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基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法
目的 建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原.方法 以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法.用该法检测PCT重组抗原,通过SigmaPlot分析该法的低检测限.结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+ 75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml.结论 铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度.
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不同型号仪器产前筛查hAFP、游离hCGβ测定结果的可比性研究
目的 了解不同型号仪器产前筛查人血清甲胎蛋白(hAFP)、游离人绒毛膜促性腺素β(hCGβ)测定结果的可比性.方法 随机抽取妊娠15～20周妇女血清标本84例,各分成2份,一份用Auto DELFIA 1235型自动时间分辨荧光分析仪(简称全自动仪)进行检测,并以此仪器为参考仪器;另一份用WALLAC VICTOR2 TMD 1420型半自动时间分辨荧光分析仪(简称半自动仪)进行检测,并比较2台仪器测定结果的差异及唐氏综合征(Down′s)和神经管缺陷(NTD)高风险检出情况.结果 84例血清标本经全自动仪和半自动仪检测,hAFP结果分别为45.73±18.26(41.76～49.69)U/mL和46.74±19.17(42.58～50.90)U/mL;游离hCGβ的结果分别为15.62±11.54(13.12～18.12) ng/mL和14.38±11.13(11.97～16.80)ng/mL.2种不同型号仪器产前筛查结果间差异有统计学意义(P<0.01);2台仪器检测结果的相关系数(r)均> 0.975(P<0.001).2台仪器分别检测84例血清标本,均检出Down′s高风险2例和NTD高风险1例,2台仪器检测结果差异无统计学意义(P＝1.000).结论 半自动仪用于产前筛查时,筛查结果符合临床要求,但与全自动仪相比还存在一定的系统误差(SE),需要加强对各种影响因素的控制.
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Eu标记RT-PCR检测丙型肝炎病毒RNA
目的采用一种新的铕螯合物BHHCT,制备高灵敏度荧光标记物,建立检测丙型肝炎病毒(HCV)RNA的方法.方法采用柱层析纯化的方法抽提血清中HCVRNA.以5＇端带有生物素的引物进行RT-PCR Tth酶一步法扩增,通过固定于微孔板上的捕获探针与带有生物素的PCR扩增产物杂交后,利用标记有铕的链霉亲合素与生物素的特异性结合,将铕连接到待测核酸上,在特定波长的激发光激发下发出荧光,进行检测.结果铕标记检测法与酶标法的变异系数、敏感性、特异性分别为10.43%、100%,100%与16.25%,94%,100%.结论Eu标记RT-PCR Tth酶一步法检测HCV RNA,具有敏感、特异、快速、重复性好、不受环境因素影响和无溴乙锭污染等优点,可望取代酶标法及电泳法.
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HIV-1整合酶抑制剂体外筛选方法研究进展
整合酶是HIV基因表达和复制所必需的酶,而且宿主细胞内不存在该酶的类似物.因此,HIV-1整合酶已成为设计、筛选抗HIV药物的理想靶点.迄今为止,Raltegravir仍是唯一上市的HIV整合酶抑制剂,而且临床上也已经出现耐药问题.研发新一代整合酶抑制剂非常必要.高通量、高灵敏度、简单易行的筛选方法是研究开发新一代HIV-1整合酶抑制剂的关键.目前,HIV-1整合酶抑制剂筛选方法有多种,各有优缺点,该文将对文献报道的整合酶抑制剂体外筛选方法的新进展做一介绍.
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子宫肌壁间妊娠误诊为子宫肌瘤1例
患者,女,29岁,因阴道不规则流血4个月于2002年4月1日入院.患者以往月经规律,G1P1,4个月前因闭经2个月,用药物治疗后月经来潮(药名不详).之后一直阴道不规则流血,量少,色深江,伴臭味,无腹痛、腹胀,3月28日在外院行宫腔镜加诊刮,病理报告:子宫内膜轻度增生.妇科检查:外阴阴道无异常,宫颈光滑,子宫平位,左后壁有一5cm大小质硬突起,无明显压痛,双附件未及异常.实验室检查:肝功(-),血Rt:HGB 94g/L,WBC 3.42×109/L,N 64.2%,心电图,胸透均正常,彩超示:子宫左侧壁探及一5.0cm×5.1cm肌核样回声,拟诊为子宫肌瘤.入院诊断:子宫肌瘤.于2002年4月5日在硬膜外麻醉下行子宫肌瘤剥除术,手术所见:子宫左后壁可见一直径5cm大小质硬突起,界限不清,表面无包膜,与正常肌层结合尚疏松,内部散在暗红色烂絮状坏死组织,位于左侧肌壁间,分离中穿透内膜,行病灶切除术.手术顺利,出血约100ml,切除组织送快速病理,报告为送检组织见绒毛,子宫肌壁间妊娠.术后第5天查血β-HCG 1.71μ/L(时间分辨荧光法),术后病人情况良好,7天切口拆线出院,嘱其2周后门诊复查血β-HCG,以防滋养细胞病变.
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时间分辨荧光法检测宫颈脱落细胞p16INK4a蛋白用于宫颈肿瘤筛查
目的 应用时间分辨荧光法(TRFIA)检测宫颈脱落细胞p16INK4蛋白,将其应用于宫颈肿瘤筛查. 方法 搜集2015年1月-2016年5在荆门市第一人民医院病理科进行宫颈组织学活检并进行过TCT和/或DNA倍体分析检测标本,宫颈脱落细胞离心甩片进行TCT检测,Feulgen染色行DNA倍体分析,TRFIA方法检测p16INK4a蛋白. 结果 694例标本中组织病理学诊断宫颈炎性病变501例,宫颈肿瘤性病变193例,包括低级别上皮内病变(LSIL) 83例、高级别上皮内病变89例(HSIL)、鳞状细胞癌(SCC)21例.TCT检测筛查宫颈肿瘤敏感性为76.68％,特异性为87.03％;DNA倍体分析检测敏感性84.97％(优于TCT,x2=4.280,P=0.039),特异性73.45％(低于TCT,x2=29.105,P＜0.001).TRFIA检测p16INK4a筛查宫颈肿瘤敏感性为86.01％,与DNA倍体分析相似(x2=0.084,0=0.773),优于TCT检测(x2=5.532,P=0.019),且特异性达92.42％,亦优于TCT检测(x2=7.889,P=0.005). 结论 时间分辨法检测宫颈脱落细胞p16INK4a蛋白用于宫颈肿瘤筛查,敏感性及特异性均较好.如果试剂盒商品化,还具有操作简便、成本低廉、能用仪器自动化检测并给出客观判读结果的优点.
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3 种方法检测 HBsAg 弱阳性结果比较
目的 了解时间分辨荧光(TRFIA)法、酶联免疫吸附试验(ELISA)法及胶体金免疫层析试验(GICA)等检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)弱阳性标本结果 的差异.方法 用TRFIA法检测HBsAg为弱阳性的血清标本100份和阴性血清标本101份,分别用ELISA及GICA方法 检测HBsAg含量,对检测结果 进行比较分析.结果 TRFIA法HBsAg弱阳性标本100份中,ELISA法检测阳性97例,符合率97.0%,特异性96.0%;GICA法检测阳性83例,阳性符合率83.0%,特异性95.0%.ELISA 法与TRFIA法检测阳性率间差异无统计学意义(P＞0.05),但GICA检测阳性率分别低于ELISA法及TRFIA法(P＜0.05).结论 ELISA法检测低浓度HBsAg标本灵敏度与TRFIA法相似,但GICA法灵敏度低于TRFIA法及ELISA法,GICA法检测存在一定的漏检率.
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HBV-M定量与HBV-DNA检测的相关性研究
目的:探讨HBV-M定量与HBV-DNA检测的相关性.方法:采用时间分辨荧光定量法(TRFIA)和荧光定量PCR(FQ-PCR)法对360例疑似乙肝患者进行HBV-DNA和HBV-M定量检测.结果:HBeAg(+)组患者血清HBVDNA检出率为95.17%,平均拷贝数为106.53±1.45/ml,HBeAg(-)组患者血清HBV-DNA检出率为53.49%,平均拷贝数为104.52±1.60/ml,HBeAg(+)组的HBV-DNA阳性率,拷贝数明显高于HBeAg(-)组(P＜0.05, P＜0.01).HBsAg(-)组患者仍有HBV-DNA阳性者.结论:单凭血清学标志物模式难以判断HBV的复制程度及传染性强弱,定量检测HBV-DNA能真实反映HBV复制情况,对乙型肝炎的诊断及防治提供客观依据.
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甲胎蛋白变异体L2在唐氏综合征筛查中的应用
目的：探讨甲胎蛋白（AFP）变异体 L2（AFP‐L2）在孕妇唐氏综合征筛查中的意义，为其在临床应用提供依据。方法选取250例健康孕妇及22例唐氏综合征孕妇采集血清标本，采用功能磁球分离捕获AFP‐L2，采用时间分辨荧光免疫法检测AFP及AFP‐L2水平并计算AFP‐L2百分率（AFP‐L2％）。结果唐氏综合征孕妇血清AFP水平[（20．2±4．2）ng／mL]低于健康孕妇血清AFP水平[（46．7±19．9）ng／mL]，差异有统计学意义（P＜0．05）；唐氏综合征孕妇血清AFP‐L2％高于健康孕妇，差异有统计学意义（P＜0．05）。结论检测孕妇血清AFP水平及AFP‐L2％的变化可作为唐氏综合征筛查的一项指标。
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胃蛋白酶原检测在浅表性胃炎患者中的临床应用研究
目的：探讨胃蛋白酶原Ⅰ（PGⅠ）和胃蛋白酶原Ⅱ（PGⅡ）与浅表性胃炎的关系。方法选择浅表性胃炎患者228例和健康体检人群2705例，分别检测PGⅠ和PGⅡ，比较2组之间的差异。对浅表性胃炎患者根据炎症强度或炎症活动性进行分组，分析PGⅠ和PGⅡ与炎症强度和炎症活动性的关系。结果浅表性胃炎患者血清 PGⅠ和 PGⅡ水平分别为（235．0±146．2）ng/mL和（22．3±14．8）ng/mL，均显著高于健康体检人群[PGⅠ为（154．3±62．1）ng/mL 和 PGⅡ为（15．9±11．0）ng/mL]，差异均有统计学意义（P＜0．05）。浅表性胃炎弱阳性组、阳性组、强阳性组血清PGⅠ水平分别为（175．5±90．9）、（230．1±148．2）、（270．4±146．6）ng/mL，表现出升高的趋势，阳性组PGⅠ水平显著高于弱阳性组，差异有统计学意义（P＜0．05）；PGⅡ水平分别为（16．3±6．8）、（19．9±13．9）、（25．1±9．2）ng/mL，阳性组血清PGⅡ水平显著高于弱阳性组，强阳性组显著高于阳性组，差异均有统计学意义（P＜0．05）。活动性胃炎患者血清PGⅠ、PGⅡ水平分别为（263．6±131．7）ng/mL和（24．7±9．8）ng/mL；非活动性胃炎患者血清PGⅠ、PGⅡ水平分别为（217．7±145．3）ng/mL和（18．6±13．3）ng/mL，2组患者PGⅠ和PGⅡ水平差异均有统计学意义（P＜0．05）。结论浅表性胃炎患者血清PGⅠ和PGⅡ均显著高于健康体检人群，并随着炎症强度和炎症活动性的增强而升高。
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两种方法检测低浓度乙型肝炎病毒表面抗体的探讨
目的 探讨对低浓度乙型肝炎(下称乙肝)病毒表面抗体(抗-HBs)定性与定量检测方法的差异.方法 采用酶免疫测定(EIA)一步法、时间分辨荧光法(TRF)、Axsym雅培试剂来测试抗-HBs.结果 采用EIA一步法对低浓度抗-HBs标本进行测定显示,阴性37例,阳性21例;再用TRF法进行复查,阴性标本37例中有3例呈弱阳性,阳性标本21例中有2例呈阴性;以上5例结果不一致标本,采用美国Abboutt公司生产的Axsym雅培试剂检测显示,与TRF法一致.结论 标志物提倡使用EIA二步法酶联试剂及定量方法,改善定性和定量检测结果差异性问题,小限度避免结果上的差异,减少医患之间矛盾.
关键词： 乙型肝炎病毒表面抗体 时间分辨荧光法 酶免疫测定 -
三种方法检测胃蛋白酶原Ⅰ的比较及临床应用
目的 探讨时间分辨荧光法(TRFIA)、化学发光免疫分析法(CLIA)和酶联免疫吸附法(ELISA)检测胃蛋白酶原Ⅰ (PGⅠ)的相关性,及其临床实用性.方法 在TRFIA法检测的临床标本中随机选择88份,分别用CLIA法和ELISA法再次检测PGⅠ,分析三种方法检测结果的相关性;对体检人群、消化科门诊患者和住院患者进行回顾性分析,验证TR-FIA法检测PGⅠ对胃病筛查的可行性.结果 TRFIA法(Y)与CLIA法(X),ELISA法(X)PGⅠ检测结果均呈显著正相关(r分别为0.992 8和0.995 0,P＜0.05),三种方法检测结果的相对偏差(SE％)均＜10％;体检人群、消化科门诊患者、消化科住院患者的血清PGⅠ水平分别为156.0±63.8 ng/ml,197.8±113.8 ng/ml,269.5±156.5 ng/ml,三者差异具有统计学显著性意义(P＜0.05).结论 TRFIA法检测PGⅠ结果可靠、操作方便,未来可能用于胃病患者的筛查或辅助诊断.
