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小剂量米非司酮对分泌中期人子宫内膜HOXA11基因表达的影响
通过口服米非司酮(RU486)改变子宫内膜的发育进程，观察内膜HOXA11基因表达量的变化，以及与孕酮受体(PR)和白血病抑制因子(LIF)表达的相互关系。13例月经周期正常志愿者观察两个周期。于对照周期的分泌中期取内膜。实验周期排卵前或后一次性口服RU486 10 mg，分泌中期取内膜，用原位杂交和免疫组织化学方法检测HOXA11、PR及LIF的表达。结果：对照周期内膜腺上皮HOXA11和PR呈阴性或弱阳性表达。服药后，腺上皮HOXA11和PR表达强度大多增加，而LIF的表达强度大多下降；基质细胞的表达量变化无明显规律。提示HOXA11基因的表达与孕激素及其受体密切相关；分泌中期腺上皮HOXA11和PR表达下降或消失是内膜分化成熟的重要标志；也是LIF分泌达高峰的前提。
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HOXA11在人子宫内膜和早孕蜕膜中的表达及与不育的关系
目的 检测HOXA11蛋白在正常月经周期子宫内膜、早孕蜕膜和不明原因不育子宫内膜组织中的表达,探讨HOXA11与不明原因不育及雌孕激素受体(ER、PR)表达的相关性. 方法 采用免疫组织化学和Western-Blot方法对38例正常子宫内膜、15例早孕蜕膜和19例不明原因不育子宫内膜组织中HOXA11、ER及PR的表达. 结果 HOXA11蛋白在子宫内膜腺上皮和基质细胞均有表达,以分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜表达量较高;在不育内膜的表达量显著降低(P＜0.05);ER、PR在各组表达量的变化与HOXA11相同,即分泌中晚期子宫内膜和早孕蜕膜的表达量较高,而在不育内膜的表达量显著下降(P＜0.05). 结论 HOXA11基因在着床期子宫内膜的分化、发育以及着床后妊娠的维持起一定作用;HOXA11表达量下降与ER、PR表达量降低相关;HOXA11表达下降或缺失可能是女性不明原因不育的原因之一.
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HOXA11基因在生殖过程中的作用
同源框基因是一类控制胚胎发育和细胞分化的调节基因.其家族成员之一HOXA11参与雌性生殖系统的发育,构建正常形态的子宫内膜,影响子宫内膜容受性,并与雄性不育相关.
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HOXA11在子宫内膜单纯性增生和内膜癌中表达增加
目的 探讨HOXA11基因在子宫内膜单纯性增生和子宫内膜癌中表达的意义,以及与雌激素受体(estrogen receptor,ER)、孕激素受体(progestogene receptor,PR)表达的关系.方法 用免疫组化法检测增生期子宫内膜、子宫内膜单纯性增生及子宫内膜癌组织中HOXA11、ER及PR蛋白的表达.结果 在子宫内膜单纯性增生和内膜样腺癌中,HOXA11的表达明显高于增生期子宫内膜(P＜0.05),而ER、PR的表达明显低于增生期内膜(P＜0.05).结论 HOXA11的过度表达可能参与了子宫内膜异常增生或癌变的过程;这种效应可能与ER、PR表达下降相关.
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HOXA11在根治性宫颈切除术患者术后子宫内膜中的表达
目的:探讨根治性宫颈切除术(radical trachelectomy,RT)患者术后同源盒基因A11(HOXA 11)的表达对子宫内膜容受性的影响.方法:应用实时聚合酶链反应(real-time PCR)检测RT术后不孕症患者(n=16)与正常生育能力女性(n=16)分泌期子宫内膜组织中HOXA 11基因的mRNA表达水平,并应用蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测2组患者分泌期子宫内膜组织中HOXA11、整合素β3(Integrin-β3)以及β-catenin、Dickkopf-1(DKK1)蛋白的表达水平.结果HOXA11基因在RT组和对照组的分泌期子宫内膜中均有表达,但RT组低于对照组,差异有统计学意义(P＜ 0.05);HOXA11、Integrin-β3以及β-catenin、DKK1蛋白在RT组的表达也低于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).且HOXA11与Intergin-β3蛋白、β-catenin蛋白及DKK1蛋白的表达强度均呈显著正相关(盼别为0.006、0.004和0.007).结论:在RT术后不孕可能由于宫颈组织的缺失从而影响宫腔内HOXA 11基因的正常表达,并相应调节Integrin-β3及Wnt/β-catenin通路的表达,从而干扰子宫内膜容受性的形成,导致胚胎着床失败而不孕.
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大鼠颌骨与胫骨骨髓基质细胞间接共培养后生物学差异的比较
目的 SD大鼠颌骨骨髓基质细胞(M-BMSCs)与胫骨骨髓基质细胞(T-BMSCs)体外间接共培养后,检测两者生物学特性和相关基因表达的变化.方法 应用全骨髓贴壁法,分离和培养M-BMSCs和T-BMSCs.取第三代细胞用Transwell小室间接共培养后,做以下检测.①MTT检测细胞增殖能力差异;②ALP活性、ALP染色、免疫荧光染色检测细胞成骨活性的差异;③荧光定量PCR检测Wnt1、Wnt5a、Hoxa1 1、Runx2、Ocn、Col I的表达差异和成骨诱导后的表达变化.结果 ①全骨髓贴壁法能分离和培养M-BMSCs和T-BMSCs;②间接共培养后,M-BMSCs和T-BMSCs增殖活力减弱;③共培养条件提高了T-BMSCs和抑制M-BMSCs早期表达ALP的能力;④间接共培养后,M-BMSCs和T-BMSCs中Wnt1、Wnt5a、Hoxa 11、Runx2、Ocn、Col I基因表达出现变化.结论 M-BMSCs和T-BMSCs间接共培养后,两者的生物学特点的改变和相关基因表达改变.
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HOXA11与多囊卵巢综合征的相关性研究
目的:探讨HOXA11基因在卵巢颗粒细胞内的异常表达与PCOS的相关性.方法:采用免疫荧光法、RT-PCR法、Western - blot法检测颗粒细胞中HOXA11的表达水平.结果:①在PCOS组中,镜下细胞内见明显的红色荧光主要定位于细胞核,细胞液中可见少许微弱红色荧光；对照组中,细胞核和细胞液中可见更强的红色荧光.PCOS组与对照组比较,细胞核和细胞液中HOXA11的表达都明显减少(P＜0.05).②PCOS组HOXA11 mRNA的表达水平较对照组低(P＜0.05).③Westernblot结果显示,PCOS组与对照组的颗粒细胞中均有HOXA11蛋白表达.PCOS组表达较弱,对照组表达较强(P＜0.05).免疫荧光、RT - PCR、Western - blot均提示PCOS组颗粒细胞中HOXA11表达水平较对照组低(P＜0.05).结论:HOXA11在PCOS组的颗粒细胞中表达降低,提示其可能在PCOS发生发展过程中起着重要作用.
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大鼠颌骨与胫骨骨髓基质细胞生物学特性和基因表达差异的比较
目的：比较大鼠颌骨来源骨髓基质细胞（M-BMSCs）与胫骨来源骨髓基质细胞（T-BMSCs）生物学特性的差异。方法：体外通过全骨髓贴壁法，分离和培养SD大鼠M-BMSCs和T-BMSCs，取第3代细胞用于：①流式细胞检测鉴定表面标志；②MTT、细胞周期、克隆形成率检测细胞增殖能力差异；③成骨、成脂诱导及染色检测细胞多项分化潜能；④碱性磷酸酶（ALP）活性、染色、免疫荧光染色检测细胞成骨活性的差异；⑤荧光定量PCR检测Wnt1、Wnt5a、Hox-a11、Runx2、Ocn、Col I 的表达差异和成骨诱导后各基因的表达变化。结果：① M-BMSCs 和 T-BMSCs 阳性表达CD29、CD44，阴性表达CD45；②MTT、细胞周期检测、克隆形成率显示T-BMSCs细胞增殖能力较高；③M-BMSCs在成骨诱导后矿化能力更强；而T-BMSCs成脂诱导形成脂滴的能力更强；④M-BMSCs表达ALP 的水平更高；⑤荧光定量PCR 示2种细胞的Wnt1、Wnt5a、Hoxa11、Runx2、Ocn、Col I 表达存在差异。结论：体外培养的 M-BMSCs和T-BMSCs有着不同的生物学特点，其相关基因Wnt1、Wnt5a、Hoxa11、Runx2、Ocn、Col I的表达上存在差异。
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剖宫产术对子宫内膜组织中HOXA11表达的影响
目的:检测同源框基因HOXA11在正常和瘢痕子宫内膜组织中的表达,并比较正常妊娠、瘢痕子宫的正常部位妊娠和剖宫产瘢痕妊娠(CSP)的早孕蜕膜组织中的HOXA11蛋白表达,探讨剖宫产手术对子宫内膜容受性的影响.方法:采用免疫组化法检测正常妇女(30例)和有剖宫产手术史妇女(30例)的子宫内膜组织中的HOXA11蛋白表达；同时检测正常妊娠(30例)、有剖宫产手术史者的正常部位妊娠(30例)及CSP(30例)的早孕蜕膜组织中的HOXA11蛋白表达.结果:(1)正常子宫内膜分泌期的HOXA11表达显著高于增生期.(2)有剖宫产手术史者的增生期和分泌期子宫内膜中的HOXA11表达与正常子宫内膜无显著差异.(3) HOXA11在早孕蜕膜中亦有表达,且有剖宫产手术史者的正常部位妊娠和CSP的早孕蜕膜组织中的表达均显著高于正常妊娠(P＜0.05),前两者无显著差异(P＞0.05).结论:HOXA11在受精卵着床期子宫内膜的分化、发育及着床后妊娠维持中起着一定的作用.剖宫产手术可能影响受精卵着床“植入窗期”[1]的子宫内膜容受性,这可能是CSP的发病原因之一.
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补肾养血方药对气态甲醛慢性染毒小鼠子宫内膜容受性的影响
目的:探讨补肾养血方药对气态甲醛慢性染毒小鼠子宫内膜容受性的影响.方法:将30只性成熟SPF级雌性昆明种小鼠随机分为空白对照组、染毒组和中药治疗组,每组10只,空白对照组给予吸入经过滤的新鲜空气,染毒组和中药治疗组给予1.0mg/m3浓度气态甲醛动态吸入式染毒,6h/d,同时中药治疗组每日予补肾养血中药灌胃,空白对照组和染毒组予等量生理盐水灌胃,连续14d;将小鼠雌雄(2∶1)合笼处理,于孕5d处死小鼠,取出子宫,计算子宫脏器系数,观察胚胎着床情况;用RT-PCR和Real-time PCR法检测各组小鼠子宫Hoxa 10、Hoxa11 mRNA的表达.结果:染毒组小鼠子宫脏器系数、子宫Hoxa 10、Hoxa11 mRNA表达均低于空白对照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),胚胎着床数低于空白对照组,但差异无统计学意义(P＞0.05).中药治疗组小鼠子宫Hoxa10、Hoxa11 mRNA表达高于染毒组,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论:补肾养血方药能使气态甲醛慢性染毒小鼠子宫Hoxa10、Hoxa11 mRNA表达升高,从而改善子宫内膜容受性.
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利用酵母双杂交技术筛选与转录因子HOXA11相互作用蛋白
目的:利用酵母双杂交技术从均一化的人肾透明细胞腺癌cDNA文库中筛选与转录因子HOXA 11相互作用的蛋白.方法:培养人肾透明细胞腺癌细胞,提取RNA,采用SMART技术制备均一化的人肾透明细胞腺癌cDNA文库.同时,聚合酶链反应扩增人HOXA11基因片段(1-846 bp),将此基因片段重组入pGBKT7载体,构建诱饵质粒pGBKT7-HOXA11,经酶切和测序验证质粒构建正确.将诱饵质粒转化酵母菌AH109,检测其有无毒性与自激活作用.随后,利用酵母双杂交系统从cDNA文库中筛选与HOXA 11相互作用的蛋白.对筛选到的阳性克隆进行回转验证以及测序分析.结果:成功构建了人肾透明细胞腺癌cDNA文库和pGBKT7-HOXA 11诱饵质粒.在AH109酵母细胞中,该质粒无毒性、无自激活作用.酵母双杂交筛选获得了5个与HOXA 11相互作用阳性克隆.结论:获得人肾透明细胞腺癌细胞中与HOXA 11相互作用蛋白,为进一步研究HOXA 11在个体发育以及癌症发生发展中的作用机制奠定了基础.
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HOXA9、HOXA11、LIF在输卵管中的表达及与输卵管妊娠的关系
目的:探讨同源框基因HOXA9、HOXA11以及白血病抑制因子(1eukemia inhibitory factor,LIF)在榆卵管异位着床中的作用.方法:用免疫组织化学染色方法分别检测36例异位妊娠榆卵管和34例正常输卵管HOXA9、HOXA11和LIF蛋白的表达.结果:①HOXA9、HOXA11强阳性(+++)表达率在异位妊娠输卵管中高,且输卵管着床部位和非着床部位表达率无明显差异;增生期输卵管HOXA9、HOXA11强阳性表达率明显较低,在分泌期输卵管中表达率为0.②LIF强阳性表达仅见于妊娠输卵管,着床部位的表达率高于非着床部位:增生期和分泌期输卵管呈中低水平表达.结论:HOXA9、HOXA11及LIF蛋白表达增加与输卵管妊娠相关.
关键词： 异位妊娠 HOXA9 HOXA11 白血病抑制因子(LIF) 输卵管 -
HOXA10、HOXA11基因与子宫内膜异位症性不孕的研究进展
子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)是不孕症的常见病因,HOXA 10、HOXA 11这2种基因的正常表达与子宫内膜分泌中、晚期容受性的形成关系密切,而这2种基因在EMS患者的子宫内膜中与正常人相比表达下降,故EMS不孕的主要机制可能为低表达的HOXA 10、HOXA 11这2种基因,使子宫内膜的蜕膜化异常、容受性下降.此外,近期研究指出,导致EMS患者HOXA 10、HOXA 11基因表达下降的主要因素可能是基因异常甲基化.
关键词： HOXA10 HOXA11 子宫内膜异位症(EMs) 不孕症 -
HOXA10和HOXA11基因在子宫内膜异位不孕症患者分泌期子宫内膜组织的表达及意义
目的:探讨HOXA10和HOXA11基因对子宫内膜异位(endometriosis,EMs)不孕症患者内膜组织容受性的影响.方法:应用荧光定量RT-PCR和蛋白印迹法分别检测EMs不孕症患者(n=23,EMs组)和具有正常生育能力女性(n=20,对照组)分泌期子宫内膜组织中HOXA10和HOXA11mRNA及蛋白的表达水平.结果:HOXA10和HOXA11基因在EMs组和对照组分泌期子宫内膜中均有表达.EMs组HOXA10和HOXA11 mRNA和蛋白的表达显著低于对照组(P＜0.05).结论:EMs不孕症组子宫内膜组织中HOXA10和HOXA 11基因的表达水平显著下调,提示EMs可能通过影响子宫内膜组织中HOXA10和HOXA11基因的正常表达而干扰子宫内膜容受性的形成,从而导致胚胎着床失败和不孕.
关键词： 子宫内膜异位症(EMs) 不孕症 HOXA10 HOXA11 子宫内膜
