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HLA-B27表达量在评估强直性脊柱炎患者疾病状况中的作用
目的 通过检测人类白细胞抗原B27(HLA-B27)蛋白表达量,结合强直性脊柱炎(AS)的疾病活动指数(BASDAI)评分,探讨HLA-B27表达量可能在AS疾病诊疗中的意义.方法 收集120例临床疑似AS病例和50例健康体检者的一般临床资料,包括性别、年龄、家族史等,对所收集病例的全血采用磁珠酶联免疫法检测HLA-B27蛋白表达量.采用SPSS17.0数据分析软件进行分析,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 120例疑似AS患者中,临床终确诊为AS患者55例,其中人类HLA-B27检测阳性者53例(96.36％);50例健康对照组中筛查HLA-B27检测阳性2例(4％).53例HLA-B27阳性AS患者HLA-B27表达量与BASDAI进行相关性分析显示:BASDAI评分与HLA-B27蛋白质表达量(吸光度A值)呈正相关性(r=0.562,P=0.000).结论 在AS患者中HLA-B27表达量与AS疾病活动指数之间存在相关性,可以为疾病的状态评估提供参考.
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HLA-B27基因表达量及亚型分析在 AS 疾病评估中的意义
目的：探讨人类白细胞抗原（human leukocyto antigens，HLA）B27（HLA-B27）基因表达量及其亚型在强直性脊柱炎疾病诊疗中的意义。方法收集120例疑似强直性脊柱炎患者和50例健康体检者的临床资料，对所收集患者的全血采用实时荧光定量聚合酶链反应检测 HLA-B27基因相对表达量，在此基础上通过基因测序确认 HLA-B27基因亚型。采用SPSS17.0软件对数据进行分析，P ＜0.05被认为差异有统计学意义。结果120例疑似强直性脊柱炎患者中，确诊55例，其中 HLA-B27阳性53例（96.36％），BASDAI 评分与 HLA-B27基因表达量具有相关性（r ＝0.845，P ＝0.000）。基因亚型分别为 HLA-B27∶04型29例（54.72％），HLA-B27∶05型20例（37.74％），HLA-B27∶02型2例（3.77％），HLA-B27∶03型1例（1.89％），HLA-B27∶07型1例（1.89％）。50例健康对照组中筛查 HLA-B27阳性2例（4％），均为 B27∶04亚型。对 HLA-B27∶04和 HLA-B27∶05两种亚型患者年龄（t＝0.711，P ＝0.480）、性别（χ2＝0.880，P ＝0.348）、家族史（χ2＝0.011，P ＝0.916）和治疗史（χ2＝0.113，P ＝0.736）比较差异无统计学意义。结论 HLA-B27阳性 AS 患者以HLA-B27∶04和 HLA-B27∶05为主。HLA-B27基因表达量与其疾病活动指数相关。
关键词： 强直性脊柱炎 人类白细胞抗原-B27 基因 表达量 疾病活动指数 -
人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达
［董轲，郝晓柯，刘新平，张盈华，季少平. 细胞与分子免疫学杂志,2001;17(2):106-04］ 目的从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变. 方法从人正常肺组织中提取RNA，并进行逆转录得到人羧肽酶A(hCPA). 以计算机模拟hCPA的结构，寻找合适的突变位点. 用PCR重叠延伸法，对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达. 结果序列分析表明，所获hCPA的核苷酸序列为1251 bp，编码417个氨基酸. hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A，其余核苷酸序列均未发生变化，相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸. 将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3 h后,表达量高达30％左右. 结论成功地构建并表达了mhCPA基因，为hCPA在肿瘤的“抗体导向酶-前药疗法”(ADEPT)中的应用奠定了基础.
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人源性羧肽酶A突变体基因的构建及表达
目的 从人正常肺组织中提取羧肽酶A基因并进行定点突变. 方法 从人正常肺组织中提取RNA，并进行逆转录得到人羧肽酶A (hCPA). 以计算机模拟hCPA的结构，寻找合适的突变位点. 用PCR重叠延伸法，对羧肽酶A进行定点突变,并在大肠杆菌中表达. 结果 序列分析表明，所获hCPA的核苷酸序列为1251 bp，编码417个氨基酸. hCPA突变体(mhCPA)基因的1126位核苷酸由G变为A，其余核苷酸序列均未发生变化，相应的此突变体蛋白质的376位核苷酸残基由丙氨酸突变为苏氨酸. 将mhCPA基因在E.coli中诱导表达3 h后,表达量高达30%左右. 结论 成功地构建并表达了mhCPA基因，为hCPA在肿瘤的“ 抗体导向酶-前药疗法 ” (ADEPT)中的应用奠定了基础 .(潘伯荣)
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miR-128在乳腺癌血清中的表达量
目的：探讨miR-128在乳腺癌患者血清中表达量及其潜在的意义。方法采用实时荧光定量PCR技术检测miR-128在87例乳腺癌患者和25例正常人血清中的表达量。结果与正常对照组相比，miR-128在乳腺癌患者血清中显著低表达（=0.003），且miR-128的表达量与乳腺癌患者化疗敏感性相关。结论乳腺癌血清中miR-128表达下调，miR-128的表达与乳腺癌的化疗敏感性密切相关，miR-128可能是临床评价乳腺癌化疗敏感性的重要指标。
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工程菌种子制备方法对rEPA表达量影响的研究
由重组E.coli rPE553D所表达的基因缺失突变脱毒的重组铜绿假单胞菌外毒素A(rEPA),目前大量以载体蛋白用于多种细菌多糖蛋白结合疫苗研究.rEPA的表达量受众多因素的影响,种子的制备方式就是重要因素之一.本文用长期冷冻保存的和新鲜提取的质粒分别转化宿主菌E.coli BL21(λDE3)后制备种子,并将它们和冻干保存的E.coli rPE553D在相同条件下培养和诱导,经SDS-PAGE分析表明长期保存的质粒转化宿主后的重组工程菌生长速度较慢,但rEPA的表达量和新鲜质粒转化制备的工程菌基本相同,而冻干保存的工程菌E.coli rPE553D几乎丧失了表达rEPA的能力.
关键词： 重组铜绿假单胞菌外毒素A 种子制备 表达量 -
高原世居健康藏族和汉族人外周血线粒体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ复合物相关编码基因mRNA表达量比较
目的 比较高原世居健康藏族和汉族人外周血线粒体Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ复合物相关编码基因mRNA表达量,初步了解藏族人线粒体复合物编码基因mRNA的表达差异.方法 本研究采用实时定量PCR方法,检测青海玉树地区健康藏族男性和汉族男性外周静脉血线粒体复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ编码基因NDUFA1、SDHA、UQCRC1、COX6A2、ATP6V0D2mRNA表达量,并行比较研究.结果 发现复合体Ⅳ中的基因COX6A2和复合体Ⅴ中的ATP6V0D2基因的表达量之间存在差异,藏族人COX6A2和ATP6V0D2基因表达量均高于汉族人,而其他编码基因无差异.结论 藏族人线粒体复合物编码基因mRNA的表达差异主要集中在线粒体电子传递链的细胞色素氧化酶复合体Ⅳ的COX6A2和复合体Ⅴ的ATP6V0D两个基因.
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地塞米松预培养兔BMSCs促进腺病毒介导BMP2转基因的高效表达
目前,骨形态发生蛋白2(BMP2)的基因治疗在骨组织工程中正成为广泛研究的热点.国外新研究表明,以腺病毒为载体转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达BMP2的效率取决于细胞的分化状态,1 μmol/L地塞米松诱导培养人BMSCs后再进行腺病毒转染,其BMP2的表达量是单纯转染组的20倍[1]..
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4.百草枯中毒大鼠早期急性肝损伤
目的：观察百草枯中毒大鼠肝细胞的凋亡和炎症介质的表达及其机制。
方法：将40只wistar系大鼠编号并分成对照组（n=8）和实验组（n=32）。实验组大鼠腹腔内按30mg/kg注射浓度为20%的百草枯，对照组大鼠注射生理盐水。分别观察0.5、1、3、7天后，实验组有8只大鼠死亡。分别收集两组大鼠下腔静脉和肝脏组织中的血液。通过运用ELISA方法测定IL-1β和TNF-α水平。运用RT-PCR测定IL-1β、TNF-α、iNOS和p53的mRNA表达量。在干预第3天时，用发色底物法测定肝脏组织中caspase-3、caspase-8、caspase-9、caspase-12的表达含量。通过HE染色观察肝脏组织病理学改变。 -
人内皮细胞特异性因子-1与动脉粥样硬化
ESM-1即内皮细胞特异性分子-1，其在人类的肾内皮细胞中表达量少，更多的表达在人类的肺内皮细胞。一开始由人类从HUVEC（人脐静脉内皮细胞）cDNA文库中克隆处理[1]。ESM-1是一种硫酸皮肤素蛋白聚糖（DSPG），可溶于血液并在机体的多种调节功能中发挥作用。据之前的研究表明，ESM-1与冠心病动脉粥样硬化（AS）形成过程存在相关性。因此，加强对ESM-1的研究有助于进一步了解的AS形成。ESM-1的cDNA序列全长2006个碱基对，包含一个长度为552个核苷酸的开放阅读框，和1398个核苷酸的3’端非编码区，它的结构是由单一基因编码，由一条含有165个氨基酸的核心蛋白以及一条硫酸皮肤素（DS）单链位于137位的丝氨酸残基共价结合而成，能以可溶的形式释放入血液循环[2]。
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绿原酸对Aβ引起的小脑颗粒细胞损伤的保护作用
目的：探讨绿原酸对淀粉样β蛋白(amyloid beta-protein，Aβ)引起的小脑颗粒细胞损伤的保护作用。方法：体外培养小脑颗粒细胞和腹腔巨噬细胞，将经过10μmol/L Aβ预处理48h的巨噬细胞上清液移入神经细胞中，同时加200μmol/L的绿原酸。培养2天后，采用MTT法、western bolt和乳酸脱氢酶检测试剂盒检测细胞活性、微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein-2，MAP-2)表达水平和乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase，LDH)漏出量。结果：将Aβ预处理的巨噬细胞上清液移入到单独培养的小脑颗粒细胞48h后，可使小脑颗粒细胞活性明显降低，仅为正常的28.35%，加入绿原酸后，细胞活性明显增加达到正常的75.82%(P<0.01)。而在正常培养的神经细胞+Aβ组中，小脑颗粒细胞仅有少许死亡。在加入巨噬细胞上清液的小脑颗粒细胞组中，MAP-2表达量明显下降，仅为正常培养组的31.23%，加入绿原酸后，MAP-2的表达量则显著回升(P<0.01)，达到正常的79.77%。LDH漏出量明显增加，由402nkat/L增加到3046nkat/L，加入绿原酸后，可以使LDH漏出量明显下降，只有1285nkat/L。结论：①Aβ蛋白是通过激活巨噬细胞，使其释放毒性物质，从而引起神经细胞的损伤。②绿原酸对Aβ引起的神经细胞损伤具有保护作用。
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MAS基因在不同组织表达量的差异分析研究
肾素-血管紧张素是人体肿瘤微环境的重要组成部分.肾素血管-紧张素素系统(RAS)是人体非常重要的调节系统.RAS系统包含经典轴ACE-AngII-AT1R和替代经典轴的ACE2-Ang(1-7)-Mas.作为非经典替代轴受体的MAS基因,发挥了重要的拮抗经典轴的作用.在之前的研究中,我们对MAS基因在肝癌中的表达差异做了研究,发现其在肝癌组织和血清中的表达均高于健康对照组.有报道称,MAS基因在其它组织中也有异常表达.目的:分析MAS在不同组织中的表达情况,并分别与对应的癌旁组织对照,更加全面的了解MAS基因在人体不同组织的表达情况.方法:本文通过生物信息学手段分析MAS在人体不同部位的表达差异,数据来源GEO数据库.结果:结果显示MAS基因在心脏中的表达高,并且其在癌组织中的表达量均高于其对应的癌旁组织.结论:综上所述,提示我们MAS基因在人体中扮演着重要的角色,本文将为研究MAS基因的拮抗机制提供更好的思路.
