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重组戊型肝炎疫苗抗原工程菌发酵工艺的优化
目的 优化重组戊型肝炎疫苗抗原工程菌的发酵工艺,为其规模化生产奠定基础.方法 以目的蛋白的表达量及菌体浓度作为综合评价指标,对重组戊型肝炎疫苗抗原工程菌的摇瓶发酵温度、初始pH值、溶解氧、IPTG浓度及诱导时间进行优化;以摇瓶发酵结果为基础,进一步对发酵罐培养工艺中诱导时机、诱导时间及补料培养基配方进行优化;以确定的罐发酵工艺条件连续发酵5批,验证该发酵工艺.结果 适摇瓶发酵工艺条件为:发酵温度为37℃,初始pH值为7.0,高溶氧,IPTG诱导浓度为0.05 mmol/L,诱导时间为4h;适罐发酵工艺条件为:菌体A600值约为40时开始诱导,诱导时间为4h,补料培养基配方为葡萄糖25%,MgSO4·7H2O 0.5%.按照确定的工艺连续发酵5批,终菌体A600均达50.0以上,目的蛋白的表达量均高于15%.结论 优化的重组戊型肝炎疫苗抗原工程菌的发酵工艺稳定性良好,已达到中试生产规模的要求.
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HIV-1 Gag蛋白酵母工程菌表达条件的优化
为了探索构建的表达HIV-1核心蛋白Gag酵母工程菌GS115/pPICGAG的佳表达条件,我们将该酵母工程菌分别在不同条件下进行诱导表达,通过ELISA检测培养上清中目的蛋白的表达量来分析佳表达条件,并分析了浓缩上清时适硫酸铵饱和度.
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Alzheimer病患者MLL3基因表达量的研究
目的 旨在从MLL3(mixed-lineage leukemia 3,MLL3)基因入手,尝试探讨Alzheimer病(Alzheimer's disease,AD)与该基因表达量的相关关系.方法 在45例AD患者、25例血管性痴呆(vascular dementia,VD)患者和60名年龄性别相匹配的对照组中进行,在新鲜外周血样本中抽提总RNA,反转录成cDNA,基因表达量的检测在ABI Prism7900HT型序列监测系统上进行,采用SYBRGreenⅠ的方法对患者及对照组样本的mRNA进行绝对定量,采集的荧光数据经SDS2.1软件自动处理,每个样本作3次乎行检测,取平均值作为该样本的终定量.对组间基因表达量的差异进行独立样本的t检验.结果 检测得到MLL3基因在对照组中的表达量为(0.59±0.18)amol/μg cDNA,在AD患者组中的表达量为(2.52 ±0.59)amol/μg cDNA,在VD患者组中的表达量为(0.33 ±0.05)amol/μg cDNA.经显著性检验,AD患者组与正常对照组相比较,t=3.140,df 52.67,P=0.003,差异有统计学意义,95%CI:0.174~0.791;VD患者组与正常对照组相比较,t=-0.959,df 82,P=0.341,差异无统计学意义.调用本实验室已有的ApoE基因分型资料,分析ApoE基因型与MLL3基因表达之间的相互关系,经差异显著性检验,不携带ε4等位基因的AD患者组与不携带ε4等位基因的正常对照组相比较t=3.255,df30.40,P=0.003,差异有统计学意义,95%CI:0.177~0.772.结论 MLL3基因表达的增强可能特异性地与AD的发生相关联,并且这种关联性尤以不携带ApoE基因ε4等位基因的AD显著.
关键词: Alzheimer病 MLL3基因 表达量 关联 -
精神分裂症患者G72基因表达水平的研究
目的 本工作旨在检测精神分裂症(Schizophenia)患者外周淋巴细胞中G72基因的表达情况,进而探讨G72基因的表达与精神分裂症的相关关系.方法 工作在56例精神分裂症患者和84名年龄性别相匹配的对照中进行,在新鲜外周血样本中抽提总RNA,反转录成cDNA,基因表达量的检测在ABI Prism7900HT型序列监测系统上进行,采用TaqMan的方法对患者及对照组样本的mRNA进行定量,采集的荧光数据经SDS2.1软件自动处理,每个样本作3次平行检测,取平均值作为该样本的终定量.数据应用SPSS统计软件进行处理,对组间基因表达水平的差异采用独立样本的T检验,调用本实验室G72基因单核苷酸多态性(SNPs)资料,用单因素方差分析的方法分析SNP与基因表达水平的关联性.结果 检测得到G72基因在对照组中的表达量为0.0586±0.0114 amol/ng cDNA,在精神分裂症患者组中的表达量为0.0498±0.0121 amol/ng cDNA;经统计学分析,G72基因的表达水平在病例和对照组间差异无统计学意义,t=-0.512,dfl38,P=0.609,95%CI:-4.258~2.506;单因素方差分析结果显示,rs9 47267位置上的SNP与该基因的表达水平无相关,F=0.355,d.f2,r=0.703;而rs2181953位置上的SNP与G72基因表达水平相关联,F=6.275,dr2,x2=0.004.AA基因型的患者基因表达水平显著高于其他基因型.结论 精神分裂症患者G72基因的表达量总体上较正常人并无显著变化,但rs2 181953位置上的基因型会影响精神分裂症患者该基因的表达.
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蛋白质组学在大肠癌研究中的应用
蛋白质组学(Proteomics),其是以蛋白质组为研究对象,是在人类基因组计划研究发展的基础上形成的新兴学科,主要是在整体水平上研究细胞内蛋白质的组成及其活动规律.蛋白质组学对应于基因组学(Genomics),并回答基因组学不能解决的几个难题:(1)基因组中的基因是否被转录、翻译及相应时相;(2)基因产物表达量的变化;(3)翻译后修饰;(4)ORF(开放阅读框)的预测;(5)基因敲除或基因表达的生物学效应;(6)蛋白质的半衰期及在蛋白复合物中的定位;(7)药物效应、细胞周期、发育、老化、各种应激反应及涉及多基因疾病的现象[1].
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心房颤动患者血栓形成与腺苷、血小板P选择素表达的关系
[李为民,韩薇,王岚峰.中华心血管病杂志,2000,28(5):367]目的研究慢性心房颤动(房颤)患者血栓形成与血浆腺苷水平、血小板活化的关系。方法应用反相高效液相色谱及流式细胞仪,分析窦性心律及房颤患者血浆腺苷水平、血小板P选择素、GPⅡb/Ⅲa表达量,同时放免法测定血浆TXB2、6-keto-PGF1α含量,计算TXB2/6-keto-PGF1α。并应用不同浓度的8-苯基茶碱阻断腺苷受体,流式细胞仪分析其对血小板P选择素表达量的影响。结果房颤组血浆腺苷水平明显低于窦性心律组,分别为(55.6±27.3)μg/L与(77.5±30.2)μg/L,(P<0.01)。血小板P选择素表达量明显高于窦性心律组,分别为(6.53±3.37)%与(4.72±1.97)%,P<0.05。血小板GPⅡb/Ⅲa有增高趋势,但无统计学意义(18.7±8.6)%与(15.6±8.3)%,P>0.05。血浆TXB2及TXB2/6-keto-PGF1α含量均显著增高[(150.3±58.0)ng/L与(102.4±36.5)ng/L,P<0.01;1.43±0.59与0.74±0.29,P<0.001];而血浆6-keto-PGF1α的含量无显著变化(P>0.05)。血小板P选择素表达量房颤血栓形成组明显高于窦性心律无血栓组[(7.34±2.74)%与(4.72±1.97)%,P<0.01];房颤血栓形成组与房颤无血栓组无显著差异[(7.34±2.74)%与(6.17±2.76)%,P>0.05]。应用8-苯基茶碱阻断腺苷受体后,血小板P选择素表达量增加,并在一定范围内呈浓度依赖性。超过一定范围,血小板P选择素表达量反而下降。结论血浆腺苷水平降低可能是房颤患者血小板活化、血栓形成的原因之一。腺苷及腺苷调节替代治疗,有可能预防房颤患者的血栓形成。
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用转基因植物生产病原微生物亚单位疫苗的研究现状
利用转基因植物生产病原微生物亚单位疫苗是一个新兴的领域,本文就生产流程、在转基因植物中表达成功的病原微生物亚单位疫苗和转基因植物疫苗的优缺点,提高亚单位疫苗抗原在转基因植物中的表达量,以及加强机体黏膜免疫反应的措施等方面作一综述.
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新发现的丙型肝炎病毒核心蛋白
近年来,有关新的丙型肝炎病毒核心基因及其编码产物的研究时有报道.与丙型肝炎病毒传统单一阅读框架翻译的病毒蛋白不同,新的核心C蛋白是由该病毒核心蛋白基因阅读框架序列+1移位后翻译产生的.新型C蛋白普遍存在于各个丙型肝炎病毒基因型中,约40%及 20%病毒感染者体内可检测到针对新型C蛋白的抗体和细胞免疫反应.在丙型肝炎病毒感染所致的肝癌患者中,新型C蛋白的表达量增高.新型C蛋白被认为可能与HCV感染慢性化和肝癌有关.
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基于甲病毒复制酶的DNA疫苗效力的增强有赖于细胞凋亡
基于甲病毒复制酶的DNA疫苗与传统DNA疫苗相比,在免疫原性及效力方面有很大提高,转染此类疫苗的细胞因为容易发生凋亡而使抗原表达量降低.由此推测,细胞凋亡可能在增强疫苗效力中发挥了重要作用.
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肝星状细胞、肝细胞生长因子与肝癌相关性研究
肝细胞生长因子(HGF)是间质来源的细胞因子,在刺激内皮细胞和肿瘤细胞增殖和运动方面具有很强的作用[1].本文采用免疫组化方法观察大鼠实验性肝癌组织中活化肝星状细胞(HSC)数量变化,RT-PCR方法观察HGF mRNA表达量的变化,旨在研究HSC活化与HGF表达量之间的关系,及两指标的改变对肝细胞肝癌(HCC)的影响.
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结直肠锯齿状腺瘤、传统腺瘤及结直肠癌中鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体 B1和促红素人肝细胞蛋白表达差异比较
结直肠癌是严重威胁人类健康的消化道恶性肿瘤之一,有研究表明缺乏对锯齿状病变的正确认识是结直肠癌发病率持续增加的原因之一[1-2]。据报道,2007年仅10%~15%的结直肠癌来自锯齿状病变,但2011年 Snover[3]提出35%的结直肠癌来自锯齿状病变。本研究检测鼠类肉瘤滤过性病毒致癌基因同源体 B1(v-Raf murine sarcoma viral oncogene homolog B1,BRAF)、促红素人肝细胞(erythropoietin-producing hepatoma cell line B2,EphB2)蛋白在锯齿状腺瘤(serrated adenomas,SA)、传统腺瘤、结直肠癌中的表达量,观察各蛋白的表达部位,并与传统腺瘤及结直肠癌比较,旨在加强对 SA 的认识,提高诊断的正确率。
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反义寡脱氧核苷酸抑制赖氨酸羟化酶2 mRNA表达及胶原形成
肝纤维化主要病理特征是细胞外基质的过度沉积,以Ⅰ型胶原的沉积为主.已明确胶原的形成与赖氨酸羟化酶(lysyl hydroxylase,LH)密切相关,LH包括LH1、LH2和LH3,其中LH2在纤维化的发生中至关重要[1].LH2由赖氨酸羟化酶2基因(procollage-lysine-2-oxoglutarate-5-dioxygenase 2,PLOD2)编码,在纤维化过程中,它的表达量明显增加[2].
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不同发育程度人甲状腺褪黑素受体表达量的变化
目的:观察不同胎龄人胚胎及成人甲状腺组织中褪黑素受体表达量的差异.方法:胚胎甲状腺取自部分母亲不宜继续妊娠的水囊引产胎儿,胎龄12~33周不等,共 12例,均经孕妇同意.成人甲状腺组织2例,取自手术切除的甲状腺囊肿旁的正常甲状腺组织,年龄分别为24、32岁.用荧光定量RT-PCR方法测定甲状腺组织中褪黑素受体亚型mt1、MT2的mRNA含量.结果:2例12周龄胚胎甲状腺组织中mRNA含量高,15、16周龄胚胎各1例甲状腺组织中mt1、MT2 mRNA含量次之.随胎龄增加,甲状腺组织mt1及MT2 mRNA含量逐渐降低,32、33周龄胚胎甲状腺组织各1例及2例成人甲状腺组织mt1、MT2 mRNA均呈阴性.统计学分析显示胚胎甲状腺组织中mt1、MT2mRNA表达量与胎龄呈指数负相关,相关系数分别为-0.96、-0.93.结论:褪黑素在胚胎早、中期可能通过褪黑素受体直接作用于甲状腺调节其功能,而在胚胎晚期以及成年人可能不通过其受体而直接作用于甲状腺.
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信号调节蛋白SIRPα在肝癌内的表达及意义
目的:探讨信号调节蛋白SIRPα与肝细胞癌之间的关系.方法:应用Northern杂交技术,检测36对肝细胞癌(HCC)和相应癌旁肝组织,以及1种正常肝细胞系、4种肝癌细胞系内SIRPα基因表达的变化,并结合各组织标本的病理学特点进行分析.结果:SIRPα在20例肝癌组织及两种肝癌细胞系内表达水平明显下降.在两种主要杂交信号中,肿瘤组织内3.9 kb转录子表达量较癌旁组织下降2~4倍,而2.5 kb转录子表达量则下降4~6倍.有9例肿瘤组织在原基因表达水平下降的同时,在3.9 kb转录子的上方又出现一长度稍大的杂交信号,而相应癌旁肝组织内则为阴性.其中,5例有肝内或门静脉转移的肿瘤组织,SIRPα表达全部下降,且均发现有这种新的基因表现形式出现.结论:SIRPα,尤其是2.5 kb转录子在肝癌内表达下降,与肿瘤进展程度密切相关,且肿瘤组织内存在SIRPα相关的新的基因表现形式.SIRPα可能为肝癌发生发展过程中一个重要的调节蛋白.
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miR-21调控靶蛋白hMSH2对寻常型银屑病的作用
目的 探讨微小核糖核酸-21(microRNA-21,miR-21)调控其靶蛋白错配修复基因——人mut S同种组蛋白2(hMSH2)在寻常型银屑病发生过程中的表达水平和作用.方法 采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测miR-21在30例寻常型银屑病患者皮损组织和30例正常皮肤组织中的表达水平.利用免疫组织化学Envision 二步法检测30例寻常型银屑病患者与30例正常人群hMSH2蛋白的表达情况.化学合成miR-21模拟物、抑制剂,瞬时转染HaCaT细胞以过表达、抑制表达miR-21,采用Western blot法检测转染细胞中hMSH2蛋白的表达.结果 miR-21在寻常型银屑病患者皮损组织中的表达高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(t=18.596,P<0.01).hMSH2蛋白在寻常型银屑病患者皮损中的阳性表达率为90.00%,显著高于在正常皮肤组织中的46.67%,差异有统计学意义(x2=13.017,P<0.01).Western blot法检测hMSH2蛋白表达结果显示,过表达miR-21时hMSH2蛋白表达量增加,miR-21抑制表达时hMSH2蛋白表达量降低,差异有统计学意义(F=69.579,P<0.01).结论 miR-21及其靶蛋白hMSH2在寻常型银屑病患者皮肤组织中的表达显著高于正常皮肤组织;miR-21的差异表达可能调控hMSH2蛋白参与寻常型银屑病的发病过程.
关键词: 寻常型银屑病 微小核糖核酸-21 人mut S同种组蛋白2 表达量 -
血管内皮生长因子在非小细胞肺癌患者中的表达及其与临床病理参数的相关性
目的 检测血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌(NSCLC)患者组织和血清样本中的表达,探讨VEGF表达与NSCLC分期和肿瘤大小之间的相关性,以及VEGF对NSCLC细胞系增殖能力的影响.方法 对NSCLC组织和血清标本以及NSCLC细胞系A549和95C进行qRT-PCR、ELISA和MTT细胞增殖检测.收集30对NSCLC组织和相邻的非肿瘤肺组织标本以及10名健康志愿者的血清样品.结果 NSCLC组织和血清VEGF表达均明显上调,并且这种趋势和组织的临床阶段发展之间具有显著的正相关性.另外,外源性VEGF刺激明显促进了A549和95C细胞株的增殖能力,同时VEGF中和性抗体使A549和95C细胞株的增殖能力得到抑制.结论 VEGF能够促进NSCLC细胞增殖,其表达水平可能是NSCLC疾病发展中有用的生物标志物.
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溃疡性结肠炎组织中环氧合酶-2与一氧化氮合酶的表达及意义
环氧合酶(COX)是花生四烯酸转化为前列腺素和其它二十烷类的限速酶,至少存在COX-1和COX-2两种同工酶,前者呈原生性表达,其表达量不受刺激因素的影响,后者呈诱导性表达,很多因素如细胞因子、内毒素及致癌物等均可诱导其产生[1].
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作者更正
本刊2015年第23卷第8期第614页左栏倒数第4行起,“对照组、模型组和阿托伐他汀组 NF-κB mRNA的相对表达量分别为1.000±0.138、0.178±0.004和0.381±0.017”,更正为“对照组、模型组和阿托伐他汀组 NF-κB mRNA 的相对表达量分别为0.178±0.004、1.000±0.138和0.381±0.017”。
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维A酸受体蛋白在寻常性银屑病的表达
临床实践证明维A酸治疗银屑病有效,维A酸的作用是通过与维A酸受体邋(RAR)结合而发挥作用的,RARγ和RXRα是表达量高的两个受体,RARγ/RXRα是表皮中结合配体的主要形式.相比较而言,RXR不仅能自身形成同二聚体起作用,还可与其他的细胞核受体,如维生素D受体,甲状腺受体、过氧化物酶体增殖蛋白激活性受体γ(PPARγ)结合形成异二聚体发挥生物效应[1].我们用免疫组化的方法比较RXRα蛋白在银屑病患者和正常对照组中是否存在差异,RXRα的蛋白表达水平是否和银屑病的发病有关系.
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梅毒血清固定患者外周血调节性T细胞/Th17细胞平衡的研究
目的 探讨梅毒血清固定患者外周血调节性T细胞(Treg细胞)和Th17细胞平衡的变化.方法 梅毒血清固定患者26例,正常人对照23例,利用流式细胞仪分别检测外周血Treg细胞和Th17细胞的比例及相关特异性转录因子Foxp3和ROR-γt的定量表达情况,并进行相关性分析.结果 梅毒血清固定患者外周血CD4+T细胞中,Treg细胞比例为33.28%±11.84%,明显高于正常人对照组(22.13%±7.79%,P<0.01);Th17细胞比例(3.17%±2.32%)显著低于正常人对照组(8.87%±2.00%,P< 0.01);CD4+T细胞内转录因子Foxp3的表达量(2994.86±1099.18)高于正常人对照组(2539.72±1086.96,P<0.05),而ROR-γt的表达量(1473.12±752.20)低于正常人对照组(1778.34±388.13,P< 0.05).在所有受试者外周血CD4+T细胞中Foxp3和ROR-γt的表达呈负相关(r=-0.48,P<0.01).结论 梅毒血清固定患者外周血存在Treg/Th 17细胞平衡的异常.