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铁蓄积对斑马鱼幼鱼骨发育的影响
目的 通过对斑马鱼受精卵进行高铁环境干预,观察铁积蓄对斑马鱼幼鱼骨代谢的影响,探讨铁蓄积对于骨代谢的影响.方法 不同浓度的枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC) (25、50、100、200 mg/L)干预野生斑马鱼交配,收集鱼卵置于4个含相应FAC浓度的水环境中,每24小时予以更换含同样浓度FAC的水1次,同时设不含FAC为对照组,观察斑马鱼在不同铁环境下生存的情况.于第4天采用实时荧光定量聚合酶链反应(fluorescent quantification-polymerase chain reaction,FQ-PCR)法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和对照组基因组的成骨下游基因的差异,并测量幼鱼的铁含量及铁染色,观察铁含量变化;于第9天进行茜素红染色,比较与对照组的硬骨形态差异.结果 不同浓度FAC处理后,斑马鱼骨矿化面积成剂量依赖性降低,其中200 mg/L FAC组与对照组对比T值为40.567(P＜0.01);FQ-PCT结果显示:相关早期表达成骨代谢的基因表达量与对照组斑马鱼成骨基因表达相比显著下调,差异有统计学意义(P＜0.05);铁染色结果显示:FAC组斑马鱼色素沉着变深,与对照组相比,100和200 mg/L两组的幼鱼铁含量升高[(21.5±3.4) μg/Lvs.(12.5±3.6)tμg/L,(22.8±2.9) μg/Lvs.(12.5±3.6) μg/L],差异有统计学意义(P＜0.05);茜素红染色结果显示:与对照组相比,FAC组硬骨染色变浅且肋骨及尾鳍未发育.结论 高铁环境下造成斑马鱼体内铁蓄积,使斑马鱼成骨基因降低,造成骨发育迟缓,矿化障碍.
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锌指结构Osterix对骨骼发育影响的研究进展
间充质细胞在骨化形成骨的过程中,其原基会分泌一些Hedgehog,Wnt和FGF家族和TGF-β的转录因子用于调控和起始早期骨骼相关基因的表达,研究这些早期调控因子对于研究期成骨代谢十分重要,锌指结构Osterix基因作为重要的成骨细胞特异性转录因子越来越被人们重视,研究其基因的作用及其相关的机制,利于我们进一步了解成骨代谢和成骨相关性疾病:本文围绕Osterix的发现和功能,Osterix对小鼠中骨骼发育和成骨细胞的影响,Osterix对人类中骨骼的发育影响的研究以及Osterix的突变与人类骨骼疾病的关系方面进行阐述.目前相关Osterix的综述多集中关注于其对成骨细胞功能的调控.本文主要集中在于对于Osterix在动物和人体骨骼发育的影响的相关报道,进而进一步了解Osterix与人类骨骼疾病的相关的关系.本综述旨在拓展了Osterix作为成骨细胞重要调控因子对于在体的动物和人类骨骼发育的认识.
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锂盐对骨代谢的影响及其促进成骨研究现状
[目的]锂盐作为精神科用药应用于临床已有半个世纪的历史,长期用药过程中显示其安全性,同时也表明,锂盐通过促进成骨代谢,抑制破骨代谢,提高骨量及骨密度从而降低骨折风险.锂盐对骨代谢的影响主要是对成骨代谢的影响,而成骨代谢一直是股骨头坏死、骨质疏松症、骨缺损、骨折愈合等治疗研究的热点.本文主要综述了锂盐对骨代谢的影响以及锂盐促进成骨研究现状.
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斑马鱼铁调素过表达对成骨代谢的影响及其机制
目的 通过对斑马鱼受精卵进行显微注射启动铁调素蛋白表达的mRNA(信使核糖核酸),使其铁调素基因过表达,观察铁调素过表达后对斑马鱼的骨代谢的影响,探讨铁调素过表达对于骨代谢影响的机制.方法 以受精后0.5h斑马鱼的受精卵为模型,予以铁调素的mRNA显微注射受精卵,将注射后的幼鱼于第4天进行提取蛋白,进行Westem blot法鉴定后,对注射铁调素的mRNA后的幼鱼于第4天进行铁染色,与野生型比较观察铁含量变化,对注射铁调素的mRNA后的幼鱼于第4天分别进行茜素红染色,与野生型比较硬骨的形态差异;对注射铁调素的mRNA后的幼鱼于第4天提取的cDNA采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和野生型基因组的成骨下游基因的差异.结果 对注射铁调素的mRNA后第4天斑马鱼进行铁染色,与野生型染色比较色素沉着明显变浅,对铁调素的mRNA后第4天斑马鱼进行茜素红与野生型染色比较,硬骨茜素红染色变浅且肋骨及尾鳍未发育,注射铁调素的mRNA后第4天的斑马鱼做定量FQ-PCR进行检测相关成骨代谢的基因表达量与野生型斑马鱼成骨基因表达比较均下调,尤其以Runx2a和Runx2b为显著,野生型分别为1.069±0.023和1.023±0.021降至处理后的0.256 ±0.016和0.422 ±0.078(P =0.000).结论 过表达斑马鱼的铁调素造成斑马鱼体内铁缺少,使得斑马鱼的成骨基因降低,造成骨发育迟缓,骨量减低.
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铁调素对敲降斑马鱼中抑制成骨代谢的影响
目的 通过对斑马鱼受精卵进行显微注射剪接吗啉环反义寡核苷酸,使其铁调素基因敲降,观察铁调素表达抑制后对斑马鱼骨代谢的影响,探讨铁调素抑制对于骨代谢影响的机制.方法 以受精后0.5h斑马鱼的受精卵为模型,予以不同浓度的剪接吗啉环反义寡核苷酸显微注射受精卵,将注射后的幼鱼于第4天进行提取RNA,反转录成cDNA,进行鉴定后得到适当浓度.在浓度为25 mg/L的剪接吗啉环反义寡核苷酸注射条件下,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第4天进行铁染色,与野生型比较观察铁含量变化,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第9天分别进行茜素红和阿可辛蓝染色,与野生型比较硬骨和软骨的形态差异;对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后的幼鱼于第4天提取的cDNA采用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法检测相关成骨代谢的基因表达,比较和野生型基因组成骨下游基因的差异.对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天斑马鱼予以成骨代表性的两个基因Runx2a和sp7进行原位杂交,比较野生型的幼鱼相关成骨基因表达部位的差异和信号强弱.结果 对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天斑马鱼进行铁染色,与野生型染色比较色素沉着明显变深,对注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第9天斑马鱼进行茜素红和阿尔辛蓝染色分别与野生型染色比较,硬骨茜素红染色变浅且肋骨及尾鳍未发育,软骨阿尔辛蓝染色未有明显改变,注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天的斑马鱼行FQ-PCR进行检测相关成骨代谢的基因表达量与野生型斑马鱼成骨基因表达比较均下调,尤其以Runx2a和sp7为显著,野生型分别为1.00790±0.011 17和1.124 50±0.17607降至处理后的0.256 39±0.016 07和0.331 47±0.074 36.对于注射剪接吗啉环反义寡核苷酸后第4天斑马鱼进行Runx2a和sp7原位杂交的信号表达弱于同期野生型的斑马鱼.结论 敲降斑马鱼的铁调素造成斑马鱼体内铁蓄积,使得斑马鱼的成骨基因降低,造成骨发育迟缓,骨量减低.
