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抗原特异性调节性T细胞的扩增方法及应用前景
调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)是一种新型的免疫抑制性调节细胞,在维持正常机体免疫耐受和免疫稳态中发挥重要作用,与自身免疫性疾病、变态反应性疾病、器官移植耐受、母胎免疫耐受及肿瘤免疫等密切相关.抗原特异性Treg可针对特异性的抗原发挥作用,其作用优于多克隆性Treg,但因体内含量较少,且体外扩增困难,使其应用受到极大限制.因此.如何高效诱导、扩增抗原特异性Treg以用于特异性免疫治疗已成为重要研究课题.本文就近年来抗原特异性Treg的扩增方法及应用进展作一综述.
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主要组织相容性复合体(MHC)多聚体技术的研究现状及应用
淋巴细胞是一群极为复杂的不均一细胞,它包括许多形态相似而表面标志和功能各不相同的细胞群与亚群.选择性地分离出均质性的特殊淋巴细胞群及亚群,对深入研究免疫细胞的结构、分化过程、生物学特性与功能,以及研究某些疾病的发病机制及诊断、治疗等具有重要的理论与临床意义.目前国内外大都根据细胞的表面标志、理化性状及功能的不同,对淋巴细胞进行选择性分离.尤其抗原特异性T细胞在控制感染和保护性免疫应答以及抗肿瘤效应和自体免疫综合征等疾病中都具有重要的作用.过去T细胞克隆主要是通过大批培养获得的,从而导致一些T细胞的各组分存在一定的偏差,使研究不准确.而MHC多聚体是携带具有同类抗原肽结合位点的分子,所以能够提供一种清楚观察T细胞群,识别特异性抗原位点的有效方法[1].该技术可以使我们了解T细胞应答在体内是如何调节的,了解保护性和长期免疫是如何建立的.
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慢性乙型肝炎患者树突状细胞特点及其免疫治疗
树突状细胞(DC)是诱导和维持抗原特异性免疫应答非常重要的抗原提呈细胞(APC),研究表明慢性乙型肝炎(CHB)患者体内DC功能下降,这可能是导致CHB的重要原因之一.DC增强免疫疗法的基本原理是提高CHB患者体内DC功能,诱导强烈的HBV特异性免疫反应清除病毒.
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树突状细胞疫苗及其在消化道疾病中的作用
树突状细胞疫苗与消化道肿瘤消化道肿瘤是常见的恶性肿瘤,目前常用的治疗方法有手术切除、化疗和放疗等.对于局限性早期肿瘤,手术和(或)化、放疗疗效甚佳,晚期肿瘤、多发性肿瘤或转移性肿瘤的治疗效果则较差.生物免疫治疗是当前肿瘤治疗的一个重要组成部分,其不仅可为切除肿瘤作术前准备,还可预防术后肿瘤转移、复发.有效的生物免疫制剂必须具备以下4个条件:①在体内能有效激活细胞免疫,尤其是抗原特异性T细胞免疫反应;②在体内能产生高强度的免疫反应;③能进入肿瘤部位起杀灭肿瘤细胞的作用;④杀灭肿瘤细胞的效应能维持足够长的时间.但以往的一些生物免疫疗法不能完全解决上述这些问题,使肿瘤的生物免疫治疗一度停滞不前.1973年Steinman和Inaba发现并确立了树突状细胞(dendritic cell,DC)作为抗原呈递细胞的重要地位.随着相关研究的深入,人们对DC有了全面的认识,DC的大量体外扩增技术亦日见成熟,使DC疫苗治疗肿瘤成为可能.
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标记免疫分析对恶性肿瘤诊断的临床表达及其进展
近年来在免疫治疗领域中提出了有关细胞抗原的理论,认为肿瘤细胞携带具有抗原特异性的细胞表面分子,或这些抗原分子并非肿瘤细胞特有,它们可能为正常的细胞表面分子发生了某些变异,在肿瘤细胞中具有较高的含量及细胞分布的差异.为此,国外LIA(Labelling Immunoassay, LIA or Radioimmunoassay and alternative immunoassays)主要集中于肿瘤诊断.而且,血液、胸腹水和尿液的肿瘤标志物的临床应用分为三类:第一类证明有价值的为AFP、HCG、LDH、CEA、TSGF、PSA(fpsA)和CA125,它们具有肿瘤筛选、诊断、预后、监护治疗反应和检出复发的作用;第二类或许有价值的为CA153、CA199、NSE;第三类可能有价值的为MSA(乳房血清抗原),TAG(肿瘤相关糖蛋白)、MCA(类粘蛋白癌相关抗原)和CA50.现将其临床表达及其进展综述如下.
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严重急性呼吸综合征患者肺组织包被抗原的特异性研究
目的:探讨严重急性呼吸综合征(SARS)肺组织包被抗原在不同个体以及猪、羊、大鼠中的种属特异性.方法:匀浆SARS患者尸检肺组织、非SARS患者肺组织以及猪、羊、大鼠肺组织后分别包被,利用酶联免疫吸附试验(ELISA),同时检测SARS患者及正常献血员血清中的IgG.结果:SARS患者及正常献血员血清用SARS尸检患者与非SARS患者肺组织包被抗原检测,两种组织包被抗原检测的阳性率间无统计学差异;而用非SARS患者肺组织包被抗原检测的阳性率和用羊、猪、大鼠肺组织包被抗原检测的阳性率均具有统计学差异.结论:SARS患者肺组织及非SARS患者肺组织中存在相同的抗原;其他动物中可能也存在该抗原,但可能因为其他抗原干扰而不适于用该方法检测.
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淋巴细胞协同刺激分子与肾脏病
抗原特异性T细胞活化需要两个不同的信号.除第一信号,即来自抗原肽-MHC(major histocom-paibility complex,主要组织相容性复合体)分子组成的复合物与TCR(T cell receptor,T细胞受体)的相互作用;尚需协同刺激的第二信号,即来自抗原递呈细胞(antigen presenting cells,APC)表面表达的协同刺激分子.已证明协同刺激信号可促进T细胞生长、分化和细胞因子产生,以及为防止T细胞发生凋亡而提供生存信号.缺乏这些协同信号将可导致淋巴细胞失活、无能或无反应性,甚至凋亡.由此提示通过控制协同刺激信号可以成为增强或终止抗原依赖T细胞活化及免疫反应的一个重要手段[1].有关协同刺激分子研究已取得长足进展,与肾脏疾病关系也已引起人们重视.本文就协同刺激分子及其与肾脏疾病的研究进展,作一综述.
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免疫佐剂的研究进展
目前正在开发的新型疫苗有合成肽疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、转基因植物口服疫苗等,这些新型疫苗具有良好的抗原特异性和低毒性.但由于其抗原分子小、纯化程度高,疫苗的免疫原性较差.因此需要安全有效的佐剂来增强疫苗的效力.近年来佐剂的发展迅猛,多种新型佐剂层出不穷,人们对佐剂的作用机理亦有更深入的认识.本文对近年来佐剂的研究进展作一综述.
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结肠癌黑色素瘤抗原基因-1启动子去甲基化状态的研究
编码黑色素瘤相关抗原的黑色素瘤抗原基因-1(MAGE-1)作为沉默肿瘤相关基因,在正常细胞不表达,但具有在肿瘤细胞中转录并翻译出功能性产物而促进肿瘤演进的特点.该肿瘤抗原可被肿瘤患者T细胞识别,而成为一种十分有效的免疫系统攻击目标,诱导机体的特异性细胞免疫和体液免疫反应,阻止肿瘤的生长扩散和复发.结肠癌作为常见的消化道恶性肿瘤,其治疗是肿瘤免疫学治疗研究的热点.肿瘤细胞的抗原性和诱导机体产生针对肿瘤抗原特异性免疫应答的能力是肿瘤免疫治疗的基础.我们取结肠癌组织标本36例及结肠良性息肉组织30例作为对照,采用甲基化敏感性内切酶酶切及 PCR技术,探讨结肠癌组织中 MAGE-1基因启动子 B'B区去甲基化状态及其与病理分级和临床分期的关系.以确定结肠癌组织标本中MAGE-1基因的去甲基化状态以及对MAGE-1基因表达的影响,为进一步开展结肠癌的免疫治疗提供实验基础和理论依据.
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重症肌无力发病相关基因多态性的研究进展
重症肌无力(MG)是一种神经肌肉接头传递功能障碍的自身免疫性疾病,其发病免疫机制尚未完全阐明,神经肌肉接头处其他抗体、抗原特异性T细胞、细胞因子、调节性T细胞等多种因素都与MG的发病机制有关,其中遗传因素在MG的发病中具有十分重要的作用.基因芯片技术可用于对疾病的相关基因进行筛选,并对疾病的分类、预后、治疗效果提供有用的信息.MG的易患基因及基因多态性的复杂性,目前在研究策略上还有待于进一步探索,现就近年来MG遗传学研究的进展综述如下.
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阿托伐他汀对多发性硬化的治疗作用及机制探讨
多发性硬化(MS)是常见的中枢神经系统炎性脱髓鞘疾病(CNS),为自身免疫性疾病[1]。治疗主要用促皮质激素、皮质激素、细胞毒性药物及抗淋巴细胞球蛋白、血浆交换,以及干扰素-β(IFN-β)制剂、格拉默和盐酸米托蒽醌,均着眼于调节机体的免疫反应,但有明显的副作用。他汀类药物为胆固醇生物合成的抑制剂[2],近的研究发现可以治疗MS。本文通过应用酶联免疫吸附试验(ELISA)和抗原特异性T淋巴细胞增殖测定,探讨阿托伐他汀对MS的治疗作用及其机制。
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支气管哮喘合并血清癌胚抗原值大幅升高患者13例的临床分析
癌胚抗原(carcino-embryonic, antigen,CEA)是一类具有人类胚胎抗原特异性决定簇的酸性糖蛋白[1],在胚胎发育阶段及肿瘤组织中表达,为非特异的肿瘤标志物,被认为在肿瘤早期诊断中具有重要意义。在部分良性呼吸道病变亦可见血清CEA值升高情况,但大幅升高者并不多见。本次研究总结13例支气管哮喘合并血清CEA值大幅升高的患者的临床资料,并对患者进行两年以上的追踪随访。现报道如下。
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CD4+CD25+T细胞在感染慢性化中的作用
早在1983年,liew等从进行性利什曼原虫感染的BALB/c小鼠中克隆出一种CD4+T细胞,它们能够抑制抗原特异性T细胞的增殖和迟发性超敏反应[1].
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DC-SIGN及其在HIV-1性传播中的作用
人类免疫缺陷病毒-1(human immunodeficiency virus-1,HIV-1)的主要传播方式之一是性接触传播,从接触HIV-1到建立HIV-1感染过程的详细机制仍不十分清楚.树突状细胞(dendritic cells,DC)分布于全身皮肤和粘膜,它是一种可移动的细胞,具有迁徙特性,当病原微生物入侵皮肤粘膜后,树突状细胞能在其入侵处摄取微生物抗原并迁移到引流淋巴结,启动抗原特异性T细胞活化;近研究发现,树突状细胞还可作为HIV-1从外周粘膜组织转运到引流淋巴结的载体,并增强HIV-1的感染性[1].
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弓形虫GRA4基因真核表达重组质粒DNA免疫小鼠的研究
用pVAC-GRA4真核表达重组质粒免疫小鼠,观察其诱导的免疫应答及对弓形虫感染的保护性作用.大量制备pVAC-GRA4真核表达重组质粒,经基因枪腹部皮内注射免疫BALB/c小鼠三次,以pVAC空质粒及不经任何处理的空白组为对照.于末次免疫4周后每组各取5只作免疫指标测定(包括MTT法测定小鼠脾脏T淋巴细胞增殖活性、间接免疫荧光法测定T淋巴细胞亚群数目、双夹心ELISA法测定细胞因子IFN-γ及IL-4的含量、间接ELISA法测定IgG抗体滴度),其余的作攻毒试验后观察小鼠存活情况.脾淋巴细胞增殖各组间无显著差异(P>0.05);T细胞亚群分析,pVAC-GRA4组CD3+CD4+T细胞无明显改变(P>0.05),CD3+CD8+T细胞数明显增加(与pVAC对照组比P<0.05,与空白对照组比P<0.01),其CD3+CD4+/CD3+CD8+比值也较空白对照组明显降低(P<0.01);免疫鼠细胞因子IFN-γ及IL-4检测,pVAC-GRA4免疫组IFN-γ比对照组略高,但差异不显著(P>0.05),而IL-4的检测值各组间无明显变化(P>0.05);pVAC-GRA4组虽可诱导产生GRA4蛋白抗原特异性的IgG抗体,但抗体滴度不高;抗攻击感染结果,pVAC-GRA4免疫组小鼠的存活率明显高于两个对照组,其死亡小鼠的平均存活天数与空白对照组相比,差异显著(P<0.05).用pVAC-GRA4重组质粒DNA免疫小鼠,可诱导产生以细胞免疫为主的免疫应答及对弓形虫RH强毒株攻击感染的部分保护性作用.
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立氏立克次体外膜蛋白B基因片段的克隆与表达
采用PCR方法,从立氏立克次体基因组中扩增长为1188bp的ompB基因片段,将该基因片段与原核表达载体pQE30连接,构建重组原核表达质粒pQE30/ompB;将pQE30/ompB转入大肠杆菌细胞内,用IPTG诱导转化大肠杆菌表达目的基因.SDS-PAGE分析发现pQE30/ompB转化菌表达了一44kDa重组蛋白,该蛋白与立氏立克次体免疫兔血清在免疫印迹分析中呈阳性反应,与其它立克次体免疫血清反应呈阴性,用该重组蛋白免疫血清做间接免疫荧光,检测立氏立克次体结果为阳性,而检测贝氏柯克斯体、恙虫病立克次体和普氏立克次体的结果为阴性.本研究证明pQE30/ompB转化的大肠杆菌表达了ompB基因片段,所产生的重组蛋白具有立氏立克次体抗原特异性和良好的免疫反应性.
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卵巢癌细胞系SKOV3冻融抗原诱导CTL特异性杀瘤效应的研究
目的探讨卵巢癌冻融抗原对T淋巴细胞的增殖作用及其诱导的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)在体外杀伤卵巢癌细胞的抗原特异性细胞毒性效应.方法采用免疫磁珠分离法(magnetic activated cell sorting,MACS)分离纯化正常人外周血CD+3 T细胞,体外以SKOV3卵巢癌细胞中提取的可溶性肿瘤抗原加以刺激.溴标法检测肿瘤抗原对T细胞增殖的影响;MTT法测定肿瘤抗原诱导的CTL体外杀伤卵巢癌细胞的能力;利用绒毛膜癌细胞抗原对比观察肿瘤抗原诱导CTL杀伤肿瘤细胞的抗原特异性.结果卵巢癌细胞抗原有很强的促进T淋巴细胞增殖的作用,且存在时间依赖性,在24 h时促进作用强.SKOV3抗原诱导的CTL在体外对SKOV3细胞的杀伤率为68.38%,显著高于它对JAR绒毛膜癌细胞的杀伤率(18.31%);而JAR细胞抗原诱导的CTL对JAR和SKOV3细胞的杀伤率分别为61.02%和14.79%,有显著的抗原特异性(P=0.0001).结论卵巢癌细胞冻融抗原诱导的CTL在体外具有很强的增殖能力和抗原特异性杀伤卵巢癌细胞的作用.
关键词: 卵巢癌SKOV3细胞系 可溶性肿瘤抗原 细胞毒性T淋巴细胞 抗原特异性 -
江西地区人群HLA-B15组血清学特异性的多态性分布
HLA基因复合体是迄今所知的为复杂的人类遗传多态性系统,其中HLA-B15组有B15、B62、B63、B70、B71、B72、B75、B76和B77等9种已知的抗原特异性.HLA抗原传统的检测方法是血清学和细胞学分型,由于HLA抗原的高度同源性,致使交叉反应组内的抗原难以分辩.本文采用HLA-SSP方法对江西地区人群进行HLA基因分型,分析其中HLA-B15组抗原特异性的分布特点.
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用抗-MICA单抗调理的肿瘤细胞负载树突状细胞能有效激发肿瘤抗原特异性T细胞应答
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CD28/B7的免疫调节作用与自身免疫性疾病
淋巴细胞活化至少需要2种信号系统,第一信号为抗原特异性MHCII类分子和CD3/TCR组成的复合物,第二信号为非MHC限制的共刺激信号.淋巴细胞只有识别这两个信号,才能活化、分化和增殖,若缺乏共刺激信号,淋巴细胞则进入无反应状态,甚者发生程序化死亡[1,2].