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基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法
目的 建立一种基于时间分辨荧光纳米颗粒的磁分离均相免疫分析方法并用于检测降钙素原(PCT)重组抗原.方法 以PCT单克隆抗体偶联铕离子荧光微球为检测抗体,另一株PCT单克隆抗体偶联生物素作为固相抗体,建立一种通过表面修饰有链霉亲和素的磁珠分离铕离子荧光微球-检测抗体-降钙素原-固相抗体-生物素复合物的均相免疫分析方法.用该法检测PCT重组抗原,通过SigmaPlot分析该法的低检测限.结果 PCT重组抗原的标准曲线匹配二次函数,函数方程为Y=19170.12+ 75493.74X-26.00X2(r=0.9986),PCT重组抗原检测灵敏度为0.04 ng/ml.结论 铕离子荧光微球可作为标记物应用于磁分离均相免疫分析方法,并在PCT重组抗原检测中获得较高的检测灵敏度.
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适体在均相检测中的应用
核酸适体是通过指数式富集法配体进化(SELEX)技术从人工合成的DNA或RNA随机库中筛选出来的,能够与目标分子进行高亲和性和高特异性结合的寡核苷酸序列[1-2].适体,经常被称作"合成抗体",可以在疾病的诊断和治疗方面与抗体相媲美:适体与靶物质结合具有很高的亲和力,解离常数可达nmol,甚至pmol水平,有时甚至优于抗体;适体的靶分子广泛,包括蛋白质、多糖、金属离子、核酸或病原微生物,理论上,适体可以从任何靶分子得到,包括毒性和非免疫原性复合物;而且适体稳定性强,易于被各种化学标记物修饰,可广泛应用于生物技术不同领域,包括基础研究、药物的研发和纯化过程、临床诊断等[3].适体可以固定或不固定的配体方式分别用于非均相或均相检测中.大多数传统的诊断方法建立在配体或受体固定的基础上.这些检测方法费时费力,操作繁杂,不适于自动化分析.近国内外学者相继建立均相检测方法,简单,易实行,快速并且可自动化.本文对适体在均相检测中的应用进行综述.
