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支气管哮喘患者体重与糖皮质激素反应性的关系
背景和目的:肥胖可能会影响支气管哮喘(简称哮喘)对糖皮质激素(简称激素)治疗的反应性.本研究评价哮喘患者和非哮喘个体的体重指数与糖皮质激素反应性的关系.方法:评价非吸烟成人的肺功能、体重指数以及泼尼松治疗前后FEV<,1>的变化.通过PCR法检测外周血单个核细胞(PBMC)和BALF的细胞中地塞米松诱导的丝裂原活化蛋白激酶磷酸化酶(MKP-1)表达和基线肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.对体重指数与MKP-1和TNF-a表达之间的关系进行分析.
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改构酸性成纤维细胞生长因子对小鼠胸腺细胞凋亡的影响
目的:探讨改构酸性成纤维细胞生长因子(MaFGF)对地塞米松(DEX)诱导小鼠胸腺细胞凋亡的保护作用.方法:利用地塞米松诱导小鼠胸腺细胞凋亡的模型,将实验分为空白对照组、DEX处理组、aFGF+DEX组和MaFGF+DEX组,采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞仪两种分析方法,测定MaFGF对小鼠胸腺细胞凋亡的影响.结果:空白对照组凋亡率为1.68%,DEX处理后小鼠胸腺细胞出现明显的细胞凋亡,凋亡率为19.6%,aFGF和MaFGF处理后的细胞凋亡受到抑制,凋亡率分别下降到15.95%和12.93%,MaFGF效应强于aFGF,且以剂量依赖方式发挥作用.结论:MaFGF具有以剂量依赖方式的胸腺细胞保护作用.
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骨髓基质细胞定向成脂分化的实验研究
目的为了研究髓内脂肪细胞的作用,并为相关实验提供脂肪细胞来源,并观察地塞米松诱导骨髓基质细胞向脂肪细胞分化的作用.方法采用原代骨髓基质细胞体外培养技术,取大鼠双侧股骨骨髓细胞,用Ficoll-Paque淋巴细胞分离液离心分离,获取骨髓基质细胞.以地塞米松作为脂肪细胞分化诱导剂处理骨髓基质细胞,油红O染色,光镜下脂肪细胞计数.结果以递增浓度(0,1×10-8,1×10-7,1×10-6,1×10-5mol/L)地塞米松处理骨髓基质细胞,并培养21天,1×10-5mol/L组中诱导分化生成的脂肪细胞达到90%以上,对照组中脂肪细胞几乎为0.各组脂肪细胞比例随地塞米松浓度增大而增多,具有一定的浓度依赖性.结论在高浓度的地塞米松诱导下,骨髓基质细胞可分化为脂肪细胞,这可能是激素性骨质疏松的发病原因之一.
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人FL-FEN-1基因功能的初步研究
目的:FEN-1是一种结构特异性核酸酶,它识别特定的核酸分叉结构,并切除含有游离5'末端的单链核酸.FEN-1具有对DNA复制和修复都必需的双重功能.对酵母和体外实验的研究表明,在DNA复制过程中,FEN-1去除了冈崎片段前端RNA引物的后一个核糖核苷;在DNA修复中,FEN-1参与了损伤碱基的修复过程.方法和结果:采用反义核酸技术,从人FEN-1表达质粒hPET-FCH经双酶切得到1084 bp的hFEN-1片段,反向克隆入采用经改建的哺乳动物表达载体pMAMneoAmp ,并得到hFEN-1反义表达质粒pMAMneoAmp FNB .采用改进的磷酸钙介导的细胞转染法,将pMAMneoAmp FNB 和pMAMneoAmp 质粒分别导入FL细胞,用含400 μg/mL G418的MEM完全培养基筛选,分别得到FL-FEN 和FL-M细胞.细胞生长曲线的测定发现,FL-FEN-1 在地塞米松的诱导下,细胞生长速度明显下降,细胞倍增时间TD为3.03 d,而FL和仅含有空载体的FL-M细胞在地塞米松存在下的细胞倍增时间TD分别为2.03 d和2.22 d,不经地塞米松诱导的FL-FEN-1 细胞的TD为2.38 d.采用流式细胞仪对细胞周期的研究表明,在地塞米松诱导下,用不含精氨酸的MEM培养48 h同步化处理后,FL-FEN-1 细胞的S期百分比为9.95%,而FL和FL-M细胞分别为26.31%和23.07%.采用DEAE介导的细胞转染法将穿梭质粒pZ189分别转染经地塞米松诱导的FL、FL-M和FL-FEN-1 细胞,以Hirt's法提取质粒并转化大肠杆菌MBM7070,得到的自发突变率依次为3.91/104、7.79/104和14.4/104.结论:在哺乳动物细胞中FEN-1基因在DNA复制和细胞繁殖的过程中起着重要作用,并且可能参与维持细胞DNA遗传稳定性的过程.
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NADPH氧化酶介导地塞米松诱导的胰岛β细胞凋亡
目的:观察地塞米松( dexamethasone,Dex)对胰岛β细胞凋亡的影响及NADPH氧化酶( Nox)表达水平的变化。方法:将大鼠胰岛β细胞系INS-1细胞分为正常对照组及不同浓度的地塞米松处理组。培养48 h后MTT法检测细胞增殖情况;An-nexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况;real-time PCR检测Nox1、Nox3、Nox4和p47phox mRNA表达水平;荧光法检测ROS释放量;Western blot检测Nox4蛋白表达水平。结果:地塞米松诱导INS-1细胞凋亡具有明显的剂量依赖性,随Dex浓度增加,凋亡细胞数明显增多,并且在此过程中NADPH氧化酶Nox1、Nox3、Nox4和p47phox mRNA表达上调,Nox4蛋白表达水平随Dex浓度增加而升高,0.1μmol/L Dex处理细胞24h即可见ROS释放量明显增加,差异均具有统计学意义。结论:地塞米松诱导INS-1细胞凋亡可能与上调Nox1、Nox3、Nox4和p47phox表达,增加ROS生成,促进氧化应激反应有关。
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地塞米松诱导小鼠胸腺细胞体内凋亡的Feulgen反应组织化学研究
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地塞米松预培养兔BMSCs促进腺病毒介导BMP2转基因的高效表达
目前,骨形态发生蛋白2(BMP2)的基因治疗在骨组织工程中正成为广泛研究的热点.国外新研究表明,以腺病毒为载体转染骨髓间充质干细胞(BMSCs)表达BMP2的效率取决于细胞的分化状态,1 μmol/L地塞米松诱导培养人BMSCs后再进行腺病毒转染,其BMP2的表达量是单纯转染组的20倍[1]..