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Tenascin基因在斑马鱼胚胎发育中时空表达规律
目的 观察tenascin-c(tnc)和tenascin-w(tnw)在斑马鱼不同发育时期的时空表达规律,进而揭示tenascin基因与胚胎发育的关系及tnc与tnw在胚胎发育过程中的联系.方法 选择2 hpf(受精后2 h)、4 hpf、8 hpf、10 hpf、24 hpf、48 hpf、72 hpf、7 dpf(受精后7 d)的斑马鱼胚胎,分别提取各组RNA行反转录聚合酶链反应(RT-PCR),并固定各时期胚胎作原位杂交,观察不同时期tnc和tnw在斑马鱼胚胎中时间和空间的表达规律.结果 tnc和tnw在斑马鱼2～10 hpf时均未检测到表达,在24 hpf、48 hpf、72 hpf、7 dpf有表达.tnc在胚胎24 hpf表达于其咽弓、脊索、体节中;在胚胎48 hpf,tnc在其躯干部表达减弱,逐渐局限于尾端,而在胸鳍、听囊、咽弓、后脑有高表达;72 hpf在其体节、胸鳍表达消失,在后脑、咽弓、脊索仍有表达.tnw在24 hpf开始表达于其中脑、后脑和听囊中;48 hpf表达在其体节、脊索,在后脑、听囊中仍有表达,并表达于咽弓;72 hpf在其躯干部的表达开始减弱,在脊索中仍有表达.结论 tnc和tnw在斑马鱼胚胎发育时期具有严格的特异性时空表达规律,二者在斑马鱼胚胎发育过程中有密切联系.
关键词： 斑马鱼 Tenascin-C Tenascin-W -
乙醇对斑马鱼胚胎发育中tenascin-c基因表达的影响
目的 探讨tenascin-c(tnc)基因在斑马鱼胚胎异常发育过程中表达的变化,从而揭示该基因在斑马鱼胚胎发育中可能存在的作用.方法 不同水平乙醇(100、200、300、400、500 mmol/L)持续处理斑马鱼胚胎,制备斑马鱼异常发育模型,收集受精后24、48 h斑马鱼胚胎并固定,用原位杂交和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法观察tnc在斑马鱼异常发育时表达的变化.组间比较采用SPSS 11.5软件进行统计学处理.结果 200 mmol/L乙醇处理的斑马鱼胚胎在受精72 h其他系统未发现发育异常,而心脏已出现畸形.100、200 mmol/L乙醇处理后,RT-PCR结果示tnc在斑马鱼胚胎发育中的表达上调,而原位杂交信号变化不明显;300 mmol/L及以上乙醇处理的胚胎,原位杂交结果示tnc在体节处表达下降;100～400 mmol/L乙醇处理的胚胎,在受精48 h tnc在斑马鱼心脏部位均有表达.结论 tnc在低水平乙醇处理时表达即上调,对胚胎正常发育有保护作用;在心脏异常发育时表达,促进心脏的正常发育;tnc在病理状态下的表达模式不仅在脊椎动物中具有保守性,而且在胚胎和成体时期也具有保守性.
关键词： 乙醇 斑马鱼 心脏 tenascin-c基因 -
miR-30c 过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响
目的：探究 miR-30c 过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响。方法于斑马鱼胚胎1细胞受精卵期，显微注射3个不同浓度梯度的 miR-30c 模拟物以实现过表达。通过计数在不同时间点斑马鱼胚胎的病死率及心率、显微镜观察斑马鱼大体形态及心包水肿情况，以及胚胎整体原位杂交等方法，评价 miR-30c 过表达对斑马鱼早期心脏发育的影响。结果与野生型对照组比较，随着过表达浓度的提高，斑马鱼胚胎的病死率逐渐增高，至8μmol／L 浓度时，斑马鱼受精后96 h 病死率已达80％。而同时，作为评价心脏功能重要指标的心率逐渐下降。此外，随着过表达浓度的递增，斑马鱼心包水肿的程度越来越高，且此种心包水肿随着时间的推移越来越严重。之后，通过胚胎整体原位杂交的方法，观察心脏部位特异性基因的表达，发现过表达 miR-30c的斑马鱼中，标记心房肌及心室肌探针的表达范围都有所扩大，心脏环化受到抑制，且心脏房室通道瓣膜处的基因表达缺失。结论miR-30c 过表达影响斑马鱼的早期心脏发育。
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斑马鱼动物模型在眼科及视觉科学研究中的应用:历史与现状
近年来,斑马鱼凭借其体型小、繁殖力强、生长发育快、胚胎透明等独特的生物学特性,成为人类疾病动物模型的理想选择,加之与人类眼部结构和基因的高度保守性,使斑马鱼受到眼科学和视觉科学领域工作者的关注.本文主要以斑马鱼模型在视觉研究中的文献为基础,对目前常用和新近发展的基因调控和编辑技术在这一领域的应用进行综述.
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视网膜Müller细胞重编程为内源性神经干细胞研究进展及存在的问题
视网膜变性疾病可引起视网膜神经细胞死亡,终可致盲.对于罹患视网膜神经细胞损伤相关疾病的患者,我们必须找到一种安全、有效地替换这些细胞的方法进行治疗.神经干细胞( NSCs)是一类能向神经细胞和胶质细胞分化的特殊干细胞,作为视网膜主要的内源性NSCs,Müller细胞具有在视网膜损伤后进入细胞周期增生并分化为神经细胞的能力.在脊椎动物中,视网膜Müller细胞自发的再生效率很高,而哺乳动物中这一能力几乎消失.随着研究的深入,发现一些转录因子,如Ascl1、sox2、lin28和atoh7等具有促进Müller细胞增生并分化为神经细胞的功能,其中Ascl1联合组蛋白脱乙酰酶抑制剂能使小鼠Müller细胞分化的神经细胞整合进入视网膜并能对光做出反应.此外,外源性干细胞的移植也可以诱导Müller细胞重编程.虽然这些研究结果极有应用前景,但与斑马鱼相比,哺乳动物Müller细胞增生再生的能力仍十分有限,可能有某种尚不明确的反向机制抑制了Müller细胞的重编程能力.寻找更多能增强Müller细胞重编程能力的新因子将成为亟待解决的重要问题.
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斑马鱼体内氧化损伤标志物筛选
目的:探讨以端粒为靶点的氧化损伤标志物的筛选,进而可能可以用来临床上早期发现或预报氧化损伤.方法:采用端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因敲除(TRF2-/-)斑马鱼胚胎作为氧化损伤模型,RT-qPCR法检测野生型和TRF2-/-斑马鱼胚胎中TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达情况.构建pCS2-PUM3、pCS2-PACSIN3质粒并体外转录后,将mRNA分别显微注射至TRF2-/-斑马鱼受精卵中,比较注射组与未注射组斑马鱼畸形率.结果:RT-qPCR结果表明,与野生型斑马鱼胚胎相比,TRF2-/-斑马鱼胚胎TRF2、PUM3、PACSIN3 mRNA的表达量下降(P<0.05).显微注射PUM3 mRNA至TRF2-/-斑马鱼受精卵后斑马鱼胚胎畸形率下降(P<0.05).结论:TRF2能影响氧化应激相关基因PUM3、PACSIN3的表达,且PUM3能补救TRF2缺失造成的氧化损伤相关器官畸形.
关键词： 斑马鱼 氧化应激 端粒 端粒重复序列结合因子2 -
斑马鱼耳聋基因Gfi与POU4f3的关联性
目的 运用转基因斑马鱼探讨信号蛋白Gfi与POU4f3之间关系.方法 阻止POU4f3在鱼受精卵中表达,构建该基因缺陷的转基因鱼,分析缺失该基因的斑马鱼形态及Gfi的表达.结果 POU4f3的缺陷程度与鱼神经组织发育的程度有明显相关性,与Gfi表达也有明显相关性.结论 POU4f3对Gfi表达有调控作用,二者与神经组织发育有明显相关性.
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白芍对斑马鱼促血管生成和抗血栓作用的研究
目的 采用斑马鱼模型比较白芍不同部位、主要成分及主要代谢产物的促血管和抗血栓生成作用.方法 采用Tg(VEGFR2:GFP)系荧光转基因斑马鱼为模型动物,分别将白芍总样、不同萃取部位、芍药苷、白芍苷和芍药苷代谢素-Ⅰ设置三个药物剂量组,用荧光显微镜观察并计数不同给药组有血流的斑马鱼体节间血管数;以三氯化铁为血栓诱导剂,在荧光显微镜下观察并记录不同给药组对斑马鱼腹部血管血流停止时间的影响.结果 白芍总样、石油醚萃取物、水层样品、芍药苷、白芍苷和芍药苷代谢素-Ⅰ均表现出抑制血栓生成、促进血液流动的活性;正丁醇相、乙酸乙酯相和芍药苷代谢素-Ⅰ能够明显增加具有血流的节间血管数量.结论 芍药苷代谢素-Ⅰ具有显著的抑制血栓生成、促进血液流动的活性且优于总样和芍药苷.
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白藜芦醇对斑马鱼尾鳍再生的促进作用及机制研究
目的 研究白藜芦醇促进斑马鱼尾鳍再生的活性及作用机制,并研究其对斑马鱼胚胎发育的影响,为白藜芦醇药效的进一步开发和安全用药提供依据.方法 采用斑马鱼(Fli1-GFP)模型,研究白藜芦醇对斑马鱼尾鳍切除后血管和组织再生的影响,用相对荧光定量PCR法检测仔鱼切尾后体内血管内皮生长因子(VEGFA)和受体(VEGFR2)基因的表达量;研究白藜芦醇对斑马鱼胚胎发育的影响,检测其对斑马鱼胚胎自主运动、心率、孵化率的效应.结果 白藜芦醇具有血管生成活性,可促进斑马鱼尾鳍再生,能提高仔鱼切尾后体内VEGFA及VEGFR2基因的表达量;白藜芦醇对斑马鱼胚胎发育有一定影响,主要表现为低浓度时促进自主运动和孵化率但高浓度时呈抑制效应,且可降低心率.结论 白藜芦醇可促进斑马鱼尾鳍再生,作用机制可能与促进VEGFA和VEGFR2基因表达有关.白藜芦醇对斑马鱼胚胎发育有一定毒性.
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复方苦参注射液联合顺铂对斑马鱼血管生成的协同作用
目的 利用斑马鱼模型探讨复方苦参注射液联用顺铂对血管生成的协同抑制作用.方法 采用24hpf(hour post fertilization,hpf)健康TG(VEGFR2∶ GFP)系血管荧光转基因斑马鱼作为实验动物模型,分别用复方苦参注射液、顺铂、以及两药联合处理24h,以节间血管作为考察依据,并用SPSS软件对所得数据进行统计处理.结果 顺铂单用时以50,100μg·ml-1浓度抑制节间血管效果明显,复方苦参注射液为0.5％时抑制节间血管效果明显,两者联用时较单用抑制更明显.结论 复方苦参注射液与顺铂有一定的抑制血管生成作用,两者联合具有协同增效作用.
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血管内皮细胞生长因子和血管发生素-1及其受体在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达
目的探讨血管内皮细胞生长因子和血管发生素-1及其受体在斑马鱼早期胚胎发育过程中的表达,为构建药物筛选的在体模型提供依据.方法采用多聚酶链式反应,扩增了长约280bp的斑马鱼血管发生素-1 cDNA部分序列,作为探针,以原位杂交法测定了血管内皮细胞生长因子和血管发生素-1及其相应受体flk-1和Tie-2的表达.结果从受精卵胚胎发育第12小时可见血管内皮细胞生长因子和血管发生素-1及其相应受体flk-1和Tie-2的表达;在受精卵胚胎发育的第16小时,血管内皮细胞生长因子和血管发生素-1主要在头部和尾部胚芽表达;第24小时在眼球、视窝、中脑、后脑的腹前侧和肌节中表达,Tie2和Flk-1主要在肌间背部动脉血管、躯干新生血管芽和轴向静脉中表达.结论血管内皮细胞生长因子和血管发生素-1及其受体在斑马鱼胚胎发育早期的血管发生过程中可能相互作用,并协调血管发生过程.斑马鱼是研究胚胎发育早期微血管发生和血管发生的极佳动物模型,可用于促血管发生或抑制血管发生药物筛选.
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病毒序列促转基因在斑马鱼胚胎发育过程中的高效表达
目的 探讨转基因在斑马鱼胚胎发育过程中高效表达的有效途径和手段.方法 以增强处理的绿色荧光蛋白(GFP)作为报告基因,在表达质粒的两翼连接构建腺关联病毒(adeno-associated virus, AAV)来源的病毒性反转末端重复序列(inverted terminal repeats, ITRs),以显微注射方式注入斑马鱼受精卵的单一细胞和双细胞时相.结果 病毒序列中的ITRs可使转基因表达效率达到33.0%,远远高于未与病毒序列结合的质粒.结论 源于病毒的ITRs可显著促进转基因在斑马鱼胚胎发育过程中的表达.
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基因沉默技术在斑马鱼研究中的应用
模式生物斑马鱼主要应用于探索遗传学、发育生物学和分子生物学等研究领域的分子机制,常用的研究策略是DNA诱变和基于RNA的基因沉默.但化学诱变技术和传统反义核酸技术存在缺陷,目前在应用中已受到很大限制.反义morpholino技术具有稳定、方便的特点,广泛应用于斑马鱼基因功能的研究.新兴的锌指核酶基因敲除技术不依赖于胚胎干细胞使其前景更为广阔.
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转录激活因子样效应物敲除klf4 b基因的质粒构建与鉴定
目的： KLF4是哺乳动物细胞中调控和维持全能性的关键因子，构建与鉴定klf4 b基因敲除的有效位点与相关质粒，以期构建klf4 b基因敲除动物模型研究其功能。方法转录激活因子样效应物核酸酶是目前有效敲除和编辑基因的基因工程技术之一，设计和组装了klf4 b基因TALENs质粒，在胚胎和整体动物水平验证其有效性。结果成功组装了两对klf4 b基因TALENs质粒，显微注射胚胎后，经检测其中一组成功诱导klf4 b靶向区域突变，突变类型既有插入型也有缺失型；遗传检测显示这些突变型高效的遗传给了下一代。结论在斑马鱼中有效敲除了klf4 b基因，成功获得了斑马鱼klf4 b突变群体；为进一步阐释斑马鱼中klf4 b基因的生物功能提供了良好的研究材料，也为全面理解哺乳类klf4基因的功能提供了研究模型。
关键词： KLF4基因 基因敲除 转录激活因子样效应物 斑马鱼 -
斑马鱼铁调素过表达对成骨代谢的影响及其机制
目的 通过对斑马鱼受精卵进行显微注射启动铁调素蛋白表达的mRNA(信使核糖核酸),使其铁调素基因过表达,观察铁调素过表达后对斑马鱼的骨代谢的影响,探讨铁调素过表达对于骨代谢影响的机制.方法 以受精后0.5h斑马鱼的受精卵为模型,予以铁调素的mRNA显微注射受精卵,将注射后的幼鱼于第4天进行提取蛋白,进行Westem blot法鉴定后,对注射铁调素的mRNA后的幼鱼于第4天进行铁染色,与野生型比较观察铁含量变化,对注射铁调素的mRNA后的幼鱼于第4天分别进行茜素红染色,与野生型比较硬骨的形态差异;对注射铁调素的mRNA后的幼鱼于第4天提取的cDNA采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和野生型基因组的成骨下游基因的差异.结果 对注射铁调素的mRNA后第4天斑马鱼进行铁染色,与野生型染色比较色素沉着明显变浅,对铁调素的mRNA后第4天斑马鱼进行茜素红与野生型染色比较,硬骨茜素红染色变浅且肋骨及尾鳍未发育,注射铁调素的mRNA后第4天的斑马鱼做定量FQ-PCR进行检测相关成骨代谢的基因表达量与野生型斑马鱼成骨基因表达比较均下调,尤其以Runx2a和Runx2b为显著,野生型分别为1.069±0.023和1.023±0.021降至处理后的0.256 ±0.016和0.422 ±0.078(P =0.000).结论 过表达斑马鱼的铁调素造成斑马鱼体内铁缺少,使得斑马鱼的成骨基因降低,造成骨发育迟缓,骨量减低.
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铁调素对敲降斑马鱼中抑制成骨代谢的影响
目的 通过对斑马鱼受精卵进行显微注射剪接吗啉环反义寡核苷酸,使其铁调素基因敲降,观察铁调素表达抑制后对斑马鱼骨代谢的影响,探讨铁调素抑制对于骨代谢影响的机制.方法 以受精后0.5h斑马鱼的受精卵为模型,予以不同浓度的剪接吗啉环反义寡核苷酸显微注射受精卵,将注射后的幼鱼于第4天进行提取RNA,反转录成cDNA,进行鉴定后得到适当浓度.在浓度为25 mg/L的剪接吗啉环反义寡核苷酸注射条件下,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第4天进行铁染色,与野生型比较观察铁含量变化,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第9天分别进行茜素红和阿可辛蓝染色,与野生型比较硬骨和软骨的形态差异;对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第4天提取的cDNA采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和野生型基因组成骨下游基因的差异.对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天斑马鱼予以成骨代表性的两个基因Runx2a和sp7进行原位杂交,比较野生型的幼鱼相关成骨基因表达部位的差异和信号强弱.结果 对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天斑马鱼进行铁染色,与野生型染色比较色素沉着明显变深,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第9天斑马鱼进行茜素红和阿尔辛蓝染色分别与野生型染色比较,硬骨茜素红染色变浅且肋骨及尾鳍未发育,软骨阿尔辛蓝染色未有明显改变,注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天的斑马鱼行FQ-PCR进行检测相关成骨代谢的基因表达量与野生型斑马鱼成骨基因表达比较均下调,尤其以Runx2a和sp7为显著,野生型分别为1.00790±0.011 17和1.124 50±0.17607降至处理后的0.256 39±0.016 07和0.331 47±0.074 36.对于注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天斑马鱼进行Runx2a和sp7原位杂交的信号表达弱于同期野生型的斑马鱼.结论 敲降斑马鱼的铁调素造成斑马鱼体内铁蓄积,使得斑马鱼的成骨基因降低,造成骨发育迟缓,骨量减低.
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神经调节素1调控斑马鱼肠神经系统发育的初步研究
目的 神经调节素1(neuregulin 1,NRG1)可能是先天性巨结肠症的易感基因,本实验选用斑马鱼为模式生物探讨NRG1在肠神经系统发育中的作用.方法 克隆斑马鱼NRG1基因,分析多物种NRG1同源性及进化程度;使用原位杂交技术检测NRG1在成年斑马鱼肠道及斑马鱼胚胎中的表达;通过显微注射吗啉代反义寡核苷酸建立斑马鱼NRG1敲低模型,使用原位杂交及免疫荧光技术对比观察斑马鱼表型、肠神经元分化及迁移情况.结果 NRG1进化较保守,斑马鱼NRG1与人类NRG1基因有较高同源性;在成年斑马鱼肠道中,NRG1主要位于黏膜层,在肌层和浆膜层均未见表达;胚胎中,NRG1自胚胎早期即开始表达,并表达于胚胎及幼体的肠道,表达谱与肠神经发育时相及位置相符;敲低NRG1后,胚胎出现孵出延迟,头部畸形,身体变短,躯体扭曲等表型;注射NRG1-MO后胚胎存活率为29.0％(196/677),较对照组87.5％(446/510)低;注射NRG1-MO后胚胎异常表型率为21.5％(40/186),较对照组5.5％(23/415)高;敲低NRG1后分化的肠神经元计数(3.33±1.53)个,较对照组(43.00±13.23)个少,而且肠神经元从头端至尾端的迁移过程受阻.结论 使用斑马鱼这一模式动物研究NRG1在肠神经发育中的作用,可以间接反映NRG1在人类先天性巨结肠症中的作用,NRG1可能参与斑马鱼肠神经系统发育过程.
关键词： 肠神经系统 斑马鱼 Hirschsprung病 -
H2O2对斑马鱼侧线毛细胞再生的影响
目的:探讨H2O2对幼年斑马鱼侧线毛细胞发育及损伤后再生的影响.方法:选取受精后5d(5 dpf)斑马鱼,随机分为对照组:系统水培养;H2O2组:10 μmol/L、20 μmol/L H2O2溶液培养;新霉素组:200 μmol/L硫酸新霉素处理1h后用系统水培养;新霉素+H2O2组:200 μmol/L硫酸新霉素处理1h后用20 μmol/L H2O2溶液培养;顺铂组:1 000μmol/L顺铂处理3h后用系统水培养;顺铂+H2O2组:1 000 μmol/L顺铂处理3h后用20μmol/L H2O2溶液培养.各组在H2O2处理0、24、48 h时用免疫荧光法标记侧线毛细胞并在荧光显微镜下选取P1、P7、P8三个神经丘计数.实验重复3次.结果:5～7 dpf斑马鱼P1、P7、P8三个神经丘毛细胞数量分别为(9.364±0.901,n=11),(9.645±0.598,n=15)和(9.922±0.862,n=13),两两之间无明显差异(P＞0.05);10 μmol/L、20 μmol/L H2O2处理5 dpf斑马鱼48 h后,侧线毛细胞数量分别为11.540±0.741、11.905±0.607,与对照组(10.841±0.389)比较差异均有统计学意义(P＜0.05);新霉素+H2O2 48 h组与新霉素48 h组毛细胞数分别为10.600±0.689、8.767±0.603,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01);顺铂+H2O248 h组与顺铂48 h组毛细胞数分别为5.967±1.086、5.633±1.548,2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:20μmol/L H2O2促进斑马鱼侧线毛细胞的正常生理发育,同时亦可促进斑马鱼侧线毛细胞新霉素损伤后再生,但对顺铂损伤后毛细胞再生则无促进作用.
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雷公藤多苷对斑马鱼耳毒性及其防护初步观察
目的 研究雷公藤多苷对斑马鱼的耳毒性,并初步探索其防护方法 .方法 ①使用不同浓度雷公藤多苷和二甲基亚砜饲养5 dpf(受精后5天)AB系斑马鱼,对雷公藤多苷进行浓度摸索实验,确定大非致死浓度(MNLC).②依据雷公藤多苷MNLC选取4个浓度(MNLC、1/2MNLC、1/4MNLC、1/8MNLC),并将浓度为2.5μg/ml的庆大霉素作为阳性对照组,分别饲养30尾斑马鱼24 h后,用DASPEI染料对听细胞进行荧光染色,评价雷公藤多苷的耳毒性.③观察谷胱甘肽以及不同浓度的地塞米松对雷公藤多苷10.5μg/ml(1/2大非致死浓度)诱导听细胞毒性的保护作用,将谷胱甘肽和庆大霉素2.5μg/ml作为阳性对照组.结果 ①雷公藤多苷的MNLC为21μg/ml.②雷公藤多苷剂量2.625、5.25、10.5、21μg/ml对应听细胞损伤率分别为8.9％、10.9％、46.9％、92.4％,其中,10.5μg/ml和21μg/ml与未加入雷公藤多苷的空白对照组相比,听细胞损伤率明显升高,差异均有显著统计学意义(均为P<0.01).③雷公藤多苷10.5μg/ml对听细胞损伤率达46.9％,谷胱甘肽干预后,听细胞损伤率达81.8％,两者差异有显著统计学意义(P<0.01);12.5、25、50μM地塞米松分别干预后,各组听细胞损伤率为64.2％、67.7％、60.8％,两两比较差异均无统计学意义(P>0.01).结论 雷公藤多苷有耳毒性,呈剂量依赖关系;谷胱甘肽和地塞米松对雷公藤多苷诱导听细胞毒性均无明显保护作用.
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斑马鱼听觉诱发电位检测系统的建立和应用
目的 建立斑马鱼听觉诱发电位(auditory evoked potential,AEP)检测系统.方法 设计并制作斑马鱼听觉诱发电位检测水箱;应用该系统检测和记录35条体长为10~46 mm斑马鱼的AEP,将斑马鱼分为5组:体长12~15 mm,6条;体长17~20 mm,4条;体长22~26 mm,4条;体长32~37 mm,9条;体长42~46 mm,12条.对照组为金鱼,体长38~54 mm,8条.通过麻醉实验、鱼鳔实验、噪声暴露实验并以金鱼为对照验证斑马鱼AEP检测系统的可靠性.结果 实验证实斑马鱼AEP检测系统获得的响应为听觉电生理反应;所有体长斑马鱼的听力频率范围为100 Hz~12 kHz,在发育过程中无听觉频率扩展的现象;成鱼佳听力范围为600 Hz~1 kHz,5组斑马鱼AEP阈值分别为141.7±1.32、124.8±1.31、121.8±1.49、117.8±1.09和124.4±1.87 dB w;斑马鱼AEP阈值随体长增加而变化,具有随着发育成熟AEP阈值降低,随着衰老阈值升高的特征.结论 本研究建立了稳定的斑马鱼听觉诱发电位检测系统,该系统可用于斑马鱼AEP的检测.
