试纸条.将70只雄性昆明小鼠随机分为7组(每组10只),每组分别经口感染30、25、20、15、10、5、3条旋毛虫幼虫,感染后6周用试纸条进行血清及肉汁抗体检测,并与ELISA、镜检法及消化法的检测结果 进行比较.结果 30、25、20、15、10条旋毛虫幼虫感染的小鼠,试纸条与ELISA的血清及肉汁抗体阳性率均为100(10/10),镜检法与消化法的幼虫检出率均为100%(10/10).5条旋毛虫感染的10只小鼠,镜检法和消化法的幼虫检出率分别为70%(7/10)和100%(10/10),消化法检查时10只小鼠的每克肌肉虫荷为0.88～3.14条幼虫(平均为1.58条),试纸条与ELISA检测时的血清及肉汁抗体阳性率均为100%(10/10).3条旋毛虫感染的10只小鼠,4种方法 检测时均为阴性.结果 表明,试纸条检验肉类中旋毛虫的敏感性与ELISA和消化法相同,且明显高于镜检法(P＜0.05).低剂量旋毛虫感染小鼠后6周的肉汁抗体水平与感染剂量呈正相关(P＜0.05),肉汁与血清抗体水平均具有相关性(P＜0.05).结论 每克小鼠肌肉仅含0.88条旋毛虫幼虫时也可被试纸条检出,试纸条可用于轻度感染肉类中旋毛虫检疫的初筛.
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免疫层析试纸条诊断旋毛虫病的研究
目的 建立一种能诊断人体旋毛虫病及动物旋毛虫感染的快速血清学方法.方法以胶体金标SPA和旋毛虫肌幼虫ES抗原制备免疫层析试纸条(immunochromatographic strip),对旋毛虫病及其它寄生虫病患者血清、旋毛虫及其它寄生虫感染的动物血清进行检测.结果试纸条检测旋毛虫病患者与旋毛虫感染的小鼠、大鼠、兔、猪血清的阳性率分别为100%(20/20)、97.87%(92/94)、100%(5/5)、100%(5/5)及100%(25/25),15min内肉眼可观察结果;其它寄生虫病(并殖吸虫病、血吸虫病、华支睾吸虫病、囊虫病及包虫病等)患者及正常人血清、其它寄生虫感染动物及正常动物血清均为阴性.试纸条和ELISA对100条幼虫感染小鼠血清检测的阳性率分别为91.3%(21/23)和95.7%(22/23)(χ2=0.36,P＞0.05),两种方法对200～500条幼虫感染小鼠血清检测的阳性率均为100%(71/71).试纸条对乡土旋毛虫、布氏旋毛虫、伪旋毛虫及纳氏旋毛虫感染小鼠血清检测的阳性率亦均为100%.试纸条在4℃可保存13个月,检测结果在室温可保存3个月.结论该试纸条可用于人体旋毛虫病和动物旋毛虫感染的快速血清学诊断,也可用于其它种旋毛虫感染的血清流行病学调查.
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抗人血白蛋白单克隆抗体的制备及其免疫金标试纸条的研制
目的:制备抗人血白蛋白单克隆抗体并对其抗体特性进行鉴定,将其标记胶体金,研制一种快速准确检测尿中人血白蛋白试纸条的方法.方法:用99.8%纯度的人血白蛋白免疫Balb/C小鼠,采用杂交瘤细胞技术制备单克隆抗体,并对其单克隆抗体的相关性质进行鉴定,制备胶体金,并标记所制备的单克隆抗体,按竞争法制备试纸条.结果:得到两株能够稳定分泌抗体,效价高的杂交瘤细胞系4C2,2F10.结论:建立的免疫层析试纸条,简便、可靠,有望通过进一步改进应用于临床检验.
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喹乙醇残留速测金标试纸条的研制
目的 应用胶体金免疫层析技术,研制出一种准确、快速、简便检测喹乙醇残留的试纸条.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记喹乙醇单克隆抗体,将金标抗体喷涂于玻璃纤维上,喹乙醇偶联抗原和羊抗鼠IgG分别喷涂于硝酸纤维素膜上作检测线和质控线,经过竞争反应后目测结果.结果 制备的试纸条特异性好,与常用的几种抗生素无交叉反应,试纸条对鸡肝脏、鱼肉和饲料样品中喹乙醇的低检测量分别为1.5 μg/g、1.5 μg/g和2.0 μg/g.结论 该法简单方便,非常适合现场快速检测喹乙醇.
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胶体金免疫层析试纸快速灵敏检测沙门菌
目的 建立快速、灵敏检测沙门菌的免疫层析试纸方法.方法 根据沙门菌的16S DNA序列设计引物进行PCR扩增,并根据PCR产物设计2种特异性探针(探针B和探针F),分别在其5'端和3'端标记Biotin和FAM.PCR产物与探针杂交后应用于免疫层析试纸条.当检测有沙门菌时试纸条会出现2条红线,当没有沙门菌会出现1条红线.对探针的浓度进行优化后,检测沙门菌以及其他7种细菌分析该方法的特异性,并检测不同浓度(107 cfu/ml～101 cfu/ml)的沙门菌,分析其灵敏度.结果 探针的优浓度为1 μmol/L,检测除沙门菌外的其他7种细菌,结果均显示阴性,检测沙门菌的低浓度为102 cfu/ml.结论 该实验方法的灵敏度高、特异性好,适用于检测沙门菌,有良好的应用性.
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O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒试纸条的研制
目的 本研究旨在建立一种准确、快速、简便的O139群霍乱弧菌检测方法. 方法 以荧光纳米颗粒为标记物,采用双抗体夹心法模式制备O139群霍乱弧菌免疫层析检测试纸条.在紫外灯下观察试纸条上质控线和检测线上的荧光信号强度作为结果判定依据. 结果 用所制备的O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条对9属20种105株菌进行检测,所有20株O139群霍乱弧菌检测结果呈阳性,其余85株非O139群霍乱弧菌均呈阴性反应;用该试纸条检测人工污染的海鱼样品,灵敏性为3.5×104CFU/mL.用自制试纸条和标准法同时检测77份样品(均为水产品),两种方法的总符合率为85.7%.结论 O139群霍乱弧菌荧光纳米颗粒检测试纸条的研制成功为O139群霍乱弧菌的快速检测提供了一个极好的检测方法,便于野外检测的开展.具有广阔的应用前景.
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基于上转换纳米荧光快速定量检测PCT技术研究
目的 研制基于上转换纳米荧光快速定量检测降钙素原(PC T)的免疫层析检测技术.方法 采用溶剂热法制备上转换纳米荧光颗粒(UCNP),为稀土镱和铒掺杂于四氟钇钠的混合物(NaYF4:Yb3+,Er3+),利用反相微乳法对UCNP进行改性和二氧化硅(SiO2)包裹,利用干式免疫层析技术建立PCT检测技术.结果 利用反向微乳法成功制备了分散性好的水溶性UCNP,基于UCNP的干式免疫层析技术检测降钙素原的低检测限为0.02 ng/mL,线性范围为0.05～44.00 ng/mL,批内精密度CV<10％,批间精密度CV<13％.结论 基于UCNP的免疫层析检测技术是快速、灵敏定量检测血清PCT的有效方法.
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胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒
目的 建立有效、简便的胶体金免疫层析试纸条快速检测乙型流感病毒感染的方法.方法 通过对乙型流感病毒核蛋白单克隆抗体进行胶体金标记,成功研制了乙型流感病毒免疫层析检测试纸条.结果 该试纸条操作简单,肉眼于10～15 min内判定结果,对乙型流感病毒具有高度特异性,与甲型H1N1、H3N2亚型流感病毒等其他重要呼吸道病毒无交叉反应.试纸条在室温保存12个月、2～8℃保存18个月,其特异性和灵敏度无明显变化.对从内蒙自治区医院收集的流感样症状病人的702份鼻咽部分泌物进行检测,与美国Quidel公司同类产品的符合率为95％.结论 建立的乙型流感病毒免疫层析检测方法具有简便、快速、特异、敏感和稳定等特点,对乙型流感病毒感染疾病的临床检测与早期诊断具有重要意义.
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检测鼠疫抗体胶体金免疫层析试纸条的研制
目的建立快速、简易的检测鼠疫F1抗体的胶体金免疫层析法(GICA).方法 (1)采用胶体金颗粒标记纯化F1抗原,并将标记物喷于玻璃纤维;同时将纯化F1抗原喷线固定于硝酸纤维素膜上,用于F1抗体的捕捉;按常规组装成检测鼠疫抗体免疫层析试纸条.(2)采用该试纸条与血凝法对同一份兔抗F1抗体进行检测,以评价该试纸条的敏感性.(3)采用该试纸条对44株非鼠疫菌的免疫鼠血清进行检测,以评价该试纸条的特异性.(4)采用该试纸条、血凝法及ELISA对607份血清标本进行检测,以评价该试纸条对现场材料的检测效果.结果 (1)该试纸条可在15 min之内完成检测;(2)在敏感性上,该试纸条对同一份免疫兔血清的检测较血凝法高一个滴度;(3)对被试的44株所选菌株的免疫鼠血清的检测均为阴性;(4)在对607份血清标本的检测中,免疫层析试纸条、血凝及ELISA三种方法的符合率中度,而免疫层析试纸条的敏感性分别比血凝与ELISA高111%和90%.结论以纯化的鼠疫F1抗原为基础建立的GICA检测鼠疫F1抗体的方法特异性强、灵敏度高、简便快速,无需特殊仪器设备,有较大的推广应用价值.
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上转换发光免疫层析试纸条快速定量检测牛奶中黄曲霉毒素M1
建立定量检测黄曲霉毒素M1(AFM1)的上转换发光换免疫层析技术.以上转换发光材料(UCP)为新型标记物,建立上转换发光免疫层析试纸条快速定量检测AFM1的方法.
