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藏药羌活鱼的CO Ⅰ分子鉴定
对动物线粒体基因CO Ⅰ进行PCR扩增及双向测序,得到羌活鱼及其混伪品无斑肥源和截趾虎的CO Ⅰ基因序列.通过序列分析比对,根据序列差异设计特异性引物SJYW1,SJYW2,改变退火温度及循环数以得到特异性的反应条件.结果表明,当复性温度为54℃,25个循环时,正品羌活鱼在约350 bp处有明显扩增带,而无斑肥源和截趾虎没有扩增带.该实验具有较高的特异性、重复性,可用于羌活鱼的鉴别.
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基于ITS2序列鉴别前胡和紫花前胡药材及其混伪品
为应用ITS2序列对前胡、紫花前胡药材及其混伪品进行DNA条形码鉴定研究,该文依据国家药典委员会公布的《中药材DNA条形码分子鉴定指导原则》,PCR扩增前胡、紫花前胡及其混伪品的ITS2序列并进行双向测序.经Codon-Code Aligner V 3.7.1对测序峰图进行校对拼接,采用MEGA5.0软件分析相关数据.结果表明:前胡药材的ITS2序列长度为229 ～230 bp,种内变异较小,平均K2P遗传距离为0.005.紫花前胡药材的ITS2序列长度为227 bp,种内无变异.前胡、紫花前胡药材与其混伪品的种间平均K2P遗传距离分别为0.044,0.065.紫花前胡的种间小K2P遗传距离明显大于其种内的大K2P遗传距离.小距离法和NJ树鉴定结果表明前胡、紫花前胡均能与其混伪品明显区分.因此,ITS2序列可有效鉴别前胡、紫花前胡药材及其混伪品.
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《中药鉴定学》辅助教学软件的研制与应用
计算机辅助教学（Computer Assisted Instruction），简称CAI，是一种新兴的教学技术，利用计算机强大的数据管理功能、多媒体支持功能和极为方便的交互功能，以数字方式存储、加工、传输、呈现学科教学内容和教学过程中的图、文、声、像、动画以及活动影像，辅助教师教学和学生学习。随着计算机技术的快速发展，目前CAI已被广泛应用于各个教学领域。 《中药鉴定学》是中药专业的一门专业课程，主要论述中药的基原、产地、采收加工、药材性状、显微构造、化学成分、理化鉴别、功效以及中药类似品、混伪品的鉴别，需要学生熟悉中药的原植物、药材形态和组织构造等内容，因此非常适合用计算机多媒体技术来表现。《中药鉴定学》辅助教学软件是在原“中药数据库”软件的基础上［1］，以全国统编教材《中药鉴定学》为蓝本，收载了书中的几乎全部的中药以及部分的混伪品种，重点突出中药实物图像，提供多媒体的、可视化的、良好交互的辅助教材。
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基于ITS2序列鉴别牡丹皮药材及其混伪品
该研究应用ITS2序列鉴别牡丹皮药材及其混伪品,以期探索牡丹皮药材准确鉴别的新方法.提取牡丹皮及其混伪品的DNA,目标片段经PCR扩增后测序,通过CodonCode Aligner V3.7.1对测序序列进行质量分析和拼接,基于MEGA5.0中的K2P模型计算牡丹皮与其混伪品的种内、种间遗传距离及构建系统聚类树.牡丹皮ITS2序列长度为227 bp,种内大K2P距离为0,它与各混伪品的种间小K2P距离为0.041,种间平均K2P距离为0.222.由NJ树可知:不同产地来源的牡丹皮药材个体聚为一支,自展支持率为99％,呈现出明显的单系性,能很好地与其混伪品芍药、川赤芍、白鲜皮、朱砂根区分开来.应用ITS2序列可以准确鉴别牡丹皮药材及其混伪品,该方法可以作为传统鉴别方法的有效补充.
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基于ITS2和psbA-trnH序列对细小种子类药材车前子的鉴定比较
为考察ITS2序列和sbA-trnH序列对车前子药材及其常见混伪品的鉴定能力,该研究对车前子2个基原物种及7种混伪品共71份样本进行了研究.采用MEGA 5.1对获得的ITS2和sbA-trnH进行序列比对,计算种内和种间kimura2-parameter(K2P)遗传距离,并构建系统发育树.结果显示,车前和平车前的ITS2序列长度分别为199,200 bp;两者的ITS2序列种内大K2P遗传距离均小于与混伪品的小种间K2P遗传距离;基于ITS2序列构建的NJ树中,车前、平车前及其混伪品都表现出良好单系性,都能相互明显区分.表明ITS2序列能将车前子药材与混伪品进行很好的区分.车前和平车前的psbA-trnH序列长度均为340 bp,两者的psbA-trnH序列种内大K2P遗传距离小于与混伪品的小种间K2P遗传距离;基于psbA-trnH序列构建的NJ树结果显示,除大车前外,车前子药材与其余混伪品可以明显区分.因此,ITS2序列作为DNA条形码,车前子及其混伪品具有良好的鉴别能力,对保障车前子用药安全具有重要意义.
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凉茶药材鸡蛋花及其混伪品的DNA条形码鉴定
该研究应用ITS2序列作为DNA条形码鉴定凉茶药材鸡蛋花及其混伪品,共收集48份药材和基原植物样本,提取基因组DNA,通过PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,经CodonCode Aligner拼接注释获得序列,然后应用MEGA5.0比对ITS2序列,计算种内和种间遗传距离,构建系统进化NJ树进行鉴定.结果表明,鸡蛋花ITS2序列长度为244 bp,种内遗传距离为0 ～0.016 6,远小于其与混伪物种间的遗传距离0.320 8 ～0.650 4,NJ树结果显示鸡蛋花与其混伪品均可准确区分.因此,应用ITS2条形码能够准确、有效地鉴别凉茶药材鸡蛋花及其混伪品,为鸡蛋花药材的鉴定提供了一种新的分子手段,为其使用安全提供了有力保障.
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蕨类药材石韦及其混伪品的psbA-trnH序列鉴定
为考察sbA-trnH序列鉴定蕨类药材的可行性,该研究以蕨类药材石韦及其混伪品作为研究对象,对其106份样品提取基因组DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增其叶绿体sbA-trnH序列,并采用Mega6.0软件进行多序列比对,计算种内及种间K2P遗传距离,采用大似然法(ML)构建系统聚类树.结果表明:石韦药材3个基原植物的psbA-trnH序列种内大遗传距离均小于其与混伪品的种间小遗传距离;ML树显示石韦药材可与其混伪品明显分开;psbA-trnH序列可作为蕨类药材的DNA条形码,能准确、稳定鉴定蕨类药材石韦及其混伪品.
关键词： 石韦 DNA条形码 sbA-trnH序列 混伪品 蕨类 -
白术与苍术及其混伪品DNA条形码鉴定研究
药材白术与苍术为苍术属植物,为常用健脾之要药,但二者功效不完全相同,古代对二者未进行区分,现代用药也容易将其混用,为了确保用药安全,该文采用ITS2序列对药材白术与苍术及其混伪品进行DNA条形码鉴定研究.白术与苍术的3个基原物种(苍术、关苍术和朝鲜苍术)ITS2序列均为229 bp.13条白术的序列仅在98 bp处有C-G变异,平均GC含量为69.42％;4条苍术序列无变异位点;关苍术与朝鲜苍术的种内大K2P距离均为0.013.白术、苍术、关苍术和朝鲜苍术种内大K2P距离均小于与混伪品的种间小K2P距离.邻接(NJ)法构建的系统聚类树,白术、朝鲜苍术序列能各自聚为一支,关苍术与苍术聚为一支,但都能与混伪品明显分开.ITS2序列在药材白术与苍术及其混伪品的鉴定方面具有很好的鉴别效果.
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基于COI序列的水牛角及其易混伪品DNA条形码鉴定研究
水牛角作为犀角的代用品是急症用药安宫牛黄丸的主要成份,近年来常有混伪品流入市场,急需建立有效鉴定方法.本研究共收集155份原动物及市售水牛角样品,通过优化DNA提取方法,PCR扩增、双向测序、序列拼接获得153条COI序列.93份原动物COI序列经条形码间隔法和建树法核验后纳入中药材DNA条形码动物药材数据库,利用中药材DNA条形码鉴定系统(www.tcmbarcode.on)对62份市售水牛角药材进行鉴定.除2份市售药材无法获得COI序列外,54.8％的市售药材为水牛角,29％的市售药材为牦牛角.本研究表明牦牛角为市售水牛角药材主要伪品来源,DNA条形码技术可用于区分水牛角及其易混伪品,应加强市场监管,以确保急症用药临床疗效.
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基于ITS全序列分析的重楼常见混伪品鉴定研究
目的:利用ITS (internal transcribed spacer)全序列对重楼常见混伪品进行分子鉴定.方法:对研究材料进行PCR扩增并双向测序,所得序列用Clustal W软件进行多重排定.序列变异位点采用PAUP4.Ob1O进行统计分析,并构建大简约法(MP)树.结果:各样本的ITS序列长度为622 ～ 639 bp,其中ITS1序列有74个变异位点,多于ITS2区和5.8s区.系统发育树上显示不同来源的样本根据亲缘关系的远近各聚一支,在序列比对图中能找到重楼混伪品的鉴别位点.结论:ITS序列能够将正品重楼与其常见混伪品样品进行快速区分,该方法可为鉴定中药重楼提供科学依据与方法参考.
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砂仁及其近缘药用植物的高效薄层色谱指纹图谱研究
目的 对砂仁及其近缘药用植物的挥发油成分进行高效薄层色谱指纹图谱研究,以期解决砂仁的专属性鉴别,并为其质量控制提供依据.方法 采用高效薄层色谱法,控制相对湿度为67％,环己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯(13:2:2)为展开剂,5％香草醛硫酸溶液显色,于可见光下检视,薄层色谱图用Chromap 1.5色谱软件进行分析.结果 建立了由9个特征斑点构成的砂仁挥发油类成分的高效薄层色谱指纹图谱,并指认出主要成分乙酸龙脑酯.通过HPTLC指纹图谱考察,不同存放时间及不同产地的砂仁药材质量参差不齐;常见砂仁混伪品间质量差别显著;砂仁及姜科其他近缘种常用药用植物挥发油类成分的化学组成亦差异明显.结论 该方法可以有效地鉴别砂仁,并评价其质量.
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茅莓根及其混伪品的DNA条形码鉴定研究
目的 茅莓根与同科属其他物种存在混用现象,为保证安全用药,本实验利用ITS2序列对茅莓根及其混伪品进行鉴定研究.方法 提取茅莓及其混伪品的DNA,经PCR扩增后测序,通过CodonCode Aligner V3.7.1对测序序列进行质量分析和拼接,基于MEGA5.1中的K2P模型计算茅莓根及其混伪品的种内、种间遗传距离并构建系统聚类树.结果 茅莓ITS2序列比对后长度为212 bp,种内大K2P遗传距离为0.014,存在3个变异位点,平均GC含量为57.42％.基于ITS2序列构建NJ树,茅莓及其混伪品能够表现出良好的单系性,均能相互明显区分.从药材市场购买的23份茅莓根样品,DNA提取和扩增成功率为100％,采用NJ树分析,其中13份药材样品与茅莓聚为一支,其余10份属于其他物种.结论 茅莓及其混伪品鉴定难题可用ITS2条形码技术解决.
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凉茶药材布渣叶及其混伪品的DNA条形码鉴定
目的 探索一种新的鉴定凉茶药材布渣叶及其混伪品海南破布叶和山苦茶的方法,为其市场监管及用药安全提供保障.方法 该研究选用ITS2序列作为DNA条形码鉴定凉茶药材布渣叶及其混伪品,共收集了56份药材及其基原植物样本,通过提取其基因组DNA,PCR扩增ITS2序列并进行双向测序,运用CodonCode Aligner V3.7.1软件对测出的序列进行校对拼接后,采用MEGA6.0软件进行分析,运用此软件中的K2P模型计算布渣叶及其混伪品的种内、种间遗传距离,构建系统进化NJ树进行分析.结果 布渣叶ITS2序列长度为237 bp,种内遗传距离为0～0.036,远小于其与混伪品间的遗传距离0.155～0.404,NJ树结果显示,布渣叶与其混伪品均可准确区分.结论 基于ITS2序列的DNA条形码技术可准确、有效地鉴定凉茶药材布渣叶及其混伪品,为布渣叶药材的鉴定提供了一种新的分子鉴定手段,为其市场监管及用药安全提供了有力保障.
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基于COI条形码的海马药材及其混伪品分子鉴定
目的 以线粒体COI序列为DNA条形码,建立准确鉴定海马药材正品来源的方法.方法 通过对获得的海马药材及其混伪品21个物种211条COI序列,进行种间、种内序列变异分析、DNA Barcoding Gap分析和NJ(Neighbor-Joining,邻接法)系统发育树构建和分析.结果 海马药材正品来源线纹海马、刺海马、大海马、三斑海马和小海马(海蛆)的小种间距离均大于大种内距离,具有明显的DNA Barcoding Gap,在NJ系统发育树上各自聚为独立的支,能与混伪品相互区分.结论 COI序列作为DNA条形码能准确鉴定海马药材及其混伪品,对保障海马临床用药安全具有重要意义.
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基于ITS2序列的降香药材及其混伪品的分子鉴定研究
目的 应用ITS2序列对降香药材及其混伪品进行DNA条形码鉴定.方法 以降香药材及其常见混伪品为研究对象,PCR扩增降香及其混伪品的ITS2序列并进行双向测序,利用软件MEGA5.0对ITS2序列的长度、GC含量等分析比对,基于K2P模型计算遗传距离,通过中药材DNA条形码鉴定系统和构建邻接树(NJ树)法对降香药材及其混伪品进行鉴定.结果 降香药材的ITS2序列长度为216 bp,GC含量为68.5％,种内无变异位点,降香与其混伪品的种间小遗传距离为0.009,大于降香种内大K2P距离.结论 中药材DNA条形码鉴定系统和构建邻接树均可以准确区分降香药材及其混伪品.
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凉茶药材凉粉草与混伪品的ITS2条形码鉴定
目的 建立一种准确、快速的凉茶药材凉粉草与其混伪品的DNA条形码鉴定方法.方法 本实验收集凉粉草及其混伪品共5个物种和4个变种的55份样本,提取基因组总DNA,通过PCR扩增和CodonCode Aligner软件拼接注释获得完整的ITS2序列,然后应用种内种间K2P遗传距离和系统进化NJ树分析进行物种鉴定.结果 凉粉草ITS2序列长度为232 bp,种内遗传距离为0,远小于其与混伪物种间的小遗传距离0.210 2～0.310 9;NJ树结果表明,凉粉草独成一支,与其混伪品均可准确区分.结论 基于ITS2序列的DNA条形码技术能够准确有效地实现凉粉草与其混伪品的快速鉴别,保障凉茶药材凉粉草的使用安全.
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瓦楞子及其混伪品的差热分析、X射线衍射和X射线荧光分析
目的 借助现代分析手段探讨瓦楞子及其混伪品的差异性.方法 采用差热分析法、X射线衍射法和X射线荧光分析法对瓦楞子及其混伪品进行比较分析研究,并采用聚类分析和主成分分析进行数据分析.结果 差热分析图谱分析结果表明,瓦楞子及其混伪品在50℃及高温区均呈现相同的吸热峰;X射线衍射图谱分析结果表明,瓦楞子及其混伪品均为文石型碳酸钙;X射线荧光光谱分析结果表明,瓦楞子及其混伪品元素种类及其含量大致相同.瓦楞子及其混伪品的无机元素种类和含量进行聚类分析和主成分分析,可将其分为三类,即毛蚶、密肋粗饰蚶、泥蚶、球蚶、魁蚶和舟蚶为一类,异毛蚶和结蚶分别为一类.结论 通过对瓦楞子及其混伪品的差热分析、X射线衍射和X射线荧光分析的系统比较分析研究,瓦楞子及其混伪品的在成分组成及结构方面差异性小,可为市售瓦楞子的合理安全用药提供依据.
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基于DNA条形码(ITS2)的绞股蓝与其混伪品的分子鉴定方法分析
目的 探讨基于ITS2序列的绞股蓝与其混伪品鉴定的新方法.方法 从GenBank中下载绞股蓝及其混伪品的TTS2序列,用软件MEGA4.0等进行相关数据分析,通过ITS2数据库预测ITS2二级结构,并用大简约法构建系统发育树.结果 绞股蓝与其混伪品的TTS2序列存在差异,其二级结构在4个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异,绞股蓝大种内K2P遗传距离远远小于其与混伪品的小种间K2P遗传距离,构建的系统发育树显示绞股蓝与其混伪品可明显分开.结论 基于DNA条形码的ITS2序列为绞股蓝及其混伪品的准确、简便鉴定提供了新的分子鉴定方法.
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基于DNA条形码(ITS2)的中药材防风与其混伪品的鉴定
目的 通过ITS2序列分析,对防风及其易混伪品进行鉴定,确保用药安全.方法 从GenBank数据库下载中药材防风与其混伪品的DNA条形码ITS2序列,利用MEGA 6.06软件进行比对分析,计算GC含量及变异位点、种内、种间遗传距离,并构建NJ系统发育树,应用ITS2数据库网站预测其ITS2二级结构.结果 序列分析与遗传距离结果显示,防风与其混伪品存在明显差异,基于ITS2序列的NJ树及其ITS2二级结构均可以将防风与其混伪品进行区分.结论 ITS2能够准确鉴定防风及其易混伪品,可用于中药材的快速鉴别.
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桑白皮的混淆品-构树、柘树根皮生药学鉴定研究
目的：通过对桑白皮的混淆品构树和柘树根皮的生药学研究比较，为桑白皮的鉴定提供科学的依据。并通过对混淆品构树、柘树根皮的显微鉴别性状对比，为二者后续鉴别研究提供指导意见。方法采用生药学常用鉴别方法对构树、柘树根皮的性状、显微鉴别特征进行对比研究。结果构树、柘树根皮在性状鉴别特征和显微鉴别的茎横切面、粉末特征方面具有专属性。结论对构树、拓树性状鉴别、显微鉴别的方法真实准确，鉴定结果可以作为桑白皮混淆品区分鉴定的科学依据。
