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自摄组织学图谱在实验教学中的应用
为了提高组织学实验教学质量与效果,我们于1994年摄制了一套组织结构的光镜与电镜图片,复制若干套,按授课内容顺序装入影集成册,编上目录及页码并在照片上注有标示,放入实验室供学生预习、实习和复习时用,很受学生欢迎.我们称其为"照片式图谱".
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半薄切片中免疫金银染色与石蜡切片中免疫组化染色的比较
免疫金-银染色(Imm unogold-silver,IGS)是1983年Holgate等用免疫金染色加银显影液增强的一种染色方法,可在光镜下观察到阳性反应结果.此法一经推出就受到了广大生物、医学研究人员的认可,给科学研究带来很大的方便.它特异性强,操作简便,而且经济,特别是近十几年来,经过不断改进,应用到半薄切片中,为免疫电镜的研究提供了基础.我们将其与石蜡切片中免疫组化的染色进行了比较研究.1、材料和方法 1.1材料 20例通过光镜、免疫荧光、电镜诊断为IgA肾病的肾活检组织环氧树脂包埋块.1.2方法 1)用NaOH无水乙醇脱树脂;2)10%过碘酸浸10m in,蒸馏水冲洗;3)切片入0.05M TBS pH7.4冲洗10min;4)正常山羊血清10min;5)TGFβ(1:10)和bFGF(1:10),室温孵育20h;6) 0.05M TBS洗10min×3次,0.02M TBS pH8.2 10min;7) 金标(1:20),室温孵育1~2hr;8)0.02M TBS洗10min,0.05 M TBS再洗10min×3,蒸馏水冲洗;9)柠檬酸缓冲液浸5min;10)银显影液染 20min,蒸馏水洗;11)减薄液数秒,充分洗涤;12)二甲基-天青Ⅱ、碱性复红衬染、冲洗、晾干、封固.2、结果 2.1IGS染色:大量的银染颗粒以近曲小管上皮细胞内表达为主(图1);2.2免疫组化染色(sABC法):TGFβ和bFGF大量的表达在皮质区近曲小管和部分远曲小管上皮细胞内(图2).3、讨论半薄切片不同于一般组织切片,由于细胞间关系及细胞组织结构保存良好,进行各种光学染色时更清晰,并可观察到石蜡切片中所不能观察到的微细结构,提高了光镜的分辨水平,为超薄结构水平的研究积累大量的资料.与石蜡切片比,即可节省药品,检测的成分定位更准确,又能在此基础上进行免疫电镜检查.在半薄切片上进行IGS染色时应注意 :1)低于0.05%戊二醛固定可以更好保存抗原性;2)脱环氧树脂812的时间不能少于 1小时;3)过碘酸中放置时间取决与半薄切片的厚度;4)一、二抗稀释液中要加BAS或P EG;5)配制银染液时在暗室加硝酸银,同时染色;6)半薄切片IGS染色对切片的洗涤比其它免疫染色法要求高,在缓冲液中要加表面活性剂,用TBS冲洗后还要用蒸馏水、双蒸水多次冲洗;7)组织在减薄液中的时间应光镜下控制.总之,半薄切片IGS染色法的阳性反应物清晰,对所检测成份存在位点更明确,为进行免疫电镜的进一步观察奠定了在三级切片(石蜡切片4-6μm、半薄0.5-1.0μm、超薄60-80nm)上准确定位的基础.
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AngⅡ对ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱研究
目的:探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞株(ECV304),实验分AngⅡ处理组、NAC干预组和正常对照组.采用改良MTT法、Fenton反应和硝酸酶还原法分别观察不同浓度AngⅡ在4h、12h和24h时对ECV304细胞的增殖率和细胞产生ROS(·OH和NO)的量.应用基因芯片技术和光镜分别检测0.0625和1μmol/LAngⅡ作用12h时ECV304细胞增殖作用的相关基因表达谱和细胞形态学变化.
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异鼠李素体外抗肿瘤作用的研究
目的:观察异鼠李素对人细胞株A549、MCF-7、PC3、Caco-2、K562、AD293、Hacat等细胞增殖、分化的影响及相关基因的变化.方法:不同浓度异鼠李素处理上述细胞,光镜电镜下观察细胞形态;进行集落形成实验,3H-TdR掺人实验、生长曲线法、MTT法测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡峰及bax,bcl-2等凋亡相关基因的表达.
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Alport综合征三家系
家系1 先证者(Ⅲ4),男,28岁,因视物模糊拟诊"白内障"欲行手术入院治疗.入院后发现合并血尿、蛋白尿及贫血转入肾内科.查体:血压160/100 mmHg,慢性病容,贫血貌,心肺未见异常.辅助检查:血红蛋白84 g/L;血肌酐138.1 μmol/L(正常参考值77~106 μmol/L);尿蛋白(++),尿红细胞20~30/Hp,相差显微镜观察尿沉渣中变形红细胞>80%.24小时尿蛋白定量1.3 g.B超示左肾9.8 cm×4.2 cm×3.2 cm,右肾9.8 cm×4.2 cm×3.1 cm,双肾皮质变薄.经皮肾穿刺活检病理检查:光镜示肾小球局灶性节段性硬化,并伴肾小管萎缩.免疫荧光镜检阴性.电镜示肾小球基底膜弥漫性增厚(420~490 nm),可见基底膜纵向劈裂分层.右眼裸眼视力1 m有光感,左眼0.02,双眼角膜上皮大面积小点状缺损,晶状体后囊混浊.电测听检查双耳中度高频性神经性耳聋.结合家系调查诊断为Alport综合征.本家系4代14人中,8人发病,男5例、女3例,已有4例死于尿毒症(图1).
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Nd:YAG激光照射对根管和牙本质小管的抗菌效能
本研究旨在对Nd:YAG激光在不同的参数条件下,对血链球菌和中间普氏菌感染根管及牙本质小管的抗菌作用作一评价.材料和方法采用56颗因牙周病或正畸需要拔除的新鲜人上颌中切牙,除去牙冠及牙根的冠1/3和根1/3,剩余的根管做根管清理,然后分别以17%EDTA、2.5%NaOCl进行超声浴10 min再以PBS洗净冲洗液,120℃消毒20 min.脉冲激光用波长1064μm、光纤200 μm的美国产Master 600LE,参量设定为1.8 W组和2.4 W组(均30 pps,30 s).照射方式为环行和前后移动与根管接触式.将消毒后的4个根管用1.8 W照射,另取4个用2.4 W照射,每组2个设为光镜观察阴性对照标本,另2个做扫描电镜(SEM)观察阴性对照标本.其余48个标本接种细菌及其培养基悬液各2ml(109 cells/m1),24个接种血链球菌(NCTC7853),另24个接种中间普氏菌(NCTC93336),全部标本37℃孵育20 d.之后,每个细菌组一半用1.8 W激光照射,另一半用2.4 W激光照射.每个激光组再取2个标本做SEM,其余10个制作光镜切片,染色,在带刻度的预校准显微目镜下观察.结果和讨论光镜检查发现,1.8 W血链球菌组10个根管159张切片中,有136张(86.3%)牙本质小管无菌.其余23张在小管的不同深度发现细菌,无菌深度大达850μm,小为400 μm,平均607.6 μm.相应的2.4 W血链球菌组10个根管170张切片中,有167张(98.5%)牙本质小管无菌,其深度小为600μm,大为750μm,平均666.6 μm.两组结果差异有极显著性(P<0.001).而1.8 W和2.4 W中间普氏菌组的357张切片中全部无菌.电镜检查发现,1.8 W对照组根管壁形成再结晶,牙本质小管熔融封闭,2.4 W对照组牙本质小管破坏,管壁再结晶.1.8 W两种细菌组均无细菌,牙本质小管熔融、闭合,管壁形成再结晶区.2.4 W组除上述变化外,牙本质层还出现颗粒状、弹坑样改变. 作者指出,由于根管系统复杂的网络联系,药物器械常难以达到而无法彻底消毒,Nd:YAG激光光纤细、对牙硬组织吸收好的优点,使之成为根管消毒的理想选择.但应重视其热的副作用.[贺慧霞摘 刘鲁川校]
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喉咽部滑膜肉瘤1例报告
患者,男性,24岁。因咽部不适、异物感1+年,伴吞咽及呼吸困难1+月入院。查:喉咽部见一表面光滑之肿块,肿块带蒂,蒂位于右侧梨状窝前壁,环杓关节处,取肿块送检。病理检查:灰白色肿块一个,5cm×3cm×2cm,表面附有粘膜。肿块切面灰白,质嫩。取五块常规制片镜检。镜下:肿瘤细胞主要由上皮细胞及梭形细胞组成,呈癌肉瘤形态。上皮细胞与梭形细胞间有移行,二者均可见核分裂,5~10个/10HPF。上皮细胞有呈腺样排列趋势,并可见典型腺样结构和较多裂隙。腺样结构内衬低柱状上皮,与梭形细胞间无基底膜。网织纤维染色,上皮细胞呈腺巢状,梭形细胞间有少许网织纤维。免疫组化染色,CK:上皮细胞阳性,梭形细胞阴性;Vimentin:梭形细胞阳性,上皮细胞阴性,病理诊断:喉咽部滑膜肉瘤(双相型)。 滑膜肉瘤大多发生于四肢大关节的附近,极少发生于前腹壁,咽喉部等处[1~6]。本例位于喉咽部环杓关节处,实为罕见[2]。滑膜肉瘤是来源于滑膜上皮细胞或滑膜间质细胞的一种恶性肿瘤,具有双相分化的潜力。组织学上分为四型:单相纤维型(又称梭形细胞为主型)、双相型(双称混合型)、单相上皮型(又称上皮细胞为主型)和低分化型[7],故其光镜下表现形式多种多样,具有癌肉瘤的形态特点。故有资料认为滑膜肉瘤是真正的癌肉瘤[7]。我们认为在好发部位典型的滑膜肉瘤(有双相分化),其光镜诊断并不困难;而以梭形细胞或上皮细胞为主型滑膜肉瘤在非好发部位,诊断纤维肉瘤或其它梭形细胞恶性肿瘤时要注意排除梭形细胞为主型滑膜肉瘤。诊断腺癌或转移性腺癌时要注意排除上皮细胞为主型滑膜肉瘤。只有多取材,观察其有无双相分化及向滑膜腔隙分化的光镜特点,并借助免疫组化染色及电镜加以鉴别,以减少误诊。
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12例结外淋巴瘤病理形态学观察
结外恶性淋巴瘤并非少见,此处指的结外淋巴瘤是指原发于淋巴结外的非霍奇金淋巴瘤(NHL),约占所有NHL的10%-25%,甚至更高"[1].由于受其发生部位及组织结构的影响,可有各种形态表现,常与小细胞未分化肿瘤不易鉴别.因此,掌握其形态特点,提高光镜诊断水平,仍是活检诊断中急待解决的实际问题.
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轻微病变型肾小球肾炎发病机理研究新进展
轻微病变型肾病综合征(minimal change nephropathy,MCN)是儿童原发肾病综合征中常见的病理类型,光镜下肾小球基本正常,近曲小管上皮细胞内出现大量脂质和玻璃样小滴.电镜下的主要改变是弥漫性足细胞足突消失,胞体扁平,可见空泡和微绒毛.本病病因和发病机理不清.国内外学者从各方面对其进行了研究,现综述如下.
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小鼠膜性肾小球肾炎光镜、电镜、免疫荧光定量研究及染色体初步分析(摘要)
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脑室内中枢神经细胞瘤
中枢神经细胞瘤(central neurocytoma,CNC)是1993年WHO分类中的新类型,一般认为它是一种罕见的、好发于年轻人侧脑室和/或三脑室内的良性神经元肿瘤,预后较好,1982年首先被Hassoun等[1]报道并命名,光镜下的特点与少突胶质细胞瘤很难区别,需借助免疫组织化学和电镜超微结构检查才能确诊.
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苗药组方熏蒸疗法治疗家兔早期膝骨性关节炎
目的:观察苗药熏蒸疗法对家兔早期膝骨性关节炎(KOA)的治疗效果.方法:40只新西兰家兔随机分为A组(正常对照组)、B组(模型对照组)、C组(苗药熏蒸组)及D组(蒸馏水熏蒸组),B、C、D组均采用木瓜蛋白酶注射法制造家兔早期KOA模型,A、B两组不予任何治疗,C、D两组在造模同时分别采用苗药组方和蒸馏水进行熏蒸治疗;实验结束时取各组家兔膝关节前正中矢状位股骨内髁内侧软骨标本制片,光镜扫描、电镜观察,采用Mankin's法进行评分.结果:C组肉眼、光镜及电镜下软骨组织退变病理学改变较B、D组轻,但较A组重;Mankin's评分显示,C组较B、D组低,较A组高(P<0.01).结论:苗药熏蒸疗法可以延缓KOA关节软骨的退变,对早期KOA具有较好的治疗作用.
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胆囊肉瘤样癌伴腺鳞癌1例临床病理分析
肉瘤样癌(Sarcomatoid carcinoma)又称梭形细胞癌、化生性癌,可发生于肺、食道、膀胱、甲状腺、乳腺、肾、喉、胆囊等器官,以肺、乳腺和食道多见[1],发生于胆囊的肉瘤样癌极其罕见,目前国内外仅见少数散在病例报道[2,4].肉瘤样癌由肉瘤样成分和上皮样癌组成,其中上皮样癌成分多为腺癌,罕见鳞癌、小细胞癌等成分[4],而胆囊肉瘤样癌伴腺鳞癌目前还未见报道.本文报道1例胆囊肉瘤样癌伴腺鳞癌,通过光镜及免疫组化方法,结合文献复习,探讨其临床病理特点、诊断和鉴别诊断.
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小儿肾活检术8例护理体会
经皮肾穿刺活检自1944年AiwalI首次应用以来,在肾脏病学的发展上起了重大作用.肾活检被认为是诊断肾脏疾病有价值的检查手段之一.其对肾脏病的临床诊断及治疗具有重要的指导意义.经皮肤肾活检术是在B超定位下,用肾穿刺针经背部皮肤刺入肾脏下极取材后,经光镜、免疫荧光镜及电镜检查,作出肾脏病理诊断的方法.
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眼球结膜鲍温病误诊为翼状胬肉1例
患者男性,35岁,工人,发现左眼内侧球结膜肿物3个月,并逐渐增大,于1993年8月22日住入我院。查:左眼内侧球结膜增生、肥厚、红肿,略呈三角形,视力5.0,右眼未见异常,视力5.2,瞳孔等大等园。胸片未见异常,全身浅表淋巴结无肿大。临床拟诊左眼翼状胬肉,于1993年8月23日手术切除黄豆大肿物送病理检查。光镜下见病……
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从脾从瘀论治顽固性血尿19例
中医称血尿为溺血,肉眼尿色正常,但光镜下见红细胞,仍属溺血范畴.笔者临床体会脾虚统摄无力、久而生瘀也是顽固性镜下血尿不可忽视的重要病机,益气调中,兼以通络散瘀是临证治疗的重要方法.
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中枢神经细胞瘤MSCT误诊1例分析
中枢神经细胞瘤是起源于神经元性瘤肿,1982年Hassoun等首先发现,证实并提出的.是一种罕见良性肿瘤,迄今为止,国内外仅有42例报告[1],且病理学易误诊,在光镜下常与少支胶质细胞瘤、室管膜瘤、乳头状瘤等很难区别,我院近收治1例,经手术病理证实,现报告如下:
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慢性鼻窦炎鼻息肉内镜鼻窦术后上颌窦口黏膜恢复过程分析
目的:观察探讨慢性鼻窦炎鼻息肉内镜鼻窦术后上颌窦口粘膜的恢复过程,以便于在以后的术后恢复中做出佳临床指导。方法:随机选取我院自2013年5月至2014年5月接收的患有慢性鼻窦炎鼻息肉,并接受内镜鼻窦手术的50例患者作为研究对象。分别对他们在术后2-3周、术后8-10周、术后13-15周内的上颌窦口粘膜进行观察。结果:手术前,上颌窦口粘膜剥蚀,纤毛细胞量减少,粘膜固有层加厚。细胞表皮纤毛断裂、脱落,其覆盖面积减小。术后2-3周,术腔内可见小息肉、痂皮等,与术前相比,形态学观察没有明显改变。术后8-10周,术腔内变光滑、洁净,纤毛细胞增多,仍可见上皮剥蚀。术后13-15周,术腔光滑洁净,上皮恢复较好,纤毛发育均匀。糖精清除实验可知,术后13-15周和术后2-3周恢复情况存在显著性差异(p <0.01),研究具有统计学意义,其余各组情况无显著性差异。讨论:对于慢性鼻窦炎鼻息肉病症,可以通过内镜鼻窦术逐步治愈,并基本恢复上颌窦口粘膜形态,推荐临床使用。
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Q-开关激光对黄褐斑动物模型黑素细胞病理形态的影响
目的:探讨Q-开光1064nm Nd:YAG激光不同能量照射对黄褐斑动物模型表皮黑素细胞病理形态的影响.方法:用Q-开关1064nm Nd:YAG激光不同能量和频率照射黄褐斑动物模型背部皮肤,分别于激光照射前和照射后不同阶段取材,通过HMB45免疫组化染色法,光镜观察豚鼠表皮黑素细胞的变化.结果:第一次激光照射后即刻可见高能量两组黑素阳性细胞减少,第5次激光照射后即刻可见低能高频组黑素阳性细胞减少.与术前比较,低能量密度低频率照射组黑素细胞阳性细胞数无显著差异.5次治疗后软件分析结果显示,高能高频、高能低频和低能高频组与照射前比较黑素细胞阳性目标个数、平均数密度、平均光密度下降,但平均灰度值上升,差异有统计学意义(P<0.01).结论:高能量密度Q-开光Nd:YAG激光照射对表皮黑素细胞的影响大于低能量密度,当其超过一定阈值时能高能量高频率可导致黑素细胞的损伤和减少.从而为临床应用Q-开关1064nm Nd:YAG激光治疗色素性疾病提供了实验依据.
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辐射处理后猪软骨异种移植的实验研究
目的:为观察经辐射处理的猪软骨异种移植后的改变,采用辐射处理后的猪软骨分期移植到大白兔皮下,分期观察移植后的变化,并用新鲜猪软骨作为对照.方法:实验分三组,经γ-射线处理后4℃保存三个月的猪软骨为A组;保存一个月的为B组;新鲜猪软骨为C组.结果:γ-射线辐射处理可降低猪软骨的抗原性,以4℃保存一个月为佳保存时间.结论:猪软骨经辐射处理后可作为异种移植代用材料的佳来源.