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精原细胞分离纯化方法的建立及其免疫化学鉴定
我们通过程序性复合酶消化结合差速贴壁及非连续性Percoll密度梯度离心的方法纯化精原细胞,探讨精原细胞的分离纯化方法,并对纯化后细胞进行免疫化学鉴定.
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酶消化法急性分离小鼠颈总动脉平滑肌细胞实验研究
目的:探讨快速分离小鼠颈总动脉血管平滑肌细胞(CCAVSMCs)的实验方法.方法:分离小鼠颈总动脉,用酶液Ⅰ(木瓜蛋白酶等)、酶液Ⅱ(Ⅱ型胶原酶)消化获取平滑肌细胞,并确定两步反应中酶各自的佳消化时间,以台盼蓝染色测定细胞活性,采用免疫荧光法进行细胞鉴定.结果:在倒置显微镜下,观察并计数分离的平滑肌细胞数,酶液Ⅰ、酶液Ⅱ的消化时间分别为25min、45min时平滑肌细胞数量较多,达(50±1.3)个/低倍视野,与其他各时间点比较差异具有统计学意义(P<0.05),98%的台盼蓝染色细胞为活细胞,免疫荧光法鉴定为平滑肌细胞.结论:该方法操作简单、成本低,可在较短时间内获取数量可观、形态佳、高纯度的颈总动脉平滑肌细胞.
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消化性溃疡的临床诊治
消化性溃疡是指胃肠道黏膜被胃酸和胃蛋白酶消化而发生的溃疡,主要指发生于胃和十二指肠球部的溃疡,分别称之为胃溃疡和十二指肠溃疡,是一种临床常见多发病[1].其主要是胃酸侵袭作用增强、胃黏膜防御机能减退和幽门螺杆菌协同损害作用的结果.目前,消化性溃疡具体的诊疗方面一般是进行对症治疗,缓解症状,后达到治愈的效果.本文收集总结2010年1月至2012年12月期间153例在我院进行消化性溃疡治疗的患者诊断、治疗的相关情况,现报告如下.
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改良的酶消化后植块法体外培养雪旺细胞
目的 观察改良的酶(浓度为2g/L的胶原酶)消化后植块法体外培养雪旺细胞(SCs)效果,探讨高效获取高纯度、高活性SCs的培养纯化方法.方法 取新生SD大鼠坐骨神经,剥离神经外膜,剪块,分别采用单酶消化后植块法与双酶消化法进行培养.以活细胞计数和S-100单抗标记相结合判断SCs增殖和纯化程度,比较2种方法的优劣.结果 改良的单酶消化后植块法可获取3.5x106个SCs,成活率为96%,纯度达94%以上:双酶消化法约获取3.0×106个SCs,成活率为92%,纯度达90%.结论 采用改良的酶消化后植块法培养SCs,可较快得到数量多、纯度高的SCs,符合实验要求,值得推广应用.
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FISH检测石蜡包埋组织切片的理想消化时间
目的 探讨石蜡包埋组织切片进行荧光原位杂交(FISH)检测前合适的酶消化时间.方法 62例乳腺癌石蜡包埋组织切片,将其中的21张石蜡包埋的组织切片进行间隔5 min的梯度时间酶消化,然后光镜下及加入DAPI后荧光显微镜观察.随后对剩余的41张切片继续杂交过程,对杂交信号进行观察.结果 15~20 min是一个比较理想的消化时间,背景干净,杂交信号理想,能够很好地进行判读.对剩余的41张石蜡包埋切片进行15~20 min的消化后均获得了满意的杂交信号.结论 15~20 min是石蜡包埋切片理想的消化时间.不同组织标本及实验室间略有差异.故建议不同实验室甚至不同批次的标本在进行FISH技术杂交检测之前,应首先对酶消化时间进行调整.
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清胰汤治疗急性胆源性胰腺炎的疗效观察及护理体会
急性胰腺炎(acute pancreatitis ,AP)是以急性上腹痛、腹胀,伴恶心、呕吐、发热及血、尿淀粉酶升高为主要特点的临床常见急腹症,是一种急性炎性病变,常侵犯胰腺周围组织及其远端器官[1],它是由多种病因导致胰酶激活所致胰腺及其周围组织被自身分泌的消化酶消化的化学性炎症。其中多数为轻型,病死率不超过2%,但有近20%~25%的患者发展为重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis ,SAP),可能会导致多器官功能衰竭、败血症甚至死亡[2]。
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福尔马林失活的远缘链球菌经扁桃免疫兔后的免疫反应
本实验通过研究经扁桃免疫和肌内注射S.sob-rinus AHT-K后产生的抗体与S.sobrinus抗原结合,比较两种途径抗原成分的异同.材料和方法人口腔分离株S.sobrinus AHT-K(血清型g)福尔马林灭活后制备菌悬液(1010个细胞/ml),腭扁桃体和肌肉注射菌悬液300ml,每组9只兔.另9只兔腭扁桃注射PBS作阴性对照组,每周注射1次,共6周.初次注射后,每周收集唾液1次,通过凝集试验测定抗体效价,使用S.sobrinus超声片段通过ELISA测定免疫球蛋白浓度和抗体特异性,Western杂交分析后,经加热和酶消化处理细菌超声片段,第6周作为抗原注射于兔体内,再作分析.结果和讨论S.sobrinus免疫兔后,两种途径抗S.sobrinus抗体水平均显著升高,其中唾液IgA和血清IgG更为显著.ELISA表明扁桃免疫后第6周,唾液和血清抗体选择性与S.sobrinus AHT-K(血清型g)和血清相关链球菌(血清型a,d和h)反应,肌肉注射第6周,除上述反应外,血清抗体还可与不相关链球菌(血清型b,c,e和f)反应.凝集反应与此结果一致.抗原经加热和蛋白酶消化后,扁桃免疫产生的抗体反应性并无太大变化,而同样处理的抗原肌肉注射产生的抗体反应性下降70%,鼠李糖、半乳糖或葡萄糖可抑制该扁桃途径反应,并且抗原处理后免疫反应降低,提示与扁桃免疫产生的抗体反应的抗原含糖,这些糖抗原可与S.sobrinus特异性链球菌发生特异性反应(S.sobrinus特异性糖),还可与血清型相关的链球菌产生选择性反应(血清型选择性糖).作者认为这些能与经扁桃免疫途径产生的抗体反应的糖抗原可以有效消除S.sobrinus,减少S.sobrinus诱发的龋坏发生,并且有希望与变链S.mutans抗原结合,共同减少诱发龋坏的所有细菌.[陈舟摘 刘天佳校]
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酶联合消化法培养小鼠主动脉平滑肌原代细胞
目的 建立一种适用于体外有效分离培养小鼠主动脉血管平滑肌细胞的技术方法.方法 分离主动脉,用优化的酶联合消化法获取主动脉平滑肌细胞,用形态学法、免疫细胞化学法鉴定.结果 该方法所分离的主动脉平滑肌细胞生长旺盛,细胞活性好,7~9d后细胞总量可达到5×105个/瓶,细胞纯度可达85%以上,细胞呈长梭形、放射状、束状生长,平行排列呈峰谷状,免疫荧光显示胞浆内α-SMA蛋白表达阳性.结论 该酶联合消化法可在体外短时间内获取数量可观、高纯度的主动脉平滑肌细胞.
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急性胰腺炎腹膜后间隙扩散的弥散加权像研究
急性胰腺炎(Acute Pancreatitis ,AP)为腹部外科常见病,是由多种原因引起胰酶消化胰腺及周围组织所致的急性炎症,由于胰腺位于腹膜后肾旁前间隙内,胰酶可破坏肾筋膜累及肾周间隙甚至肾旁后间隙,有研究[1]证明胰腺炎的严重程度与胰腺炎腹膜后间隙扩散范围成正相关,本文旨在通过研究胰腺炎胰腺的DWI表现及 ADC值与胰腺炎腹膜后间隙扩散范围的关系,了解胰腺炎的弥散加权像(Diffusion Weighted Imaging ,DWI)表现及表现弥散系数(apparent diffusion coneffi-cient ,ADC )值与急性胰腺炎的严重程度之间有无统计学意义。
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SMMC-7721肝癌细胞裸鼠种植瘤的血管内皮细胞生长因子表达
实体瘤生长至肿瘤直径大于1~2*!mm时自身能分泌多种促血管生长因子[1],其中主要的是血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),人肿瘤细胞和某些病理情况下的人组织细胞产生和分泌4种VEGF蛋白多糖分子单体,分别是VEGF121、VEGF165、VEGF189、VEGF206,它们的同源二聚体分子能特异地与肿瘤周围血管内皮细胞上的VEGFR结合[2,3],刺激内皮细胞的有丝分裂,并通过细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的相应变化,从而建立肿瘤的血管网络。本实验的目的是验证SMMC-7721细胞系是否具有分泌VEGF的生物学特性,为下一步用抗VEGF抗体抑制人肝癌裸鼠皮下种植瘤生长的实验研究,提供可供应用的肝癌细胞系。1 材料和方法1.1 动物和材料雄性的BALB/C nu/nu裸小鼠3只(购自上海市肿瘤研究所),体重(25±2)g。冻存的SMMC-7721肝癌细胞株,RPMI-1640细胞培养液(GibcoBRL),0.25%胰蛋白酶消化液(GibcoBRL),单克隆抗VEGF165抗体(mouse anti-human,IgG2b,clone 26503.11,Sigma),HIGH-SABC试剂盒及DAB显色试剂盒(佰士德公司,武汉)。1.2 细胞培养、肿瘤接种、细胞铺片的制备1.2.1 复苏冻存的SMMC-7721细胞株,用RPMI-1640细胞培养液,25*!mL细胞培养瓶传代培养3~4代以后,再用250*!mL细胞培养瓶扩传培养,待细胞生长至对数生长期,胰酶消化,用细胞培养液制成细胞悬液,调整细胞密度至1×107/mL,每个裸鼠背部取一点皮下种植细胞悬液0.5*!mL。种植1月后杀死动物取瘤,用10%福尔马林固定,石蜡包埋。1.2.2 将清洁的、高压消毒过的盖玻片放在培养皿中,然后向培养皿中滴加RPMI-1640培养液制成的SMMC-7721细胞悬液,置5%的CO2孵箱中,37℃培养,培养至在显微镜下确认盖玻片上的培养细胞已处于对数生长期,吸除细胞培养液,用PBS洗涤玻片2遍,再用95%的酒精固定玻片上的细胞15*!min,室温放置晾干后,置-30*!℃冰箱中保存备用。
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破伤风抗毒素过敏反应的护理
注射破伤风抗毒素(TAT)是临床预防外伤后感染破伤风的重要手段,临床应用非常广泛.破伤风抗毒素(TAT)是一种经胃酶消化后的马破伤风免疫球蛋白.含有特异性抗体,具有中和破伤风毒素的作用,对人体是一种异体蛋白,具有抗原性,注射后可引起过敏反应[1].但临床TAT皮试出现阳性反应后多数通过脱敏注射可以解决,也有脱敏注射过程中出现严重的过敏反应,现就我科收治的一名TAT过敏反应护理如下.
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消化性溃疡的护理体会
消化性溃疡主要是指发生在胃和十二指肠球部的慢性溃疡,也可发生在食管下段、胃空肠吻合口周围.由于溃疡的形成与胃酸及胃蛋白酶消化作用有关,故称为消化性溃疡.
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急性胰腺炎的护理体会
急性胰腺炎是由于胰腺酶消化胰腺本身所引起的急性炎症,是消化系统常见急症之一.两院的内、外科自1995年~1997年收治急性胰腺炎患者22例,治愈好转21例,死亡1例,其中手术治疗3例.现将护理体会介绍如下.
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急性出血坏死性胰腺炎法医病理案例分析
急性出血性坏死性胰腺炎(acute hemorrhagic necrotic pancreatitis,AHNP)是胰酶消化胰腺及周围组织所引起的急性炎症,主要表现为胰腺呈炎性水肿、出血及坏死,故又称急性出血性胰腺坏死(acute hemorrhagic necrosis of pancreas).国外统计发病率每年在4.8~24/10万,由于急性出血性坏死性胰腺炎突然起病,病情危重,病死率高.在实际医疗诊治工作中容易引起医疗纠纷,在医疗事故认定工作中,对患病死亡者,经过尸体解剖,查明死亡原因,做出法医病理鉴定意见,对解决医疗纠纷.缓解矛盾起着十分重要的作用.
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胆管上皮细胞的异质性研究进展
随着分子生物学及免疫细胞化学的发展,通过免疫标记酶消化显微分离技术对肝内独立胆管单位的研究,从蛋白质、酶、受体等基因表达水平对胆管上皮细胞异质性有了较深入的认识,并从发育、结构、功能等方面揭示了胆管上皮细胞的异质性.
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胰腺炎非手术治疗的护理
急性胰腺炎是胰酶消化胰腺及其周围组织所引起的急性炎症,主要表现为胰腺呈水肿、出血及坏死.发病原因主要是胆道系统疾病、酗酒和暴饮暴食、手术与损伤、感染、高脂血症及高钙血症等引起胰腺炎.对于急性水肿性胰腺炎一般采用非手术治疗,而对于急性出血坏死性胰腺炎则在非手术治疗的同时,严密观察病情,对合并坏死感染者,则需手术治疗.2010年1月-2015年12月期间,本科室收治了急性胰腺炎患者40例,采取非手术治疗法,治愈率达91%,疗效较好,现将护理体会报告如下.
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关注小儿春天多发疾病——消化性溃疡
小儿消化性溃疡的病因健康的胃主要通过黏膜分泌的粘液保护层来防止胃酸和胃蛋白酶消化自身,加上胃黏膜表面细胞再生速度快,表层细胞受损后能迅速由深层细胞增生替代,从而保证了黏膜的完整.有许多因素能扰乱这种精细的平衡,导致溃疡病的形成.
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免疫组化实验中的抗原修复的探讨
目的:讨论免疫组化实验中的抗原修复方法.方法:对ER、PR进行微波和高压抗原修复实验方法对照实验.结果:高压发的实验重现性与染色强度均优于微波法.结论:高压法>水煮法>微波法.