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避免不育,你要注意哪几点?
烟酒:吸烟和酗酒对男性生殖系统的损害已逐渐被人们所认识.科学研究表明,香烟烟雾中含有的苯并芘、蒽、尼古丁等物质能影响生精细胞的生长和发育,还可直接作用于精子细胞及其精浆成分,从而影响精子的活力.同时这些物质还可以影响性激素的代谢,吸烟者的睾酮等雄激素的水平明显低于不吸烟者.长期酗酒不仅影响生精过程和降低睾酮水平,还可通过损害肝脏功能而造成高雌激素症状.动物实验证明,吸烟和饮酒对精子的损害具有叠加效应.
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小鼠精原细胞体外分化为精子细胞的研究
目的 探讨在辅以外源生殖激素混合培养的小鼠睾丸细胞中,精原细胞向精子细胞的转化.方法 采用7~8 d龄小鼠睾丸组织,以组合酶消化法制备睾丸细胞,在含重组卵泡刺激素(r-FSH)和睾酮的培养基中进行体外培养;定期观察细胞的生长和形态变化;用分子生物学和流式细胞技术对生长各阶段细胞进行分析.结果 培养5 d即可观察到形态与大小类似于圆形精子细胞,7 d后可见带有鞭毛与变形的精子细胞;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示,培养前细胞的睾丸特异蛋白激酶(TESK1)与鱼精蛋白2(Prm2)mRNA表达阴性,培养9与17 d细胞TESK1与Prm2 mRNA表达均阳性;DNA倍体分析显示,培养5 d细胞有单倍体峰出现,并随培养天数增加而增加.结论 在体外混合培养的小鼠睾丸细胞中加入外源生殖激素可以使精原细胞转化为精子细胞.
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彗星试验在检测甲氨蝶呤对小鼠精子DNA损伤中的应用
精子DNA损伤对人类生殖及其下一代健康的影响已越来越引起人们的重视,引起精子DNA损伤的因素很多,例如放射线、H2O2、化学药物等.甲氨蝶呤(Methotrexate,MTX)是一种二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase,DHFR)抑制剂,常用于肿瘤的化疗,临床上长期低剂量应用MTX可引起月经不调、闭经和精子生成下降等[1].为了探讨MTX引起的不良反应的机制,我们应用彗星试验(comet assay)检测了多次低剂量应用MTX造成的小鼠精子DNA的损伤,从而从细胞水平阐明MTX的不良反应机制.
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小RNA在精子发生中的研究进展
近20年来人们在动物、植物及病毒等生物中发现了一系列小分子非编码RNA,包括miRNA[1]、piRNA[2]和siRNA[3].与其相关的Argonaut家族蛋白分为2个亚家族:Ago亚家族和Piwi亚家族.精子发生是指由精原细胞经初级精母细胞、次级精母细胞、精细胞至成熟精子形成的过程.整个过程分为3个阶段:精原细胞的增殖、精母细胞的减数分裂和精子细胞的变态过程,这一复杂的过程受多种因素的调控.近年来,小RNA在精子发生中的作用越来越受到人们的重视,现将三种小分子非编码RNA在精子发生中调控作用的研究现状概述如下.
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控制基因跳跃
调节基因是不在基因组中移动的,相反,称为转座子(transposons)的遗传因子可以在染色体间跳跃,并引发突变.这种行为在生成卵子和精子细胞中尤其危险.
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小鼠精子细胞变态成形过程中manchette的免疫荧光染色分析
目的 通过观察manchette结构在小鼠精子细胞中的定位和形态变化,探讨其在小鼠精子细胞变态成形过程中的作用和意义. 方法 利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术显示manchette结构在小鼠精子细胞变态成形各阶段的细胞内定位,观察精子细胞成熟过程中manchette结构的形态学改变. 结果 manchette结构紧密附着在精子细胞核表面;该结构在圆形精子细胞核变形和延伸的起始阶段形成,并随着精子细胞核的浓缩和变长逐渐向精子细胞尾部移位,直至精子变态成形后消失;在精子细胞变态成形过程中,manchette随着精子细胞核形态的改变逐渐从"帽状"结构变形为"微管样"结构. 结论 Manchette结构的形成和消失与精子细胞核的浓缩及延伸同步,其形态变化和位置改变与精子细胞核的形态学变化相吻合,在小鼠精子细胞变态成形过程中具有重要意义.
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"贝奥"雄性不育灭鼠剂现场试验报告
"贝奥"雄性不育灭鼠剂没有直接的杀鼠作用,其有效成分雄性不育剂为棉酚和雷公藤内酯,能明显抑制鼠精原细胞、精子细胞中的LDH-C4,使鼠类不能生成成熟的精子而不育,从而整体上降低鼠类数量,大限度地减少鼠害.我们选择2个占地面积相当,鼠密度相近的企业进行现场试验,一个企业投放"贝奥"灭鼠剂,另一个设为空白对照,以观察该药对鼠类的现场控制效果.经过10个月的现场观察认为,该药对鼠类整体数量有一定的降低作用,但下降的幅度不太理想.
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荧光原位杂交检测精子细胞膨胀成功的改良方法
近些年,在研究精子非整倍体与流产、畸形、不育及环境化学物质对人类生殖功能等影响时,荧光原位杂交(FISH)方法因适合大量间期核精子的检测得到广泛应用.因为精细胞变形成蝌蚪状时,核组蛋白被精蛋白替代,DNA以一种特殊方式被压缩、凝聚,正常情况下很难实现杂交,因此DNA去凝聚是精子杂交前期处理的关键步骤.
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MDM2基因多态性与NSCLC辐射敏感性及易感性的相关性
研究表明鼠双微体2(murine double minute 2,MDM2)基因的扩增和(或)过度表达可见于多种肿瘤,如淋巴瘤、乳腺癌和睾丸精子细胞肿瘤[1],MDM2在肺癌中的表达是一个常见现象[2].因此,MDM2在非小细胞肺癌(NSCLC)易感性及辐射敏感性中的作用是值得肿瘤学家们探讨的问题.笔者采用PCR-RFLP方法检测80例NSCLC及82例正常人MDM2基因单核苷酸多态性(SNP),旨在探讨MDM2基因多态性与NSCLC易感性及辐射敏感性是否存在相关性.
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精原干细胞移植及其相关研究进展
睾丸功能有赖于精原干细胞持续不断的增殖,这些细胞紧贴于曲细精管基膜,埋嵌在支持细胞间,经过同源性扩增形成分化型精原细胞链,分化形成的精母细胞经过两次减数分裂形成精子细胞,后者经过变态过程后形成成熟的精子.在整个精子发生过程中,精原干细胞在所有生殖细胞类型中展现出巨大的细胞群扩增能力.另外,DNA在复制和减数分裂的过程中,很可能会出现DNA缺失,精原干细胞池作为携带遗传物质的始发点,对于基因组完整性的改变有重要意义.由此可见,精原干细胞为生殖细胞基因工程研究提供了一条路径.作为干细胞家族成员,精原干细胞具有永生化和多能化潜能,是精子形成的前体细胞,其终生扩增为男性精子细胞源源不断产生所必需,近年来对其研究越来越深入[1].随着对其研究过程中在方法学上的突破,尤其精原干细胞移植,使精原干细胞展现出广阔的应用前景.
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卵母细胞化学激活在精子及精细胞体外受精中的应用
卵母细胞未完全激活是胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)后受精失败或受精率低下的主要原因之一.单倍体圆形/长形精细胞(round/elong spermatid,RS/ES)与成熟精子相比,其受精能力及胚胎发育潜能较差.而卵母细胞化学激活可以显著改善由于卵母细胞未能激活导致的ICSI后受精失败或受精率低下,并可提高单倍体精细胞体外受精率及胚胎发育潜能.综述不同化学激活剂的作用原理及其在精子及精细胞体外受精中的应用.
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人Izumo4和Tssk6 cDNA的重组及其多克隆抗体的制备
目的:研究Izumo4和Tssk6在精卵融合中的相互作用。方法根据世界卫生组织标准选取的正常精液标本取自内蒙古医科大学附属医院生殖医学中心。 SPF级昆明种小鼠5只,雄性,4~6周龄,体质量18~22 g。利用精液提取RNA,克隆人类Izumo4和Tssk6的cDNA序列,原核表达,通过重组质粒pMD-Izumo4、重组质粒pMD-Tssk6转染BL21(DE3)感受态菌制备 HIS-Izumo4和 HIS-Tssk6;然后通过小鼠腹腔制备小鼠抗人 Izumo4和 Tssk6腹水多克隆抗体。结果提取的人精子RNA在260 nm光密度值与280 nm光密度值比值为1.86、1.87,提取物无蛋白和杂质。克隆出正确的Izumo4和Tssk6 cDNA序列的pMD-Izumo4和pMD-Tssk6重组质粒。 pET-Izumo4和 pET-Tssk6重组载体在E.coli BL21(DE3)中复制,表达HIS-Izumo4和HIS-Tssk6融合蛋白,其相对分子质量分别位于35000~45000、45000~55000。2次切胶后,获得较纯的HIS-Izumo4/Tssk6融合蛋白。通过小鼠腹腔免疫,获得可以识别人内源性Izumo4和Tssk6蛋白的小鼠抗人HIS-Izumo4/Tssk6腹水多克隆抗体。结论实验制备小鼠抗人HIS-Izumo4/Tssk6腹水多克隆抗体,可特异性识别人的Izumo4/Tssk6蛋白,可以用于对人HIS-Izumo4/Tssk6蛋白的研究。
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首次用小鼠干细胞体外制造出功能精子
中国科学家2016年2月25日说,他们首次实现小鼠胚胎干细胞体外分化并获得具有功能的精子细胞.这被认为是干细胞研究的一项重要进展,为无精子症男性生育后代带来希望.
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小鼠生精细胞体外长期培养及超微结构分析
目的 初步探讨新生小鼠睾丸组织中生精细胞在体外培养条件下的增殖分化条件,建立有效的生精细胞体外成熟模型.方法 用酶法和Percoll不连续密度梯度法分离纯化新生小鼠睾丸生精细胞,获取富精原细胞层,采用自制小鼠睾丸组织培养液对分离纯化后的细胞进行体外培养.用电子显微镜观察培养的细胞超微结构.结果 新生小鼠生精细胞在用成年小鼠睾丸组织提取液配制的培养基中存活达194 d.电子显微镜观察可见,培养后的细胞中含有精子细胞顶体样结构.结论 采用小鼠睾丸组织制备的培养液培养的小鼠生精细胞可体外长期培养并显示出一定的分化趋势.
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无精子症患者睾丸活检结果分析
无精子症可以分为梗阻性与非梗阻性两大类型.梗阻性无精子症由于输精管道缺如(如输精管、精囊缺如)或输精管道阻塞(如输精管结扎、射精管梗阻或附睾炎症形成硬结等)所致,一般情况下睾丸或附睾内精子数量较多,成熟度也较高.采用睾丸或附睾中的精子进行卵子胞质内单精子显微注射辅助生育,妊娠成功率与常规体外受精相似.非梗阻性无精子症由于生精细胞分化或精子细胞变形的不同阶段发生阻滞所致,又可以分为多种类型.有的为唯支持细胞综合征,由于生精小管内无生精细胞,睾丸内无精子发生,目前无有效治疗手段;有的由于生精细胞分化障碍,睾丸内可能有不同阶段的生精细胞,甚至精子细胞或精子.对有精子细胞或精子的患者,有可能通过卵子胞质内单精子显微注射技术实现生育.因此,明确无精子症的病理类型具有重要的临床意义,而判断无精子症病理类型的有效方法是睾丸活检.
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糖原染色与核苷酸标记法评价雄性生殖毒性
近年来,雄(男)性生殖毒性危害评价问题日益受到重视.由于精子细胞的顶体中有大量糖原,因此通过糖原染色(PAS)可以区分生精上皮不同时期[1],从而显示其更精确地评价睾丸生殖毒性病理学损伤的特点.随着对生殖毒性机制研究的不断深入,发现一些物理或化学因素可以通过诱发生精细胞凋亡而造成雄性生殖毒性[2~4].研究细胞凋亡常需要应用脱氧尿嘧啶核苷酸末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUDP-nick end hbeling,TUNEL)检测DNA片段断裂.为了探索睾丸生精上皮细胞具体在哪一个时段(周期)对外源化合物诱导的细胞凋亡更为敏感,本文应用糖原染色与TUNEL联合方法探讨建立雄性生殖毒性病理学评价技术.
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钾离子外流在小鼠精子获能中作用
目的观察钾离子外流在小鼠精子体外获能的作用及机制.方法以金霉素(chlortetracycline,CTC)荧光染色后涂片观察小鼠精子体外获能率,进一步应用膜片钳技术在小鼠生精细胞膜上记录延迟整流钾离子电流(IDRK).结果终浓度为50 nmol/L的钾离子通道载体缬氨霉素处理小鼠精子,其B型精子发生率(%)与对照组相比显著增加(n=10,P<0.05);50nmol/L缬氨霉素显著增大小鼠粗线期精母细胞延迟整流钾离子电流,上调其I-V曲线.结论缬氨霉素通过激活延迟整流钾通道,增加胞内钾离子的外流,促发小鼠精子体外获能.
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小鼠精子畸形试验方法的改良与效果评价
精子畸形试验是通过观察接触化学物质一段时间小鼠精子头部和尾部形态的改变,以研究外来化学物对人或动物精子细胞的毒性作用,对生殖细胞诱变作用的常用方法之一[1],是国家有关法规规定外源化学物(包括食品、添加剂、化妆品、西药、中成药等)安全性评价程序中的检验项目之一[2-4],在毒理学日常工作中应用十分广泛.
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哺乳动物水通道蛋白家族成员-AQP8
AQP8是1997年以来被鉴定的哺乳动物水通道蛋白家族成员之一,主要分布于肝细胞、胰腺腺泡细胞、消化道上皮细胞、唾液腺腺泡细胞、睾丸精子细胞、胎盘、支气管上皮细胞和支气管腺的肌上皮细胞以及肾近曲小管、集合管上皮细胞的细胞内囊泡和顶质膜.能够特异性通透水分子,受cAMP等因素调节,可在细胞内囊泡与细胞顶质膜之间穿梭.可能参与胰液、胆汁及唾液的分泌、排泄物的脱水、精子成熟和受精以及肾脏水的重吸收等生理过程.
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氰戊菊酯对小鼠精子体外获能的影响及机制探讨
[目的]观察氰戊菊酯(fenvalerate,Fen)对小鼠精子体外获能的影响并探讨其作用机制.[方法]200 μl小鼠精子细胞悬液加入不同终浓度Fen染毒后,CO2孵箱37℃培育2 h,以金霉素(chlortetracycline,CTC)荧光染色后涂片观察小鼠精子体外获能培养后B型精子的发生率.[结果]以终浓度为0、0.625、1.25、2.5、5.0、10.0、20.0μmol@L-1的Fen处理小鼠精子,其B型精子发生率分别为(55.05±0.43)%、(52.02±1.29)%、(47.13±0.87)%、(40.08±0.32)%、(35.79±0.88)%、(28.66±0.96)%、(27.89±1.56)%,半数有效剂量(ED5o)为5 μmol@L-1,其作用呈剂量-反应关系.同时Fen以时间依赖方式抑制B型精子发生率.进一步观察到2.5、5.0、10.0、20.0μmol@L-1的Fen组小鼠精子,与对照组相比,其精子细胞膜脂质流动性下降[以1,6-二苯已三烯(1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene,DPH)为荧光探针],作用呈剂量-反应关系.[结论]氰戊菊酯抑制小鼠精子体外获能,其作用机制主要是氰戊菊酯降低了精子细胞膜脂质流动性.