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  • 小鼠精原细胞体外分化为精子细胞的研究

    作者:叶静;于洁;龙霞;张芳婷;万汇涓;尹美珺;房家智;蔡志明

    目的 探讨在辅以外源生殖激素混合培养的小鼠睾丸细胞中,精原细胞向精子细胞的转化.方法 采用7~8 d龄小鼠睾丸组织,以组合酶消化法制备睾丸细胞,在含重组卵泡刺激素(r-FSH)和睾酮的培养基中进行体外培养;定期观察细胞的生长和形态变化;用分子生物学和流式细胞技术对生长各阶段细胞进行分析.结果 培养5 d即可观察到形态与大小类似于圆形精子细胞,7 d后可见带有鞭毛与变形的精子细胞;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)结果显示,培养前细胞的睾丸特异蛋白激酶(TESK1)与鱼精蛋白2(Prm2)mRNA表达阴性,培养9与17 d细胞TESK1与Prm2 mRNA表达均阳性;DNA倍体分析显示,培养5 d细胞有单倍体峰出现,并随培养天数增加而增加.结论 在体外混合培养的小鼠睾丸细胞中加入外源生殖激素可以使精原细胞转化为精子细胞.

  • 哺乳动物雄性生殖系及其来源的干细胞系

    作者:李莲军;曹伍捌;卢克焕

    哺乳动物两性配子(精子和卵子)相互结合形成双倍体合子(也称受精卵),启动新一代个体的整个发育过程,不仅形成子代成体中所有组织的干细胞,而且还形成子代生殖细胞的干细胞.在这个意义上,生殖细胞是物种的"干细胞",是哺乳动物连接亲代与子代的唯一桥梁,它们将遗传信息一代代传递下去,对于种族延续是必需的,又是独一无二的.生殖系中的双倍体细胞在形成单倍体配子的过程中,将发生遗传重组:①同源染色体联会;②同源染色体随机分配.

  • 8例幼儿行白血病半相合骨髓移植的护理

    作者:潘世平;乔爱珍;董淑华;赵晶;赵晓丽;于静;贾风伟

    探讨亲缘半相合骨髓移植治疗幼儿白血病的护理方法.通过观察8例患儿,有针对性地进行心理干预,在预处理期间积极护理.预防和控制感染、抗移植物抗宿主痛(GVHD)等并发症.8例患儿移植期间心情较为愉快,积极配合治疗,移植后均获造血重建,经检测HLA为供者型.180d的移植相关病死率为0,其间无致死性严重感染发生,造血功能和免疫功能恢复较快,护士的精心护理是幼儿半相舍移植成功的关键之一.

  • 精子顶体反应及其临床应用价值的研究进展

    作者:郭小桥;余波澜;刘见桥;孙筱放

    哺乳动物的顶体是一个膜包裹的溶酶体样细胞器,位于精子核膜与质膜之间,是一个膜结合的帽状结构,其内含多种酶。顶体反应( acrosome reaction ,AR)是精子与卵透明带( zona pellu-cida,ZP)结合之后,精子的顶体破裂,释放一系列的顶体酶的过程。受精是精子与卵子融合,精子将所携带的单倍体遗传物质与卵子的单倍体遗传物质相融合形成双倍体合子的过程[1]。这是一个非常复杂和严格有序的生理过程,不同种类的动物,其受精方式及过程有所不同。人类受精过程包括:(1)精子获能;(2)精子与卵丘细胞之间的相互作用;(3)精子活动力的改变如超活化;(4)精子与透明带结合、透明带诱发精子顶体反应;(5)精子顶体酶激活;(6)精子穿入透明带;(7)精卵质膜融合;(8)卵子激活;(9)精子染色质解凝;(10)精卵核融合[2]。 AR发生的主要部位是卵丘颗粒细胞间隙及透明带,顶体反应通常是在卵丘细胞团的间隙中启动,在精子穿入ZP时,AR发生的程度更大,速度更快,能使卵子受精的精子,很可能是在卵丘细胞间隙就发生AR的精子[3]。

  • HLA联合KIR配型选择供者成功移植治疗复发难治急性白血病并文献复习

    作者:罗荣牡;杜振兰;刘全华;张晓妹;王娅;达万明

    目的:探求杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因配型在选择亲缘单倍体供者中的作用及进展期急性白血病挽救性移植的个性化预处理方案的选择。方法回顾性分析我科室1例进展期急性髓性白血病行单倍体造血干细胞移植的病例,对其单倍型供者的选择、个性化预处理方案、移植后预防复发及移植预处理毒性、急性移植物抗宿主病(GVHD)及白血病等情况,并对KIR 基因在供者选择中的作用及挽救性移植病例的个性化预处理方案选择的依据进行文献复习。结果随访1年,该患者获得完全植入,端串联重复序列(STR)-PCR验证为完全供者型,+19 d白血病植活,+38 d血小板脱离输注。无Ⅱ~Ⅳ度GVHD及广泛型慢性GVHD发生,白血病持续缓解,白血病残留MLL-PCR基因持续为0。结论对于进展期白血病接受单倍体造血干细胞移植作为挽救性移植,清肿瘤性个性化方案及选择KIR配型不合的单倍体供者值得探讨。

  • 多药耐药基因多态性和单倍体对环孢素A血药浓度的影响

    作者:梁惠琪;焦正;丁俊杰;李中东;施孝金;钟明康

    目的探讨中国健康志愿者中多药耐药基因(MDR1) 12外显子C1236T、21外显子G2677T/A和26外显子C3435T多态性及3个位点单倍体连锁不均衡性对环孢素A(CsA)药代动力学特性的影响.方法高效液相色谱法(HPLC)测定20名健康男性单次口服CsA 500 mg后,24 h中不同时间点的血药浓度.采用聚合酶链反应(PCR)结合基因测序法测定3个位点的基因多态性和单倍体类型.结果 20名男性健康志愿者中,C1236T位点1名为CC型,8名为CT型,11名为TT型;G2677A/T位点4名为GG型,7名为GT型,4名为AT型,5名为TT型;C3435T位点5名为CC型,11名为CT型,4名为TT型;MDR1的C1236T和G2677A/T的基因多态性与峰浓度(Cmax)和药时曲线下面积(AUC0-inf)差异均无统计学意义(均P>0.05),C3435T的基因多态性与Cmax无相关性(P>0.05),而与AUC0-inf相关(P<0.05).CC型、CT型和TT型的Cmax分别为2 124.7±179.4 ng/ml、1 934.2±372.8 ng/ml和1 765.2±415.6 ng/ml;AUC0-inf分别为13 922.4±2 881.5 ng/h-1·ml、11 511.8±2 192.1 ng/h-1·ml和8 514.9±1 063.4 ng/h-1·ml; 至少含有1个C等位基因的基因型(CC型和CT型),二者的AUC0-inf比TT型增高49%.单倍体分析表明,26与12和21外显子间存在单核苷酸多态性的连锁不均衡性,不同单倍体类型对CsA药动力学特性无影响(P>0.05).结论 MDR1 C3435T的多态性可能是口服CsA后,生物利用度变异大的影响因素.

  • 母供子非去T细胞性单倍体异基因造血干细胞移植治疗恶性血液病

    作者:周玲;何广胜;吴德沛;孙爱宁;金正明;仇惠英

    异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)是治愈恶性血液病的有效手段,但HLA相合(血缘相关或无关)供者来源的不足极大限制了allo-HSCT的应用.随着研究的进展,单倍体半相合allo-HSCT逐渐应用于临床,它有来源广、易获得、移植快等优点,使其成为allo-BMT研究的热点.我们对18例恶性血液病开展了母供子非去T细胞性单倍体allo-HSCT,探讨其有效性及毒副反应.

  • 替代供者异基因造血干细胞移植治疗范可尼贫血五例分析

    作者:汪文静;孙于谦;唐菲菲;韩婷婷;莫晓冬;王景枝;张晓辉;黄晓军;许兰平

    回顾性分析采用氟达拉滨(FLU)+环磷酰胺(CY)+抗胸腺免疫球蛋白(ATG),即FCA预处理方案,并行替代供者造血干细胞移植治疗范可尼贫血的疗效及安全性.2例采用单倍体相合骨髓联合外周血干细胞移植,3例采用非血缘供者外周血干细胞移植.患者耐受性良好,移植后均达到迅速造血重建,1例死于颅内感染,4例存活者均已脱离输血支持且保持完全供者嵌合.

  • 亲缘单倍体相合外周血造血干细胞移植治疗重症再生障碍性贫血

    作者:冯术青;高峰;朱梦波;崔晓聪;杜小梅;李晓宇;闫兴双

    目的 探讨改良白消安/环磷酰胺+抗胸腺细胞球蛋白(Bu/Cy+ATG)预处理方案在亲缘单倍体造血干细胞移植治疗重症再生障碍性贫血(SAA)临床应用中的有效性和安全性.方法 回顾分析河北唐山钢铁集团有限责任公司医院血液肿瘤科自2009年10月至2011年5月间采用亲缘单倍体外周血干细胞移植治疗的3例SAA患者资料.供者均为母亲,1例HLA 3/6位点相合,2例HLA 4/6位点相合.预处理方案均为改良Bu/Cy+ATG,具体为白消安0.8 mg/kg,每天4次,连用2 d;环磷酰胺50 mg·kg-1·d-1,连用4 d;抗胸腺细胞球蛋白2.5 mg·kg-1·d-1,连用4 d.环孢素+短程甲氨蝶呤+吗替麦考酚酯预防排斥反应.结果 3例患者均达完全供者植入,2例合并Ⅱ~Ⅲ度急性移植物抗宿主病(GVHD),1例患者合并局限型慢性GVHD.3例患者均发生血CMV感染,经抗病毒治疗均得以控制.随访5~25个月,3例患者至今均无病存活.结论 初步经验Bu/Cy+ATG预处理方案经改良用于亲缘单倍体外周血造血干细胞移植治疗SAA安全、有效.

  • 母体血浆靶向性平行测序应用于无创性单基因遗传病的产前诊断

    作者:杜司晨

    本文发表在2012年的《Clinical Chemistry》上.目前,通过对母体血浆DNA的深度测序可以确定胎儿的遗传基因组和突变基因组,这项技术在许多单基因遗传疾病的无创性产前诊断(NIPD)中有重要应用.在此过程中,相关单倍体剂量(RHDO)分析是十分关键的一步,即通过父母的SNP深度测序数据推断出母体外周血中胎儿的单倍型.临床上筛选致病基因位点时,RHDO的靶向应用可能会减少数据分析的成本及复杂性.因此,证明靶向RHDO分析在NIPD中的可行性是十分必要的.

  • 印迹基因LOT1在卵巢上皮性癌组织中的表达及其甲基化的研究

    作者:沈文洁;邢福祺;鲁永鲜;孔令红

    LOT1基因是印迹抑癌基因,不遵循孟德尔遗传定律,正常情况下仅父系等位基因表达,母系等位基因印迹沉默,相当于功能上的单倍体,仅需一次突变就可诱发肿瘤,不同于传统的肿瘤二次突变学说,增加了肿瘤的易感性.

  • 新型儿童单倍体造血干细胞移植体系治疗儿童血液病结果初探——一个单中心回顾性分析

    作者:罗荣牡;达万明;司英健;张晓妹;杜振兰;王娅;岳燕;陈伟;邢国胜

    目的 探索采用新型儿童单倍体造血干细胞移植(haplo-HSCT)技术体系治疗儿童血液病的安全性和疗效.方法 具备HSCT适应症的血液病患儿共56例,均采用新型儿童haplo-HSCT技术体系治疗,回顾性分析植入成功率、移植关死亡率、GVHD发生率、总生存率及无病生存率情况.结果 56例血液病患儿中,男34例,女22例,恶性血液病45例,再生障碍性贫血10例,家族性噬血细胞综合征1例,新型haplo-HSCT技术体系治疗后评价:(1)回输单个核细胞中位教为10.59(6.36~13.74)×108/kg,CD34+细胞中位数为7.02(2.00~25.86)×106/kg.全部植入成功;(2)干细胞回输后100 d内,移植相关死亡率为1.8%;(3)100 d内自然发生Ⅰ~Ⅱ度急性移植物抗宿主病(GVHD)发生率为32.14%,Ⅲ~Ⅳ度急性GVHD发生率为1.8%;100 d后为治疗和预防复发所进行的供者淋巴细胞输注及减停免疫抑制剂相关的Ⅲ~Ⅳ度急性GVHD发生率5.36%(3例).100 d后自然发生的广泛型慢性GVHD总发生率为3.6%,为治疗和预防复发所进行的DLI及减停免疫抑制剂导致的慢性广泛型GVHD发生率5.36%;(4)中位随访18(6~40.8)个月,总生存率(OS)92.85%,无病生存率(DFS)为87.5%,复发2例,出现微小残留病2例,观察期超过1年的38例病例中,1年OS为92.11%,1年DFS为89.47%.中位生存时间为20.35个月.采用SPSS 20.0Log-Rank法比较淋系和髓系恶性血液病总生存及DFS分别为87.5%和95%(P =0.347)及75%和95%(P =0.058).结论 本研究初步显示对于无相合同胞供者、不能及时寻找到非血缘HLA相合供者的儿童血液病患者,本中心所采用的新型haplo-HSCT技术体系有效性及安全性可靠,淋系及髓系两组比较虽然差异无显著性,但是显示髓系恶性血液病DFS优于淋系的趋势,更远期的疗效尚须更长随访时间进一步总结.

  • 二次互补性移植联合地西他滨治疗幼年型粒单核细胞白血病1例

    作者:彭智勇;林宇辰;杨秀玲;彭黎;李春富;何岳林

    目的 探讨单倍体+无关不全相合脐血互补性移植联合地西他滨治疗幼年型粒单细胞白血病(JMML)的安全性和有效性.方法 4岁患儿采用单纯地西他滨治疗后[20mg/(m2·d) ×5d为1个疗程,共2疗程,间隔4周]桥接第一次母亲单倍体(5/10)+无关脐血(7/10)互补移植,植入失败后50d改用第二次同胞单倍体(5/10)+第二份无关脐血(7/10)互补移植进行挽救;移植预处理方案以Cy+ Flu+ BU为基础,使用PT-Cy并序贯MMF、FK506、CsA组合的预防GVHD方案;移植后继续使用地西他滨[5~10mg/(m2·d)×5d]4个疗程(疗程间间隔4~6周)作为维持治疗,以清除“免疫逃逸”之白血病瘤细胞.结果 随访时间15个月,第一次移植后+45d发生原发性植入失败;二次移植为独立脐血植入,粒细胞植入时间为二次移植后的+71d,血小板植入时间为+105d,第二次移植后20天并发重度aGVHD(肠道3级,皮肤2级),给予静脉FK506+ MMF+ MP抗GVHD治疗后均得到控制,未发生慢性GVHD.移植后使用地西他滨期间未见明显肝肾毒性,未发生严重骨髓抑制(粒细胞大于0.5G/L).6个月后逐渐停服免疫抑制剂,无病存活至今.结论 单倍体+无关不全相合脐血互补移植联合地西他滨治疗JMML是安全有效的,移植前适当的化疗对于HLA不全相合的移植而言可能是必要的.

  • 父供子单倍体异基因造血干细胞移植治疗高危白血病2例临床分析

    作者:孙巍;王晓华

    目的 探讨父供子单倍型造血干细胞移植治疗高危白血病的临床特点及疗效.方法 对2例高危白血病接受父供子单倍型造血干细胞移植患儿的临床资料进行回顾性分析.结果 2例患儿回输有核细胞数分别为17.7×108/kg、8.3×108/kg,白细胞植活时间分别为+7d和+16 d,血小板植活时间分别为+18 d和+8 d;2例均转为完全供者型;1例出现急性肠道GVHD(Ⅳ度),1例出现皮肤Ⅱ度GVHD;1例因移植后感染于+146 d死亡,1例存活,均无白血病复发倾向.结论 非去T细胞性单倍型异基因造血干细胞移植正逐渐成为一种安全有效的治疗方法,为缺乏HLA完全相合相关或无关供者的高危难治性白血病患者提供了新的治疗选择.同时也提示父亲或父系抗原供者同样可以作为异基因造血干细胞来源.

  • 单倍体造血干细胞联合脐带间充质干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血-Ⅰ型的临床观察

    作者:徐丽昕;吴亚妹;刘周阳;曹永彬;李晓红;杨雪良;闫蓓;达万明;吴晓雄

    目的 探讨单倍体相合造血干细胞移植联合脐带血间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cell,hUC-MSC)治疗重型再生障碍性贫血-Ⅰ型(severe aplastic anemia-Ⅰ,SAA-Ⅰ)的疗效及相关并发症.方法 14例重型再生障碍性贫血-Ⅰ型患者均为2012年1月-2013年12月在解放军总医院第一附属医院血液科确诊并进行单倍体造血干细胞移植的病例.移植物选用G-CSF动员的外周血加骨髓干细胞混合移植方案,同时加入脐带间充质干细胞作为第三方细胞.预处理采用兔抗人T淋巴细胞球蛋白+环磷酰胺方案+福达拉滨,移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)的预防采用环孢菌素A+霉酚酸酯+CD25单克隆单抗.结果 14例全部获得造血重建,白细胞恢复,中性粒细胞>0.5×109/L平均时间10.7 d,血小板>20×109/L平均时间13.3 d.7例发生急性移植物抗宿主病(aGVHD),其中Ⅰ~Ⅱ度2例,Ⅲ~Ⅳ度5例,3例出现移植相关死亡.结论 联合hUC-MSC的单倍体异基因造血干细胞移植治疗SAA-Ⅰ安全可行,白细胞恢复快,并发症少.

  • 间充质干细胞联合单倍体异基因造血干细胞移植治疗27例重型再生障碍性贫血临床疗效

    作者:吴亚妹;曹永彬;李晓红;徐丽昕;刘周阳;刘蓓;闫蓓;杨雪良;李松威

    目的 回顾性分析重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)行脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)联合单倍体异基因造血干细胞移植(haploidentical stem cells transplantatio,haplo-HSCT)治疗的临床疗效.方法 总结解放军总医院第一附属医院血液科2007年1月-2013年12月住院收治的27例SAA患者进行UC-MSCs联合haplo-HSCT治疗的资料,观察移植后细胞植入、移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)发生率及严重程度和2年总生存率(overall survival,OS).结果 干细胞全部植入成功,无MSC回输不良事件发生.白细胞及血小板植入时间分别为12(8~ 21)d及14(10~26)d;Ⅱ~Ⅳ度和Ⅲ/Ⅳ度aGVHD发生率分别为40.7%和22.2%,cGVHD发生率为50.0%,广泛性仅为15.4%;2年OS为76.3%.结论 UC-MSCs联合haplo-HSCT对无全相合亲缘或无关供者的SAA患者疗效可行有效,可作为SAA患者挽救治疗选择.

  • 间充质干细胞联合单倍体造血干细胞移植治疗87例难治/复发恶性血液病临床疗效

    作者:吴亚妹;曹永彬;李晓红;徐丽昕;刘周阳;刘蓓;闫蓓;杨雪良;李松威

    目的 回顾性分析难治/复发恶性血液病行脐带间充质干细胞(umbilical cord mesenchymal stem cells,UC-MSCs)联合单倍体异基因造血干细胞移植(haploidentical hematologic stem cells transplantation,haplo-HSCT)的临床疗效.方法 总结解放军总医院第一附属医院血液科2007年1月-2013年12月住院收治的87例难治/复发恶性血液病进行UC-MSCs联合haplo-HSCT治疗的资料,观察移植后细胞植入、移植物抗宿主病(graft-versus-host disease,GVHD)发生率及严重程度和2年总生存率(overall survival,OS)、无疾病进展率(progression-free survival,PFS)及复发率.结果 干细胞全部植入成功,无MSC回输不良事件发生.白细胞及血小板植入时间分别为12(9 ~ 21)d及14(10~28)d;Ⅱ~Ⅳ度和Ⅲ~Ⅳ度aGVHD发生率分别为34.5%和18.4%,cGVHD发生率为46.5%,广泛性仅为11.3%;2年OS、PFS和复发率为66.7%、62.9%及13.8%.59例存活,11例死于GVHD,9例死于感染,8例死于疾病复发.结论 UC-MSCs联合haplo-HSCT对难治/复发恶性血液病患者有效,是具有高危因素、无全相合供者患者的挽救治疗选择.

  • 单倍体相合造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血进展

    作者:王丽;吴亚妹;曹永彬;李晓红;徐丽昕;汪海涛;高亚会;吴晓雄

    同胞及无关供者全相合造血干细胞移植是治疗重型再生障碍性贫血(severe aplastic anemia,SAA)的一线治疗方案,但该治疗供者匮乏,免疫抑制剂治疗部分无效、复发率高.单倍体相合造血干细胞移植近年发展迅速,疗效已接近全相合移植.单倍体相合造血干细胞移植扩大了移植供源,抓住了佳治疗时机,使广大患者获益.本文综合目前国内外相关研究进展及临床治疗经验,对单倍体相合造血干细胞移植治疗SAA的研究进展进行综述.

  • 单倍体造血干细胞移植治疗重症再生障碍性贫血

    作者:张璞;冯凯;薛燕;张慈现;王洋;李晓林

    目的:探讨单倍体造血干细胞移植(Haplo-HSCT)治疗重型再生障碍性贫血(SAA)相关并发症的防治及临床疗效。方法回顾性分析8例采用Haplo-HSCT治疗的SAA患者临床资料,男5例,女3例,平均年龄14岁。干细胞供者为患者父母。预处理方案为环磷酰胺+氟达拉滨+抗淋巴细胞球蛋白,2例加用全身照射。采用环孢素、短程甲氨蝶呤及吗替麦考酚酯(MMF)预防移植物抗宿主病(GVHD)。观察造血干细胞重建情况,定期监测供体细胞嵌合率,监测感染、GVHD、肝静脉闭塞病(VOD)、出血性膀胱炎(HC)、巨细胞病毒(CMV)感染等情况。结果8例患者均获得造血重建,中性粒细胞植入时间(14.80±3.24)d,血小板计数植入时间(15.00±3.42)d。移植1个月后复查患者嵌合情况,均为完全嵌合。7例发生急性GVHD,其中Ⅰ~Ⅱ度5例,Ⅲ度1例,Ⅳ度1例。2例发生慢性GVHD,其中1例局限于口腔,1例为全身皮肤受累的广泛型慢性GVHD。所有患者未出现肝静脉闭塞病和出血性膀胱炎。平均随访8.5(2~18)个月,未出现移植相关死亡。结论单倍体造血干细胞移植用于SAA患者是安全、有效的。

  • 父供子单倍体造血干细胞移植治疗恶性血液病

    作者:石聪聪;万鼎铭;刘炜;王小稳

    目的 探讨父供子的单倍体造血干细胞移植疗效.方法 25例恶性血液病男性患者行父亲为供者的单倍体造血干细胞移植,观察患者的造血重建时间、移植物抗宿主病(GVHD)的发生率、复发率、2年总生存率及2年无病生存率.结果 ①25例患者均获得完全植入.患者中性粒细胞≥0.5×109/L植入的中位时间为15 d(12~17 d),植入血小板≥20×109/L的中位时间为17 d(9~40 d).②25例中有10例患者发生急性GVHD,发生率40.0%,其中2例患者Ⅲ度肠道、肝脏急性GVHD.移植后持续随访100 d,慢性GVHD的患者7例,发生率28.0%,其中广泛型3例.③随访至2014年6月,父亲供儿子移植组中原发病复发2例(8.0%).父亲供儿子移植组中16例无病存活,9例死亡,移植相关死亡率为28.0%.患者2年总生存率为68.0%,2年无病生存率为68.0%.结论 父亲为供者的单倍体造血干细胞移植是一种安全、有效的移植方式.

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