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应用酶解-气质联用法测定生物检材中安定的含量
目的测定生物检材中安定的含量,提高安定的提取率.方法兔肝经糜蛋白酶水解、固相萃取法提取后,用气相色谱-质谱联用仪分析安定的含量.结果酶解后的肝脏中安定的检出量明显增加,每克肝酶用量为1 000 U时效果佳.结论糜蛋白酶的应用提高了生物检材中安定的提取率.
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酶解法提取鸡血藤原儿茶酸的工艺研究
目的 优化鸡血藤中原儿茶酸的提取工艺.方法 在鸡血藤甲醇回流前,用果胶酶、纤维素酶分别处理,与未加酶组比较,得出优酶.通过单因素实验,探讨优酶的用量、时间、温度及酸碱度(pH)对原儿茶酸提取率的影响,并通过正交实验对其进行优化.结果 果胶酶比纤维素酶的原儿茶酸提取率高,优酶提取佳条件为:加入pH 4.5果胶酶0.5％、50℃酶解1.5h,70℃浸提2次,原儿茶酸提取率为2.88％.结论 佳条件下酶法能提高鸡血藤中原儿茶酸提取率.
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海蜇酶解多肽分离纯化及其抗氧化活性研究
目的 研究海蜇酶解多肽的抗氧化活性.方法 采用碱性蛋白酶酶解提取海蜇多肽,用超滤方法获得不同分子量的酶解液,从还原体系、羟自由基清除体系和DPPH自由基清除体系3方面,研究海蜇酶解液抗氧化肽的活性.结果 不同分子量的海蜇酶解物具有较强还原性,对羟自由基、DPPH自由基清除作用均较强,且抗氧化活性随着浓度的增加而明显增加.从分子量来看,小于3KDa组分抗氧化活性强,当浓度为15 mg/ml时,其对羟自由基和DPPH自由基的清除率分别为62.27％和78.25％.结论 海蜇酶解物具有抗氧化活性,且小分子肽的抗氧化活性强.
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缢蛏多肽诱导前列腺癌DU-145和PC-3细胞的早期凋亡的研究
目的 研究缢蛏抗肿瘤生物活性肽的制备工艺及其体外抗前列腺癌的活性功能.方法 选用胃蛋白酶、胰蛋白酶、木瓜蛋白酶、碱性蛋白酶等4种蛋白酶分别对缢蛏进行酶解,通过对DU-145细胞的增殖抑制作用来检测各酶解物的抗肿瘤活性,经G-25、反相高效液相色谱C18分离制备缢蛏酶解多肽.MTT检测缢蛏酶解多肽对DU-145和PC-3细胞的早期凋亡诱导作用;采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测缢蛏酶解多肽对DU-145和PC-3细胞的早期凋亡情况.结果 木瓜蛋白酶酶解获得的缢蛏多肽对DU-145细胞的诱导早期凋亡作用强.MTT法结果显示,不同浓度的缢蛏酶解多肽对DU-145和PC-3细胞均有增殖抑制作用,呈剂量和时间依赖性.Annexin V-FITC/ PI双染流式细胞术检测后发现,DU-145和PC-3细胞经缢蛏酶解多肽作用后,早期凋亡细胞随着作用时间和药物浓度的增加而增加.结论 缢蛏酶解多肽在体外有显著的抗肿瘤作用.
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大蒜渣ACEI活性肽的制备及其稳定性研究
目的 以蒜渣为原料,对制备ACEI(血管紧张素转化酶抑制剂)活性肽的工艺及酶解产物的稳定性进行研究.方法 以水解液的抑制活性为试验指标,从9种蛋白酶中筛选出4种较佳蛋白酶单独或联合水解蒜渣.结果蛋白酶1单独水解效果较好.通过单因素和正交试验得出佳水解条件:加酶量( E/S)6％、底物浓度8％、pH 7、50℃、3h,在上述条件下酶解产物对ACE的抑制率为88.81％.考察了大蒜渣ACEI活性肽的热稳定性、耐酸碱性和抗肠道酶降解能力,结果 表明,该活性肽具有良好的耐高温性能；在酸性条件下活性下降较快,当pH≥8.3时活性稳定；在模拟的胃肠道环境中具有良好的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶裂解的能力.结论 大蒜渣ACEI活性肽经口服或者静脉注射后很可能具有良好的降血压效果.
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鹿角盘蛋白酶解工艺优化及其水解物抗氧化活性研究
目的 优化鹿角盘蛋白酶解工艺,测定其酶解物抗氧化活性.方法 以水解度为指标通过正交实验,优化鹿角盘蛋白酶解工艺.选取具有代表性的羟自由基、DPPH·、超氧阴离子3种自由基体系,以不同浓度水解物的抗氧化作用为指标,评价酶水解物的抗氧化活性.结果 酶解的优工艺为温度50℃,pH 8.5,酶与底物比([E/S])4％,水解时间5h.胰蛋白酶水解物对羟自由基的半抑制浓度( IC50)为0.38mg/ml,对DPPH·的IC50为1.89 mg/ml,对超氧阴离子的IC50为0.70 mg/ml.结论 筛选出鹿角盘蛋白酶解优工艺,其酶解物具有较好的抗氧化活性.
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牡蛎酶解液的抗氧化活性研究
目的 探讨牡蛎酶解液的抗氧化活性.方法 用普鲁士蓝反应法测定牡蛎酶解液还原能力,在DPPH体系、Fenton体系和邻苯三酚自氧化体系中分别检测牡蛎酶解液清除二苯代苦味酰自由基(DPPH·)、羟基自由基(·OH)和超氧阴离子(O2-·)的能力,并考察牡蛎酶解液在Fe2+诱发卵黄脂蛋白过不饱和脂肪酸(PUFA)过氧化体系中的抗氧化作用.结果 牡蛎酶解液清除DPPH·和·OH的EC50分别为7.313和1.330 mg/ml;牡蛎酶解液(17.800 mg/ml)对超氧自由基和卵黄脂蛋白脂质过氧化的抑制率分别为19.86%和82.97%.结论 牡蛎酶解液具有显著的清除DPPH·和·OH作用,且活性与剂量呈正相关,并对卵黄脂蛋白脂质过氧化也显示出了较强的抑制作用.
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西洋参蛋白酶解工艺优化及酶解物体外抗氧化活性研究
目的 研究西洋参蛋白酶解工艺及酶解物氧化活性.方法 以相对分子质量分布为指标,通过正交试验确定西洋参蛋白酶解的优工艺.采用DPPH法、水杨酸法和邻苯三酚法研究不同浓度西洋参蛋白酶解物的体外抗氧化活性.结果 西洋参蛋白酶解的优工艺为碱性蛋白酶与西洋参蛋白比(g/g)为1∶50,酶解温度为55℃,酶解pH为9.5,酶解时间为6h.酶解物对二苯基-2-苦肼自由基(DPPH)自由基清除的IC50为1.30mg/ml,对羟基自由基清除的IC50为0.98 mg/ml,对超氧阴离子清除的IC50为1.43mg/ml.结论 表明西洋参蛋白酶解物具有很好的体外抗氧化活性.
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酶法水解海蛇蛋白的工艺研究
目的 以海蛇全体干品为原料,海蛇水解蛋白得率为指标,优选酶法水解海蛇蛋白的工艺.方法 对比研究了温度、酶量、时间、固液比对木瓜蛋白酶、枯草杆菌中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶酶解海蛇蛋白的影响,以正交试验优化酶解条件.结果 枯草杆菌中性蛋白酶水解海蛇蛋白的得率约为42％,其佳条件为温度50℃,pH值7.0,固液比1∶9(g/ml),酶量3000 U/3g(原料),时间7h.木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶酶解得率分别为36.2％、38.8％、38.8％.结论 枯草杆菌中性蛋白酶水解海蛇蛋白的得率高.
关键词： 水解动物蛋白(HAP) 海蛇 蛋白酶 酶解 -
物理-生物法藕联工艺提高甘草有效成分的研究
目的 应用物理-生物耦联新工艺,对甘草有效成分的提取方法进行改进,提高有效成分得率.方法 采用蒸气爆破和酶解(木质素酶+纤维素酶)甘草粉末后再煎煮提取的方法,获得甘草酸,使用正交实验优化气爆和酶解条件,并用HPLC测定甘草酸含量作为评价体系.结果 与常规方法煎煮甘草粉末相比,气爆处理甘草粉末溶出甘草酸的含量显著提高(P<0.05);气爆+酶解处理甘草粉末溶出甘草酸的含量极显著提高(P< 0.01).结论 蒸气爆破+酶解工艺提取中药成分,在充分利用中药宝贵资源和环境保护方面将发挥有益作用,推动中药现代化.
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黄芩的调节性提取工艺研究
目的 寻找一种能调节黄芩中的黄芩苷与黄芩素比例的提取方法.方法 利用黄芩药材中共存酶特性,运用正交设计筛选酶解参数,以高效液相色谱法测定黄芩苷和黄芩素,并计算其收率.结果 控制酶解条件,可制备黄芩苷与黄芩素按预设要求的黄芩提取物.结论 在设定的酶解条件下,可以平衡提取黄芩中的黄芩苷与黄芩素.该研究为灵活提取黄芩提供了有益参考.
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北冬虫夏草活性多肽的制备工艺研究
目的 通过酶解法制备北冬虫夏草活性多肽并筛选出佳酶解条件.方法 分别用胃蛋白酶和胰蛋白酶对北冬虫夏草进行单酶酶解,然后先加胃蛋白酶后加胰蛋白酶进行双酶酶解.按时间,加酶量和底物浓度不同条件采用正交试验,通过茚三酮比色法检测水解度优化佳酶解工艺,采用MTT法检测单酶酶解液和双酶酶解液对PC12细胞活性的影响.结果 胃蛋白酶和胰蛋白酶水解度测定吸光度大值分别为0.899和0.788,对应酶解时间、加酶量和底物浓度都是5h、2.5％和12％;双酶酶解在此条件下的吸光度值为0.875.酶解液对PC12细胞修复率影响大值为139.59％,对应样品为胃蛋白酶酶解原液稀释10-6倍.结论 胃蛋白酶酶解效果高于胰蛋白酶和双酶.
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均匀设计优化鹿茸抗氧化多肽酶解工艺的研究
目的 研究鹿茸抗氧化多肽酶解优工艺条件.方法 以酶解水解度和DPPH自由基清除率为指标,在单因素实验基础上,采用均匀设计法优化鹿茸抗氧化多肽酶解工艺.结果 优工艺为:酶解时间58min,酶添加量5.0U/mg,底物浓度11 mg/ml,酶解温度60℃,pH值6.验证实验显示该条件下鹿茸多肽1)PPH自由基清除率为(71.5±0.9)％,比预测值稍低,基本相符.结论 均匀设计法优化的鹿茸抗氧化多肽酶解工艺稳定、可行,获得了抗氧化性较好的鹿茸多肽,对开发高附加值的鹿茸产品具有重要的意义.
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抗凝血水蛭多肽气雾剂的制备研究
目的 考察不同提取方法对水蛭活性成分的提取效果,优化出水蛭活性成分配方,制备水蛭多肽气雾剂.方法 以凝血酶时间为指标,采用脱脂、水提醇沉、胃蛋白酶酶解法分别提取水蛭活性成分,检测不同水蛭多肽溶液配方的稳定、防腐、防沉性,并自主设计微型超声雾化器.结果 胃蛋白酶酶解法提取效果佳,水蛭多肽溶液优选配方为水蛭胃蛋白酶酶解上清液∶甘油(V/V)1∶1.5,甘露醇2g/L,山梨酸钾1.5g/L.结论 水蛭多肽气雾剂,鼻腔吸入,给药自行控制,使用方便,不需面罩,无浪费现象.
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钙离子预处理脱矿牙本质胶原对原花青素交联效果的影响
目的:探讨钙离子预处理牙本质胶原对原花青素交联效果的影响.方法:牙本质片经磷酸完全脱矿后分为2组,即氯化钙预处理组和未处理组,每组牙本质片分为3个亚组:去离子水组(阴性对照)、戊二醛组(阳性对照)、原花青素组.通过测定牙本质片酶解后的质量损失、羟脯氨酸释放、抗弯强度变化以及透射电镜形貌观察,评估交联后牙本质胶原抗酶解能力和力学性能.结果:戊二醛或原花青素交联处理均可以减少牙本质胶原的降解(P<0.05),并提高其抗弯强度(P<0.05);钙离子预处理可进一步提高原花青素的交联作用,表现为抗酶解能力的提高(P<0.05)和抗弯强度的稳定性(P<0.05).结论:钙离子预处理脱矿牙本质胶原可增强原花青素对牙本质胶原的交联作用.
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纤维素酶酶解-溶剂联合提取葱白中甾体化合物
目的 研究酶解-溶剂联合提取葱白中甾体化合物的佳工艺条件.方法以测定甾体化合物量为考察指标,通过单因素实验及正交实验确定佳提取工艺.结果 酶解-溶剂联合提取含硫化合物的佳工艺条件:酶解pH为5.0,酶解浓度为0.5 mg·mL-1,酶解温度为50 ℃,酶解时间为2 h,影响葱白甾体化合物提取的各因素主次顺序是:酶解pH ＞酶解时间＞酶浓度＞酶解温度.结论 采用酶解-溶剂联合提取葱白中的甾体化合物,工艺简单,能提高提取效率,减少能耗.
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生鲜葱白自身酶解条件的研究
目的:通过对生鲜葱白自身酶解条件进行初步研究,为进一步研究葱白中的酶活性提供依据.方法:利用丙酮酸与2,4-二硝基苯肼-氢氧化钠系统发生显色反应原理,采用分光光度法测定丙酮酸的生成量来推算酶活力,同时根据丙酮酸的生成量间接反映含硫化合物的生成量,考察不同温度、pH、金属离子、时间以及不同灭活方式对酶解的影响.结果:温度在25～55℃之间酶活性较高,超过65℃后急剧下降;pH在6～8之间时,酶活性受到的影响比较小;Fe3+、Cu2+这两种金属离子对鲜葱白中酶活性有一定抑制作用,而Ca2+、Zn2+对葱白中酶的活性影响不是很大;酶促反应进行迅速,30 min内完成;对比三种灭活方式的影响是微波＞有机溶剂＞高温.结论:葱白中酶有着其适宜的反应温度、pH以及离子活性中心.
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鸡内金酶解产物氨基酸分析研究
目的:研究鸡内金在不同的酶作用下的水解程度以及酶解产物的氨基酸含量分析.方法:在胰蛋白酶、木瓜蛋白酶及中性蛋白酶作用下鸡内金水解,用氨基酸自动分析仪分析酶解产物的氨基酸含量.结果:在3种酶作用下鸡内金水解率平均值分别为36.77%,23.34%,25.44%;酶解产物中均有的16种水解氨基酸,但胰蛋白酶水解产物中氨基酸总量高于木瓜蛋白酶及中性蛋白酶,为14.6.52 mg·(100 mL)-1.结论:在3种酶的作用下鸡内金均能水解,但水解程度有差别,胰蛋白酶水解产物中水解氨基酸含量较高.
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多酶微片胶囊中胃蛋白酶的活力测定
目的:建立多酶微片胶囊中胃蛋白酶活力测定的方法.方法:利用胃蛋白酶作用于底物血红蛋白,酶解生成不被三氯醋酸沉淀的小分子肽和氨基酸,并以酪氨酸为对照,在275 nm波长处测定吸收度.结果:胃蛋白酶平均回收率为101.6%,RSD为1.79%(n=9).结论:本法便捷,准确可靠,重现性好,可用于多酶微片胶囊中胃蛋白酶活力的测定.
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糜蛋白酶应用于生物检材中地西泮含量的测定
目的:测定生物检材中地西泮的含量,提高地西泮的提取率.方法:兔肝经糜蛋白酶水解、固相萃取法提取后,用气相色谱-质谱联用仪分析地西泮的含量.结果:酶解后的肝脏中地西泮的检出量明显增加,每克肝组织添加1000u糜蛋白酶时效果佳.结论:糜蛋白酶的应用提高了生物检材中地西泮的提取率.
关键词： 酶解 糜蛋白酶 固相萃取 气相色谱-质谱联用分析 地西泮
