首页 > 文献资料
-
苦参碱抑制神经母细胞瘤LA-N-5细胞增殖及MYCN基因mRNA的表达
目的 神经母细胞瘤是4岁以下儿童常见的恶性实体肿瘤,MYCN基因的高表达导致预后更加恶劣.苦参碱作为中药苦参的重要成分对多种肿瘤有治疗作用,该实验拟应用苦参碱作用神经母细胞瘤细胞(LA-N-5),对肿瘤细胞增殖及MYCN基因mRNA表达受抑制情况进行初步研究,希望可以为神经母细胞瘤的治疗开拓新的思路.方法 以终浓度为0.25 mg/mL,0.50 mg/mL,0.75 mg/mL,1.00 mg/mL苦参碱作用神经母细胞瘤LA-N-5细胞,MTT法检测LA-N-5细胞增殖情况变化,采用SYBR绿色荧光染料I的实时荧光定量Rt-PCR检测MYCN因mRNA表达受抑制情况.结果 苦参碱对LA-N-5细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性,随剂量的增加,作用时间的延长,抑制效果逐渐加强.1.00 mg/mL作用72h后肿瘤细胞增殖抑制效率达36.3%,单细胞MYCN基因mRNA表达9.7±0.35拷贝,抑制效率达44.6%.结论 应用苦参碱在体外环境作用LA-N-5细胞,可以有效抑制该细胞的增殖、原癌基因MYCN mRNA的表达,为临床上神经母细胞瘤的治疗开拓了新的思路.
关键词： 苦参碱 神经母细胞瘤 MYCN 荧光定量RT-PCR 细胞株 -
阻断TrkB-BDNF信号传导通路对神经母细胞瘤细胞生长及凋亡的影响
目的 脑源性神经生长因子(BDNF)和其酪氨酸激酶受体B(TrkB)与神经母细胞瘤(NB)细胞的化疗耐药及恶性预后密切相关.该研究探讨阻断TrkB-BDNF信号传导通路后,NB细胞对化疗药物敏感性的变化.方法 常规培养SH-SY5Y NB细胞,用nM浓度全反式维甲酸(ATRA)诱导TrkB高表达,加人BDNF、化疗药顺铂(CDDP)和特异性酪氨酸酶抑制剂K252a处理.MIT实验方法 检测应用K252a前后细胞的存活率的变化;同时应用Western-blot方法 检测应用K252a前后TrkB的磷酸化水平的变化;流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡率;透射电镜(TEM)观察凋亡细胞的形态与结构.结果 ATRA+BDNF+CDDP组细胞的存活率及凋亡率与对照组相比,差异无显著性(P>0.05).而经K252a处理后,细胞对顺铂的敏感性增加,细胞的存活率明显降低,凋亡率明显升高,差异有显著意义.Western-blot分析显示K252a能够阻断TrkB的磷酸化.结论 阻断TrkB-BDNF信号传导通路可提高NB的化疗敏感性,逆转耐药.
关键词： 神经母细胞瘤 TrkB-BDNF信号传导通路 k252a 细胞株 -
5-氮杂胞苷增强阿霉素对神经母细胞瘤细胞的抗瘤活性
目的 许多神经母细胞瘤细胞系及肿瘤组织标本中caspase-8表达缺失,caspase-8基因沉寂的主要原因是其启动子区域高度甲基化.该文探讨去甲基化药物5-氮杂胞苷对caspase-8表达及对化疗药阿霉素抗人神经母细胞瘤细胞作用的影响及其影响机制.方法 应用RT-PCR方法检测5-氮杂胞苷作用前后SH-SY5Y细胞中caspase-8 mRNA水平变化.MTT分析研究5-氮杂胞苷与化疗药阿霉素联合应用前后人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的存活率,以及加入caspase-8活性抑制剂后存活率的变化.结果 RT-PCR方法发现SH-SY5Y细胞株不表达caspase-8 mRNA,5-氮杂胞苷作用3d后可检测到caspase-8 mRNA表达,5d后表达较第3天增加;5-氮杂胞苷与不同浓度阿霉索(0.05,0.1,0.25,0.5 μg/mL)联合应用后SH-SY5Y细胞存活率为(77.61±7.30)%,(57.35±6.64)%,(46.25±4.46)%,(35.59±5.12)%,同一浓度单独应用阿霉素组细胞存活率为(94.89±4.15)%,(80.60±8.50)%,(64.48±4.92)%,(52.32±6.71)%,5-氮杂胞苷与阿霉素联用组细胞存活率明显低于单用阿霉素组,差异均有显著性.caspase-8抑制剂组与同一浓度的5-氮杂胞苷+阿霉素组比较,细胞存活率明显增加,依次为(92.95±3.48)%,(78.39±4.28)%,(62.31±6.50)%,(49.92±5.77)%,差异均有显著性.结论 阿霉素对神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y具有增殖抑制作用,5-氮杂胞苷可以增强阿霉素的抗瘤活性.其发生机制可能是通过上调caspase-8 mRNA的表达而实现的.
-
荧光定量RT-PCR检测神经母细胞瘤细胞MYCN基因mRNA的表达
目的 MYCN基因表达对神经母细胞瘤的治疗及预后评估有指导意义,目前国内对于MYCN基因mRNA的定量检测未见报道,该研究拟采用SYBR绿色荧光染料Ⅰ(SYBR GREEN Ⅰ)实时检测的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞MYCN基因mRNA的表达,并对其可行性及实用性进行研究,力争探索出微量瘤标本的MYCN基因mRNA定量检测的可行方法.方法 提取神经母细胞瘤细胞系LA-N-5细胞总RNA,采用SYBR GREEN Ⅰ实时检测的RT-PCR检测其MYCN基因mRNA的表达,并用3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)作为内参照,将MYCN基因的mRNA拷贝数与GAPDH的拷贝数相除,结果为单细胞MYCN基因mRNA的表达水平.结果 反应标准曲线有良好的相关性(R2＞0.99),PCR产物特异,神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达水平为17.4±1.2.结论 只要严格控制PCR反应条件,SYBR GREEN Ⅰ定量RT-PCR法可以作为一种良好的定量PCR方法对神经母细胞瘤细胞系LA-N-5 MYCN基因mRNA的表达进行检测,此方法为临床微量神经母细胞瘤瘤组织的MYCN基因mRNA的定量检测提供了可能.
关键词： 神经母细胞瘤 MYCN 荧光定量RT-PCR 绿色荧光染料Ⅰ -
神经节苷脂对整合素α2β1介导神经母细胞瘤细胞粘附于胶原蛋白的影响
目的 探讨内生肿瘤神经节苷脂(gangliosides,Gls)对整合素α2β1介导神经母细胞瘤细胞与胶原蛋白(collagen,Col)粘附反应的影响.方法 用葡萄糖苷神经酰氨合成酶抑制剂(D-threo-1-phenyl-2-decaolamino-3morphinoline-1-propanol,D-PDMP)抑制SK-N-SH细胞株Gls合成,采用流式细胞仪检测清除肿瘤细胞Gls前后SK-N-SH细胞整合素α2β1(integrinα2β1)表达的变化情况,同时观察Mg2+、抗integrinα2单克隆抗体6F1和抗integrin β1单克隆抗体(anti-β1)对该细胞对包被Col粘附作用的影响,所粘附的细胞用BCA方法测定,以吸光度(A570)代表粘附细胞的数量.结果 SK-N-SH细胞高水平表达integrinα2β1.暴露于D-PDMP 6 d后,细胞Gls几乎完全清除,但integrin α2β1的表达无明显变化,Mg2+能明显增加SK-N-SH细胞Ⅰ型Col的粘附反应,Mg2+浓度为1 mmol/L的条件下,Gls清除组粘附能力较对照组的明显下降:A570分别为0.33±0.016和0.57±0.033(P＜0.01).用从SK-N-SH细胞提取的Gls加入Gls清除组,可明显恢复该细胞的粘附能力,较对照组差异无显著性(P＞0.05).抗整合素α2β1单克隆抗体anti-α2(10 μL/mL)6F1和anti-β1均能显著阻断SK-N-SH细胞粘附于胶原蛋白(A570分别为0.31±0.018和0.36±0.021);但外源性肿瘤Gls并不能恢复anti-α2或anti-β1所阻断Gls清除组细胞的粘附能力.结论 内生肿瘤Gls增加整合素α2β1介导肿瘤细胞对Col的粘附作用,肿瘤Gls不能改变细胞integrin的表达,Gls对细胞粘附的调节作用主要可能通过影响细胞整合素的功能而发挥作用.
-
Caspase-8和DR5在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用
目的 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)能诱导多种肿瘤细胞凋亡而对正常细胞无诱导凋亡作用.大多数神经母细胞瘤细胞株对TRAIL的诱导凋亡作用耐受与其Caspase-8表达缺失有关,也与细胞表面TRAIL受体的表达和分布有关.该文主要探讨Caspase-8及TRAIL受体DR5的表达在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞株SKNDZ凋亡中的作用及其发生机制.方法 应用RT-PCR方法检测IFN-γ作用前后SKNDZ细胞Caspase-8的表达;应用Western-Blot方法检测化疗药作用前后SKNDZ细胞DR5的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、IFNγ+TRAIL、化疗药+TRAIL及化疗药+IFNγ+TRAIL对SKNDZ细胞生长及凋亡的影响.结果 SKNDZ细胞不表达Caspase-8,IFNγ作用后的SKNDZ细胞Caspase-8表达明显增加.对照组未检测到DR5蛋白表达,而阿霉素和依托泊苷处理后检测到DR5蛋白表达.表达Caspase-8的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用仍不敏感,而同时表达Caspase-8和DR5的SKNDZ细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感.阿霉素/依托泊苷+IFNγ+TRAIL组早期凋亡率为:(17.9±3.6)%、(14.8±3.3)%,与IFNγ+TRAIL组(3.9±1.2)%比较,差异有显著性(F=26.233,P＜0.01).结论 同时表达Caspase-8和DR5的SKNDZ细胞恢复了对TRAIL的敏感性,Caspase-8和DR5在TRAIL诱导SKNDZ细胞凋亡中起着十分关键的作用.
-
脂质体介导S100A4基因反义寡核苷酸对神经母细胞瘤细胞的作用效率及其稳定性的研究
目的S100A4基因在神经母细胞瘤早期转移中发挥重要作用.该研究以脂质体介导S100A4基因反义寡核苷酸转染体外培养的神经母细胞瘤细胞,观察其作用效率及稳定性.方法以脂质体包裹5'端带有FAM荧光标记的S100A4基因反义寡核苷酸转染体外培养的神经母细胞瘤细胞,用无脂质体包裹的反义寡核苷酸为对照,在激光共聚焦显微镜下观察荧光强度变化、作用效率及存留时间.结果经脂质体介导的S100A4基因反义寡核苷酸可以高效进入神经母细胞瘤细胞,荧光强度转染后8 h达高值173,24 h后仍高达135,作用效率达68%,稳定表达72 h以上;无脂质体包裹的反义寡核苷酸荧光强度在转染后6 h达高值90,作用效率35%,稳定表达仅12 h.结论脂质体介导的S100A4基因反义寡核苷酸作用于神经母细胞瘤细胞效率高、时间持久,值得在神经母细胞瘤基因治疗中进一步探讨.
-
三氧化二砷对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响
目的三氧化二砷(As2O3)通过诱导细胞凋亡和诱导细胞分化效应治疗急性早幼粒细胞白血病(APL)患者已取得很好疗效.与APL细胞相似,神经母细胞瘤(NB)细胞也是分化成熟受阻,该文对As2O3在体外对人神经母细胞瘤细胞凋亡作用的影响及可能的机制进行探讨.方法比色法观察As2O3对神经母细胞瘤SK-N-SH细胞增殖的影响;Giemsa染色观察细胞形态学改变;Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学染色方法检测bcl-2蛋白表达变化.结果As2O3明显抑制SK-N-SH细胞增殖,抑制作用呈剂量时间依赖效应,并出现细胞凋亡的形态学改变;流式细胞仪检测4.0 μmol/L AsaO3作用SK-N-SH细胞72 h后,早期凋亡细胞比例(9.9±0.8)%,与对照组(3.7±0.2)%相比明显增多,差异有显著性(P<0.05);分别以1.0,2.0,4.0 μmoL/L的As2O3处理SK-N-SH细胞72 h后,bcl-2表达随AsaO3浓度增加呈降低趋势,bcl-2表达阳性率分别为(26.3±8.0)%,(15.0±4.5)%和(4.8±3.2)%,与对照组(73.6±6.1)%相比,差异有显著性(P<0.01).结论As2O3可在体外抑制神经母细胞瘤细胞增殖,诱导凋亡,bcl-2参与了其调节作用.
-
神经生长因子受体对神经母细胞瘤血管生成作用的研究
目的神经生长因子受体(TrkA)基因是神经母细胞瘤(NB)良好预后的标识之一,其高表达不仅可以抑制NB增殖和诱导良性分化,对NB的血管生长可能有一定的影响.该实验探讨TrkA基因对NB血管生成的作用.方法15只裸鼠随机分为对照组、空载体组和实验组(每组5只).利用脂质体转染法将TrkA基因和pBPSTR1空载体转入NB SY5Y细胞,分别命名为SY5Y-Trk A及SY5Y-Vec细胞,未转染细胞为SY5Y细胞.将SY5Y,SY5Y-Vec,SY5Y-TrkA细胞分别接种在对照组、空载体组和实验组裸鼠皮下,接种50 d后处死动物,切除肿瘤,测量肿瘤体积;用RT-PCR及免疫组织化学技术检测肿瘤内血管内皮生长因子(VEGF)的表达;计算微血管密度(MVD).结果SY5Y-TrkA细胞TrkA表达明显高于SY5Y-Vec及SY5Y细胞组(P＜0.01);实验组肿瘤终体积小于对照组及空载体组(0.39±0.02 cm3 vs 1.74±0.49 cm3);(0.39±0.02cm3 vs 1.80±0.75 cm3),差异有显著性(均P＜0.01);实验组VEGFmRNA表达低于对照组及空载体组(0.16±0.09 vs 1.45±0.77);(0.16±0.09vs 1.35±0.71),差异有显著性(均P＜0.01);实验组VEGF蛋白表达低于对照组及空载体组(2.00±0.60 vs 5.67±0.49);(2.00±0.60 vs 5.33±0.78),差异有显著性(均P＜0.01);实验组MVD明显低于对照组和空载体组(4.08±4.72% vs 27.21±14.58%);(4.08±4.72% vs 27.76±14.15%),差异有显著性(均P＜0.01).结论TrkA基因能有效抑制NB的血管生成和肿瘤生长,为应用基因抗血管治疗神经母细胞瘤提供了理论依据.
-
CEM为预处理方案的自体外周血造血干细胞移植治疗晚期神经母细胞瘤相关毒性及疗效观察
目的观察以CEM(卡铂+VP-16+马法兰)为预处理方案的自体外周血造血干细胞移植治疗晚期神经母细胞瘤患儿的毒性和疗效.方法研究经大剂量放、化疗及手术治疗达完全缓解的Ⅳ期神经母细胞瘤患儿6例,采用CEM预处理方案(卡铂每日425 mg/m2共4 d,VP-16每日338 mg/m2共4 d,马法兰每日70 mg/m2共3 d)的自体外周血造血干细胞移植,并依据Bearman标准对预处理毒性进行评价,对其造血重建、并发症及预后进行观察.结果预处理后髓外毒性除1例为Ⅰ级肝损害外,主要表现在口腔粘膜(Ⅰ级6例)和胃肠道(Ⅰ级5例,Ⅱ级1例)损害.白细胞于移植后3±0.5 d达到0,移植后33±3.1 d稳定于1×109/L以上.除1例患儿移植后11个月颅内转移外,余5例患儿均健康存活.随诊时间分别为8、10、23、36及48个月.结论以CEM为预处理方案的自体外周血造血干细胞移植可以安全、有效的治疗Ⅳ期神经母细胞瘤.
关键词： 自体外周血造血干细胞移植 预处理 毒性反应 神经母细胞瘤 -
高效液相色谱法检测尿中儿茶酚胺代谢产物含量在神经母细胞瘤早期诊断中的价值
目的尿中香草扁桃酸(VMA)及高香草酸(HVA)的检测是目前早期诊断神经母细胞瘤(NB)的重要指标,以前的检测方法干扰因素多,结果不够准确.该文探讨高效液相色谱法(HPLC)检测随机尿中VMA、HVA的含量在NB诊断和早期诊断中的价值.方法用HPLC方法(流动相pH 4.3,甲醇含量2%,正辛烷磺酸钠溶液3.0 mmol/L)检测50例正常儿童(正常对照组)、27例NB患儿(NB组)及15例急性淋巴细胞性白血病患儿(ALL组)随机尿中VMA、HVA浓度.用比色法测定同一样品中肌酐浓度.以VMA、HVA与肌酐的比值表示VMA、HVA含量.结果 NB组患儿随机尿VMA/Cr及HVA/Cr的含量(51.60±4.53 μmol/μmol Cr,58.00±3.75 μmol/μmol Cr)明显高于正常对照组(8.42±3.61 μmol/μmol Cr,10.12±3.88 μmol/μmol Cr)及ALL组患儿(8.78±3.50 μmol/μmol Cr,11.50±2.68 μmol/μmol Cr),其差异均有显著性(P<0.05).以正常对照组儿童随机尿中VMA/Cr及HVA/Cr均值加2.5个标准差为异常判定值,分别为17.5、19.8 μmol/μmol Cr,超过此值为异常,则尿VMA/Cr或HVA/Cr异常对NB的诊断效率为96.3%.结论 HPLC同时测定随机尿中VMA、HVA含量,能为NB的早期诊断提供可靠的实验依据,并且可用于NB的诊断及鉴别诊断.
-
高危神经母细胞瘤的治疗
高危神经母细胞瘤由于其恶性程度高,治疗十分困难,目前认为综合治疗仍是该病的主要治疗方法,包括大剂量联合化疗、手术切除、造血干细胞移植、放射治疗、生物治疗、免疫治疗及靶向治疗等.近年来免疫治疗取得了一定进展.该文介绍了一些高危神经母细胞瘤常用治疗方法,希望对该病的临床诊治有所帮助.
-
替莫唑胺诱导人神经母细胞瘤SK-N-SH细胞中MGMT 基因启动子区过甲基化与依立替康敏感性的关系研究
目的 探讨替莫唑胺对人神经母细胞瘤SK-N-SH 细胞中MGMT 基因启动子区甲基化状态的影响,及该影响与细胞对依立替康敏感性的关系.方法 体外培养神经母细胞瘤SK-N-SH 细胞株作为对照组,采用替莫唑胺处理的细胞株作为实验组,比较两组细胞中MGMT 基因启动子区甲基化状态,Real-time PCR 检测两组细胞中MGMT 基因的表达变化.用MTT 法检测两组细胞对依立替康药物的敏感性.结果 替莫唑胺处理组细胞MGMT 基因的甲基化程度较对照组显著增加.实验组细胞MGMT 基因的表达下调,与对照组比较存在显著差异,两者的表达量差异倍数均值为-3.25±0.71.依立替康对实验组细胞的IC50 为2.5 mg·L-1,对照组的IC50 为5.7 mg·L-1.结论替莫唑胺能够通过增加SK-N-SH 细胞中MGMT 编码基因上游启动子区的甲基化程度,从而下调MGMT 编码基因的表达量,进而增加SK-N-SH 细胞对依立替康的敏感性.
-
NR2E1促神经母细胞瘤细胞分裂增殖的效应研究
目的:探讨核蛋白样转录因子核受体亚家族2组E成员1(nuclear receptor subfamily 2 group E member 1,NR2EI)对儿童神经母细胞瘤细胞株IMR-32生长、分裂、增殖的影响.方法:应用LipofectamineTM2000将构建的针对核蛋白样转录因子NR2E1的shiRNA质粒载体转染神经母细胞瘤细胞株IMR32,并通过细胞计数法观察细胞生长抑制效应,采用细胞免疫荧光染色检测神经母细胞瘤细胞株IMR32细胞分裂蛋白的表达.结果:核蛋白样转录因子NR2E1的shiRNA质粒转染神经母细胞瘤细胞株IMR32 48 h后,该细胞株生长缓慢；相关细胞核分裂蛋白表达受到明显的抑制.结论:核蛋白样转录因子NR2E1的shiRNA干扰质粒转染神经母细胞瘤细胞株IMR32后,抑制了神经母细胞瘤细胞IMR32的分裂和增殖.
关键词： 神经母细胞瘤 核蛋白样转录因子NR2E1 细胞分裂 -
超声诊断并随访肾上腺神经母细胞瘤自然退化1例
神经母细胞瘤是一种交感神经系统的胚胎性肿瘤,由神经嵴的交感神经节细胞发展而来.中南大学湘雅医学院附属海口医院收治一名9d患儿,经穿刺活检确诊为肾上腺神经母细胞瘤伴肝转移.在未接受任何治疗的情况下,持续超声观察随访6年,发现患儿肾上腺及肝内占位逐渐缩小直至消失,患儿自然痊愈.部分恶性肿瘤可能发生自然退化,其中以神经母细胞瘤为常见,观察并研究自然退化现象对肿瘤治疗具有重要的意义.
-
儿童神经母细胞瘤17例临床分析
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是儿童时期常见的恶性肿瘤.在儿童恶性肿瘤发病率统计中,仅次于白血病和中枢神经系统肿瘤而居第3位[1],75%的病例诊断时年龄小于5岁.因肿瘤原发部位隐蔽,早期无特殊症状,且是容易发生早期转移的肿瘤之一[2],故初诊时往往误诊为其它疾病,确诊时多已属晚期.因此,分析其临床诊治特点有助于临床工作者对此病的认识.本文对我院经病理组织学、骨髓细胞学及其它相关检查确诊的17例患儿的临床资料进行分析,报告如下.
-
应用彩色多普勒超声诊断隐蔽型神经母细胞瘤
目的应用彩色多普勒超声对腹部不能触及肿块的神经母细胞瘤(隐蔽型)进行检查,协助临床对本病早期诊断、早期治疗.方法该组31例均来自中国医科大学附属第二医院小儿内科、外科、眼科,均经骨髓穿刺镜检后诊断或高度怀疑为神经母细胞瘤,并均做彩色多普勒超声检查,寻找原发病灶.结果该组31例中23例检出实质性肿块,22例位于肾上腺或腹后壁,1例位于后纵隔.半数以上的肿块可显示少数点状或短杆棒状彩色血流信号,呈动脉血流频谱.其中19例行手术治疗,超声与手术结果对照,符合者17例,诊断符合率为89.5%.结论彩色多普勒超声可协助临床对隐蔽型神经母细胞瘤作出诊断以及手术前确定原发肿瘤的部位.
-
Caspase 8和Caspase 3在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用
目的 探讨Caspase 8和Caspase 3在肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导CHP212神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用.方法 应用流式细胞仪检测TRAIL、Caspase 8/Caspase 3抑制剂+TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用.应用比色法测定Caspase 8、Caspase 3的相对活性.应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学的观察.结果 TRAIL可诱导CHP212细胞的凋亡,并存在剂量依赖性;Caspase 8/Caspase 3抑制剂能抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用.随TRAIL作用时间的延长,Caspase 8、Caspase 3的活性逐步升高,分别于作用16h、8h后达高峰.透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征.结论 TRAIL通过Caspase信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase 8和Caspase 3活性的增高.
关键词： 神经母细胞瘤 凋亡 半胱-天冬氯酸蛋白酶 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
Caspase 8在TRAIL诱导神经母细胞瘤细胞凋亡中的作用
目的 探讨Caspase 8在TRAIL(肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体)诱导神经母细胞瘤细胞株CHP 212细胞凋亡中的作用及机制.方法 应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测TRAIL、Caspase 8抑制剂(zIETD-FMK)+TRAIL对CHP 212细胞生长及凋亡的影响;应用比色法测定Caspase 8相对活性;应用透射电镜对凋亡细胞进行形态学观察.结果 CHP 212细胞对TRAIL的诱导凋亡作用敏感,存在时间和剂量依赖性;随TRAIL作用时间的延长,Caspase 8活性逐步升高,于作用16 h达高峰.zI-ETD-FMK能阻断Caspase 8的活化而抑制TRAIL对CHP212细胞的诱导凋亡作用.透射电镜可见到典型的细胞凋亡特征.结论 TRAIL通过Caspase 8信号传导通路诱导CHP212细胞凋亡并伴随Caspase 8活性增高.
关键词： 神经母细胞瘤 凋亡 caspase 8 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 -
Caspase8在实验性神经母细胞瘤细胞凋亡中作用的研究
目的探讨Caspase8表达对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞株SH-SY5Y(SY5Y)细胞凋亡的影响及其发生机制.方法应用RT-PCR方法和免疫组化法检测IFNγ作用前后SY5Y细胞Caspase8的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法及流式细胞仪(FCM)检测IFNγ、TRAIL、IFNγ+TRAIL及IFNγ+Caspase8抑制剂+TRAIL对SY5Y细胞生长及凋亡的影响.结果SY5Y细胞不表达Caspase8,IFNγ作用48h后的SY5Y细胞Caspase8表达明显增加;SY5Y细胞对TRAIL不敏感,经IFNγ诱导表达Caspase8的SY5Y细胞对TRAIL敏感,且与TRAIL浓度有关,Caspase8抑制剂可明显降低TRAIL对表达Caspase8的SY5Y细胞的杀伤作用.结论IFNγ通过诱导Caspase8表达而逆转SY5Y细胞对TRAIL诱导凋亡的耐受.
