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影响凯氏定氮法测定含量准确性应注意的细节问题
蛋白质是人体生命活动和生存所需的重要有机化合物，随着现代人对食品的营养需求、安全程度的不断提高，对蛋白质食品的含量评判至关重要，这就离不开必要的检测手段，目前常用的方法(GB5009.5-2010)有凯氏定氮法、分光光度法、燃烧法等，但对一般实验室，且易于实施的仍然是第一法——凯氏定氮法。该方法优点是：易于实现、简单可行，且测试准确度较高，但是该方法存在着检测过程较繁琐、费时、关键点控制不准等缺陷，所以，测定时除严格按照标准程序操作外，还需要一定的实验技巧和实践经验。不少实验室在实际操作过程中出现各种问题，导致检测结果异常而不知如何去分析。本文就影响凯氏定氮的因素及细节问题和大家共同探讨。
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酱油中铵盐的自动凯氏定氮仪测定法
酱油是日常生活烹调中不可缺少的调味品,一般由小麦、黄豆、麦麸、食盐、水为原料酿造而成,这些原料中的糖经过曲菌的作用生成少量的酸,蛋白质被分解为各种氨基酸.
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水杨酸比色法测定蛋白质
蛋白质检测分为两大类:一类是利用蛋白质的共性,即含氮量,检测氮量后再计算出蛋白质的含量;另一类是利用蛋白质中有氨基酸残基、酸、碱性基团和芳香基团测定蛋白质含量.食品中蛋白质往往只限于检测总氮量,乘以蛋白质换算系数即得蛋白质含量,常称为粗蛋白质的含量,它包括了核酸、生物碱、含氮类脂、卟啉和含氮色素等非蛋白质的量.国标法中凯氏定氮操作繁锁、费时.本文对水扬酸比色法进行探讨,回收率为97%～103%,相对标准偏差3.0%,取得较为满意的结果.现介绍如下.
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奶粉中蛋白质样品消化方法的改进
蛋白质样品消化是奶粉样品检测的关键环节,国标法采用凯氏定氮瓶消化样品,取样量、试剂消耗量均较大,所需时间长(1个样品近5 h),消化过程产生的酸雾对周围环境污染严重.本文采用测砷瓶加回流管在电热板上砂浴消化样品,可减少取样量,克服凯氏定氮瓶样品消化的不足,精密度与准确度均符合要求.现报告如下.
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氨基酸分析法对蛋白含量国家标准品定量的初步分析
目的 探讨氨基酸分析的方法对蛋白含量国家标准品定量的可行性.方法 采用常规酸水解的方法,通过Hitachi L8800型氨基酸分析仪对白蛋白标准品进行分析.先确定佳水解时间,再按照佳水解时间对样品进行水解,通过氨基酸分析,采用氨基酸加合法测定其含量.并验证方法的精密性和准确性.结果 经7次测定,求得现行蛋白含量国家标准品[(2005)国生标字0009]的蛋白含量值为(95.02±3.99) mg/100 mg,相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)为4.20％.多次试验中,标准品中各氨基酸的回收率在93.56％～ 105.12％之间.推算标准品中白蛋白含量值为20.52 mg,是凯氏定氮测定值的103.48％.结论 氨基酸分析法测定蛋白含量自动化程度高,重复性好,可用于重组蛋白含量的分析.
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凯氏定氮装置的改进
1883年丹麦化学家凯道尔(Johan Kjedahl)首创了凯氏定氮法,为定氮分析经典方法,并列为AOAC蛋白质测定的标准法,是我国食品中蛋白质的测定第一法[1].同时,凯氏定氮装置的蒸馏提纯及相关项目的检测分析在科研、教学和生产实践中有着广泛应用[2-6],是实验室不可缺少的设备.凯氏定氮装置发展至今,各种品牌自动凯氏定氮仪相继问世,但自动凯氏定氮仪价格相对较贵,其内部结构管道较复杂,维护较困难,易发生故障[7].传统凯氏定氮装置由水蒸气发生器、反应室、冷凝装置、接收瓶4部分组成,基本上是玻璃磨口连接,使用中,效率较低,特别是蒸气发生器,采用电炉加热玻璃烧瓶,热效率低下,玻璃易碎,且在烧瓶中水烧干后,需待烧瓶冷却后补加水,必要时还要在热的电炉上卸下烧瓶冷却,操作很不方便[8],因此,导致样品蒸馏效率低下.本实验室在分析以上缺点后,采用市售电高压锅替代蒸气发生器,并采用三通连接,使蒸气通入、泄压、调节大小非常方便.应用该装置开展了食品中二氧化硫、甲醛蒸馏和奶粉中蛋白质测定,获得满意效果.接下来用定氮蒸馏滴定试验来考察凯氏定氮蒸馏装置改进后实用性.
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精制蛋黄卵磷脂中氮(N)含量测定的不确定度评定
卵磷脂又称为磷脂酰胆碱,是磷脂酸的衍生物,由甘油与脂肪酸和磷酸胆碱结合而成.卵磷脂是构成细胞等生物膜、脑组织和神经组织的重要组成成分,对酶的活性也起重要的作用,而且也是乙酰胆碱的重要供给源.临床上可用于治疗动脉粥样硬化、脂肪肝、神经衰弱、营养不良、胆固醇结石的防治药物及静脉注射脂肪乳的乳化剂.
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石墨消解—半自动定氮法在实验教学中的应用
凯式定氮法是测定蛋白质含量的国家标准方法,测定结果稳定、准确[1,2],但此方法存在消解时间长,温度不易控制,在中途转动时,穿戴两层手套防护仍会感觉烫手,且不容易固定,易倒,玻璃装置很容易在使用强酸强碱时造成破裂,存在着安全隐患,对学生造成伤害(图1)[3-5].同时,微量凯氏定氮法样品蒸馏方法(图2)酒精灯的火焰太小容易引起样品的倒吸,需要重新做[6,7].而石墨消解(图3)具有操作简单、方便,加热时间自由设置,炉内温度恒定,比直接用电炉消解容易控制等优点[8-10].
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天然胶塞的蛋白含量测定
目的:建立天然胶塞的蛋白含量测定方法.方法:用凯氏定氮法考察并对测定样品的总蛋白,用Lowry法测定水溶性蛋白.结果:采用几种消化条件测得的总蛋白含量结果基本一致；Lowry法与凯氏定氮法的结果存在较大差异.结论:凯氏定氮法的消化剂中加入过氧化氢,操作简便、安全,结果准确,可测定天然胶塞的总蛋白含量.
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微波消解-凯氏定氮法测定食品中蛋白质的方法研究
目的建立微波消解-凯氏定氮法测定食品中蛋白质的新方法. 方法利用微波消解新技术,选择确定微波消解食品中蛋白质的适宜方法,以节约能源提高效率. 结果微波消解-凯氏定氮法同国标法对比,结果无显著性差异.新方法的相对标准偏差R.S.D为1.69%,三个加标试验回收率在96.6%～101.4%之间. 结论试验表明,微波消解-凯氏定氮法测定食品中蛋白质含量的方法,有较好的准确度和精密度.
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替莫唑胺含量测定方法的研究
目的:建立一种适合替莫唑胺的含量测定方法.方法:采用紫外分光光度法、高效液相色谱法、凯氏定氮法分别对替莫唑胺进行含量测定.结果:3种方法均适用于替莫唑胺的含量测定,且都有较高的灵敏度和精密度.结论:紫外分光光度法准确、快速、简便,是替莫唑胺含量测定的佳方法.
