首页 > 文献资料
-
早期“找”出致聋基因
新闻背景:中国科学院6月4日披露,该院与解放军总医院耳鼻喉科研究所研究人员历时6年多,依据3个与中国人耳聋为密切的基因位点,研制出基因检测试剂盒,用此试剂盒对新生儿进行筛检,可将潜在的耳聋患儿找出来,进行早期干预和治疗.
-
HIV实验室检测研究进展和发展趋势
随着分子生物学技术的飞速发展,人类免疫缺陷病毒(HIV)的实验室检测技术也在不断更新.本文着重阐述了HIV血清学第四代检测试剂盒的特点,应用抗体亲和力技术估计发病率,荧光实时定量PCR技术的应用以及基因芯片技术的发展趋势.
-
快检设备精品推荐
拜发分析系统销售北京有限公司产品1:RIDASCREEN(R)葡萄球菌肠毒素检测试剂盒检测技术:酶联免疫技术检测对象:葡萄球菌肠毒素适用条件:孵育时间为2小时45分钟,符合国家标准.产品性能:适宜大批样品集中检测,具有快速、操作简便、无需贵重仪器设备,且对样品纯度要求不高等特性.
-
德国拜发酶法分析:葡萄酒和果汁行业的国际标准方法
酶法分析是检测食品饮料中糖、酸,醇及甘油.二氧化硫等成分的国际标准方法,不但可以获得与HPLC法同样的准确性和精密度,而且在某些方面要优于HPLC法,如检测设备成本低,操作简单.无需专业的技术人员,种类多(包括几十种不同检测试剂盒),无有毒性废物产生等.
-
北京良润生物科技有限公司PCR系列新品正式发布
11月2日,北京良润生物科技有限公司研发的MicroFast?实时荧光(RT)-PCR快速检测系统首次对外发布。该系统配备了16孔实时荧光便捷PCR检测仪及实时荧光(RT)-PCR检测试剂盒。
-
2-03 氯丙烯对神经细胞NO含量和NOS活性的影响
目的探讨氯丙烯对神经细胞NO生成系统的影响,进一步研究氯丙烯的中毒机制.方法用NO、NOS检测试剂盒(均由南京建成生物工程研究所提供)研究氯丙烯染毒后(剂量依次为0.30、0.61、1.23 mmol/L)的鸡胚脑神经细胞的NO含量、NOS活性,并与阴性对照组进行比较.结果随着氯丙烯浓度的增高,鸡胚脑神经细胞内NO含量明显增高,低、中、高3个剂量组依次为(4.63±0.37)、(4.65±0.19)、(5.95±0.223)μmo1/L.与对照组相比(3.17±0.89)μmol/L),均有显著增高(P<0.01);细胞培养液中无明显改变(P>0.05).细胞内,中、高剂量组NOS活性分别为(4.85±1.51)、(4.88±1.05)U.mg.protein-1,与对照组[(3.93±0.86)U.mg.protein-1]相比明显增高(P<0.05);细胞外仅高剂量组差异有显著性[高剂量组为(19.96±3.32)U/ml,阴性对照组为(16.22±2.32)U/ml,P<0.01].结论氯丙烯可引起神经细胞NO含量和NOS活性的增加,与我们以前报道的氯丙烯可引起细胞内Ca2+增高的结果相吻合.这可能由于细胞内Ca2+增高,激活cNOS,使其活性增强,导致NO生成增加.
-
可溶性人胎盘生长因子ELISA检测试剂盒的建立及性能分析
目的:研发人血清及尿液可溶性胎盘生长因子(sPLGF)的ELISA检测试剂盒并进行性能测试.方法:以抗人PLGF单克隆抗体包被微孔板,加入重组sPLGF和生物素标记的检测抗体,形成抗原抗体复合体,加入链亲合素辣根过氧化物酶和底物TMB实现比色反应;从线性范围、准确度、精密度、样品基质及样品前处理方法等指标进行性能评价,并与市售进口同类产品进行比较.结果:捕获抗体的适包被量为400ng/well,包被条件为4℃孵育16~20h,检测抗体的适工作浓度为1μg/ml,样品适反应条件为37℃孵育2h,适合的封闭液及样品稀释液组合为3%BSA-PBS和0.1%BSA-PBS;验证该试剂盒的有效检测范围为15.6~2000pg/ml,准确度为85%~115%;批次内变异系数CV≤10%,批次间变异系数CV≤15%;其检测范围、准确度、精密度、灵敏度及样品适用范围等与市售进口试剂盒基本一致.结论:本项目开发的人sPLGF检测试剂盒实现了人血清和尿液中的内源sPLGF的定量检测,其检测性能稳定、可靠,具有比进口试剂盒检测范围更广、价格更低的优势,可用于临床检测血液及尿液中的内源性sPLGF水平.
-
蓝谱食品安全检测试剂盒隆重上市
日前蓝谱公司推出两款食品安全检测试剂盒--沙门氏菌核酸检测试剂盒和军团菌核酸检测试剂盒。
-
蓝谱Loopamp?结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒
结核分枝杆菌复合群核酸检测试剂盒,是由盖茨基金会赞助,日本荣研与FIND基金会共同研制,WHO全球推荐的结核病诊断新方法。是适合于现场快速检测结核分枝杆菌复合群的重要分子诊断产品。该试剂盒产品将反应试剂干粉化处理,集中保存于反应管盖中,可在常温条件下保存与运输。配套PURE-LAMP前处理试剂,操作简便。检测结果通过仪器自带的荧光目视检测单元进行绿色荧光的判读。配套仪器包括PURE前处理模块,LAMP?反应扩增模块,荧光目视检测模块三部分,可在一小时之内完成检测。
-
冬虫夏草PCR快速检测试剂盒的研制与效果评价
冬虫夏草为我国传统名贵中药材.资源短缺、价格昂贵和巨大 的市场需求导致市售冬虫夏草掺伪掺假现象严重,亟需建立快速有效的鉴别方法.该研究基于实验 前期已建立的冬虫夏草快速鉴定SS-PCR方法,按照体外诊断试剂评价标准开发试剂盒,并对试剂 盒的特异性、检测限、重复性及保存期4项性能进行了评价.结果显示冬虫夏草质量占混合物质量 的1/200(质量分数0.5%以上)以上时可被成功检测.试剂盒对冬虫夏草及其伪品的检测结果 显示,仅有冬虫夏草可被成功扩增,并在紫外下显示绿色荧光.该试剂盒37 ℃温育7 d仍有效,说 明4 ℃保存其在1年内稳定有效.同一批次试剂盒在不同条件下,不同批次试剂盒在相同条件下,其检测结果均一致且准确,表明试剂盒具有良好的批内及批间重复性.将该试剂盒用于市售冬虫夏 草及其混伪品的检测,操作简单快速,结果准确可靠,为下一步中药快检试剂盒的商品化奠定了基 础.
关键词: 冬虫夏草 聚合酶链式反应(PCR) 检测试剂盒 -
对IMMULITE Ⅰ型化学发光酶免疫技术中检测原理及相关内容的初评
美国德普(DPC)公司开发成功的IMMULITE Ⅰ型酶放大化学发光自动化分析仪及其配套的各项检测试剂盒是在IMMULITE系统条件下发展完善的.它以聚苯乙烯塑料珠为固相载体, 碱性磷酸酶(APase)标记抗体(或抗原),并作用于发光底物AMPPD[3-(2'-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″磷酰氧基)苯基-1,2二氧乙烷].该仪器可完成单项、联合多项, 甚至十几项的常规项目物质浓度测定.每项检测原理及其反应模式不同.根据待测抗原的性质, 分子量大小, 各项试剂盒性能要求, 具体为每项检测内容设计了更为合理完美,结果准确的检测原理及其反应模式.信号数据处理也由自动化分析仪上电脑预先编制的软件完成, 备有多种标准曲线拟合方程, 以供不同免疫反应模式选择, 满足每项检测项目.本文在实践中了解和观察到32项常规项目的检测原理及相关内容, 用表格形式分析与初评如下.
-
基于CLSI标准的国产生殖道支原体检测试剂盒性能评估
目的 评估以CLSI M43-A支原体药敏指南为基础研发的国产支原体鉴定计数药敏试剂盒性能.方法 以微量肉汤稀释法测试解脲支原体(ATCC33175)和人型支原体(ATCC23114)对抗生素的MICs,并与MYCOFAST revolutioN和国产IST-Ⅲ测定的敏感性进行比较,同时以A8平板培养为金标准检测120例性病门诊患者标本,评估国产试剂盒的检测性能.结果 质控菌株的MICs均在指南规定的范围内,2种试剂测定的质控菌株敏感性一致并与MICs符合,国产试剂灵敏度和特异性分别为96.49%(55/57)和92.06%(58/63),进口试剂的灵敏度和特异性分别为96.49%(53/57)和92.06%(56/63),2种试剂之间及与金标准之间差异无统计学意义(P>0.05),而鉴定结果一致标本的药敏符合率为94.81%(251/265).结论 国产支原体试剂与进口试剂性能相当,结果可靠,符合CLSI规范要求,能够满足临床对支原体检测的需要.
-
pH9.0不同成分的抗原修复液对免疫组织化学染色结果的影响
抗原修复技术自Shi等[1]首次应用以来,现已常规应用于日常病理诊断或科研免疫组织化学中.由于种种原因,全自动封闭的免疫组织化学染色仪在国内外尚未普及.进行免疫组织化学检测时,许多实验室仍需人工进行组织前处理(包括脱蜡、抗原修复等).不同的实验室所采用的抗原修复方法及抗原修复液不尽相同,导致相同的抗体在不同的实验室检测效果存在明显的差异.我们用Dako EnVisionTM检测试剂盒测试抗体时发现,pH 9.0几种不同配方的抗原修复液对某些抗体表达效果存在差异,现就此情况作一介绍.
-
迈新公司Glypican 3检测试剂盒获准上市
由中国工程院院士王红阳教授领衔的第二军医大学东方肝胆外科医院生物信号转导研究室的课题组与福州迈新生物技术开发有限公司(迈新公司)联合申报的Glypican 3(简称GPC3)检测试剂盒(免疫组织化学法)获得国家食品药品监督管理总局( CFDA )颁发的三类医疗器械注册证。此试剂盒主要应用于肝癌的病理诊断,尤其是肝肿瘤疑难病例的良恶性的鉴别诊断,为临床医师开展对恶性肿瘤患者的及时治疗和避免对良性患者的过度治疗具有重要的指导意义。
-
迈新公司Glypican 3检测试剂盒获准上市
由中国工程院院士王红阳教授领衔的第二军医大学东方肝胆外科医院生物信号转导研究室的课题组与福州迈新生物技术开发有限公司(迈新公司)联合申报的Glypican 3(简称GPC3)检测试剂盒(免疫组织化学法)获得国家食品药品监督管理总局( CFDA )颁发的三类医疗器械注册证。此试剂盒主要应用于肝癌的病理诊断,尤其是肝肿瘤疑难病例的良恶性的鉴别诊断,为临床医师开展对恶性肿瘤患者的及时治疗和避免对良性患者的过度治疗具有重要的指导意义。
-
TNF-α、IL-6基因多态性在HCV相关肝病中的分布特征
本研究对中国汉族人TNF-α、IL-6血清水平及其基因单核苷酸多态性(SNP)与HCV相关肝病的关系进行了探讨.以ELISA测定250例HCV肝病患者和182例健康对照者TNF-a、L-6血清水平,用上海百傲科技有限公司基因多态性芯片检测试剂盒和芯片识读仪检测TNF-α( -238,-308)G/A及IL-6(- 174,-572)G/C,-597C/A位点SNP,操作包括DNA抽提、PCR扩增、杂交、显色及基因芯片识读仪自动输出检测结果等步骤,同时以PCR-RFLP分析随机抽取的部分标本证实芯片分型结果;247例HCV采用基因直接测序法分型.病例按病情进展分为慢性肝炎组及肝纤维化合并肝癌组;按HCV基因型分为1b、2a组.
-
肺癌患者辅助性T淋巴细胞亚群的变化
为探讨人类辅助性T淋巴细胞(Th)亚群在肺癌患者中的变化规律,我们应用抗干扰素(IFN)-γ单抗及抗IL-4单抗通过免疫细胞化学方法[1],对肺癌患者大剂量rhIL-2治疗前后的Th亚群及外周血单个核细胞(PBMC)上清液中IFN-γ及IL-4含量进行了测定。 一、 材料及方法 1. 试剂:IFN-γ和IL-4单抗、依诺霉素(ionomycin)、十四烷酰佛醇乙酯(PMA)、莫能菌素(monensin)、皂素(saponin)均由北京中日友好医院临床医学研究所提供。免疫组化检测试剂盒(抗小鼠一碱性磷酸酶-FAST RED)购自深圳晶美生物工程有限公司。RPMI1640(Gibco产品)。16孔培养板(Nuclon产品)。IFN-γ及IL-4采用ELISA定量检测法(加拿大YES生物技术研究有限公司产品)。 2. 研究对象:健康对照组18例均来自我院无偿献血查体者,各项指标符合健康标准。其中男性7名、女性11名。12例肺癌患者均经病理学或细胞学证实(其中腺癌2例、鳞状细胞癌10例)。男性9例,女性3例。有5例晚期肺癌患者进行了大剂量每日rhIL-2 106U输注治疗4周为1疗程[2]。
-
定量聚合酶链反应技术及在临床实验室应用的价值
随着分子生物学技术的发展,聚合酶链反应(PCR)技术已逐渐应用于遗传性疾病、肿瘤及感染性疾病等方面的诊断,如检测临床标本中病原体核酸序列、肿瘤基因突变情况、遗传性疾病的基因序列、人类白细胞表面抗原(HLA)配型、法医学方面的鉴定工作等。目前基因芯片的问世,将分子生物学技术又推向一个新的高潮。现就临床实验室开展PCR技术及PCR技术检测病原微生物及肿瘤基因的临床意义和定量PCR技术,谈谈我们的看法。 1.目前国内临床实验室应用PCR技术存在的问题:在设施方面,如仪器显示的温度与孔内的温度不一致,有孔内差;自动化程度较低,人工操作人为误差较大;实验室布局不合理,不能满足3个分开的房间进行分阶段操作(第1间实验室为混合试剂和质控,第2间实验室为标本提取和试剂混合,第3间实验室为PCR扩增及产物检测,工作人员应从第1间依次到第3间实验室,不能返回工作。室内空气流向依次从第1间到第3间实验室,不能逆流,以防止空气污染);加样器及试剂等容易污染导致假阳性。另外,标本采集及保存不合适和操作不当易出现假阴性。例如检测痰中结核杆菌,标本采集一定是痰而不是唾液。血清中检测HCV-RNA标本保存不当,使病原体被破坏.操作者不戴手套或说话唾液溅入标本,RNA降解,失去PCR的模板,造成假阴性结果。合理设计寡核苷酸序列,好在保守区,特异性强,无干扰。 琼脂糖凝胶电泳鉴别PCR产物的影响因素较多。如模板量大则拖尾现象严重,非特异性干扰带多。结果难于清楚判断。标本中有抑制物(Hb,高浓度尿素)均可出现假阴性。 目前美国病理学会(CAP)等组织以及临床实验室改进修正案(CLIA 1988)要求正规检测方法是先行PCR扩增,然后进行杂交来判断结果。但美国一些实验室,如印第安纳大学医学中心的病理和医学实验室用PCR方法检测临床标本中乙肝病毒(HBV)、EB病毒(EBV)、人巨细胞病毒(CMV)的DNA。他们认为在他们的实验室里,用琼脂糖凝胶电泳和电泳后再杂交的两种判断结果是一致的。因为他们实验室条件非常严格,而且每年都要通过美国CAP检查。但仍有些检测项目未得到美国FDA的批准。 2 .PCR技术检测的临床意义:我们认为对灵敏度和特异性基本上达到临床需要的检测技术,不必一律采用PCR技术。目前没有其他诊断技术可以检测的疾病,如基因缺失、易位、突变及病原体需要较长时间培养或培养难度较大的疾病应考虑用PCR方法。如人类免疫缺陷病毒(HIV)是一种慢性病毒,在细胞内的繁殖水平比较低,感染后潜伏期较长,病毒难以培养而且需要较长时间培养。在对HIV抗原(HIV-Ag)和抗体(HIV-Ab)的检测结果难以判断时,可用PCR技术作为确认手段。当前临床标本一般仅检测HIV-Ab。在美国,血液制品既检测HIV-Ab也检测HIV-P24Ag 。国外有学者报道,感染HIV的患者血清HIV-P24Ag出现早于HIV-Ab10天左右。发现HIV-P24Ag(+)者,HIV PCR(+)。但HIV PCR(+)者,HIV- P24Ag可呈现(-),此时患者已具有传染性。PCR技术可用于艾滋病的早期诊断,定量PCR技术还是艾滋病疗效观察的有效检测手段。 用PCR和杂交方法对HCV基因分型、早期诊断和治疗监测均具有较大的临床意义,这已被国内外医学界的工作者公认。 结核分枝杆菌(MTB)培养时间一般要30~50天,培养出来的分枝杆菌还要鉴定是人型还是鸟型。涂片检查所需的抗酸杆菌也要一定的浓度。因此可以采用PCR方法检测。但PCR技术不能完全取代结核杆菌培养。PCR在药敏结果判断方面亦不理想。 当前有检测沙眼衣原体抗原的试剂盒,特异性高,但敏感性不甚满意。衣原体需在细胞中培养后进行鉴定,对临床常规检验工作有一定的难度。应用PCR技术检测沙眼衣原体有一定的临床意义。 美国FDA已批准HIV、MTB、沙眼衣原体的PCR或杂交检测试剂盒。也批准了HPV的过筛检测,对于HPV各型的检测,目前尚未批准。MTB的靶序列是16 s DNA的584bp。其后带用杂交检测。沙眼衣原体的检测试剂盒于1993年通过FDA批准,目前用特殊探针进行杂交后用免疫化学法检测。
-
不同来源抗体在HBsAg中和确认试验中的应用
在HBV感染检测中HBsAg是重要的血清学标志物之一.同时血清中检出HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一.国外检测HBsAg试剂盒均提出,测定结果有反应性的标本应做中和试验,排除可能的假阳性结果.《全国临床检验操作规程》建议必要时,应采用中和试验进行确认[1].通过以往研究,我们在原有HBsAg检测试剂盒的基础上,加入中和抗体试剂,建立了HBsAg中和确认试验方法[2].为了进一步扩大其应用范围,现对3种不同来源中和抗体进行对比研究,探讨中和抗体在HBsAg中和确认试验中的应用价值.
-
乙型肝炎病毒S基因系列单突变克隆人工构建
目的:研究乙型肝炎病毒(HBV)S基因高频突变位点(T126S,M133L,T144A)变异对HBV生物学活性的影响,开发新的检测HBsAg试剂盒,混合HBV多价疫苗及多效价的乙型肝炎免疫球蛋白(HBIG).方法:利用人工定点突变技术,基因重组,建立系列HBVS基因‘a'决定簇真核细胞表达的质粒.结果:测序和计算机软件分析,克隆的质粒基因突变序列完全正确,并且能在真核细胞中表达,被HBsAg单克隆抗体识别.结论:所构建的乙型肝炎病毒S基因单突变克隆能够在真核细胞表达蛋白,所表达的蛋白可以正确折叠,维持天然二级构象,具有良好的抗原性,为开发新的检测试剂盒,HBV疫苗及高效价的乙型肝炎免疫球蛋白奠定物质基础.