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诱导型一氧化氮合酶基因多态与脑卒中合并冠心病
目的 探讨诱导型一氧化氮合酶(NOS)2A基因多态与脑卒中合并冠心病发病的关系.方法 以rs28944190位点为遗传标记,采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片段长度多态性(RFLP)检测708例脑卒中患者和235名对照组人群NOS2A基因的多态性.结果 脑卒中组和对照组的rs28944190位点等位基因、基因型频率差异无统计学意义;以是否合并冠心病对病例组人群进行分层后,cocaphase分析表明合并冠心病的脑卒中组rs28944190位点的C等位基因频率(23.9%)较单纯脑卒中组(16.6%)明显增高(x2=5.629,P=0.018,OR=1.580,95%CI 1.083～2.306),这种差异在男性患者更加明显(x2=8.592,P=0.003,OR=1.983,95%CI 1.255～3.134).卡方检验表明合并冠心病的脑卒中组AC+CC基因型的频率(47.9%)明显高于单纯脑卒中组(30.8%,x2=10.761,P=0.001,OR=2.065,95%CI 1.34～3.19),在男性患者差异更加明显(x2=15.762,P=0.000,OR=2.985,95%CI 1.74～5.12).结论 NOS2A基因与脑卒中的发病可能无关,但可能与合并冠心病的脑卒中发病相关.
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鼠伤寒沙门菌对巨噬细胞内过氧化物酶体与诱导型一氧化氮合酶结合的诱导作用
目的 探讨鼠伤寒沙门菌感染早期巨噬细胞内过氧化物酶体及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的作用.方法用pTassC-GFP质粒转染鼠巨噬细胞RAW 264.7,以观察标记了绿色荧光蛋白的靶向沙门菌分泌的SpiC蛋白(TassC)在胞内的存在形式.用pDsRed2-Perxi和pTassC-GFP质粒共转染RAW 264.7细胞,将阳性细胞命名为RAW-DT,用pDsRed2-Perxi质粒转染RAW 264.7细胞,阳性细胞命名为RAW-D.采用Alexa Fluor 350对结合单抗的鼠伤寒沙门菌显色,用Alexa Fluor 488对iNOS进行显色,并在荧光显微镜下观察.用鼠伤寒沙门菌感染RAW-DT细胞,以观察鼠伤寒沙门菌与TassC和过氧化物酶体的关系；用鼠伤寒沙门菌感染RAW-D细胞,以观察iNOS与过氧化物酶体和鼠伤寒沙门菌的关系.结果 免疫荧光观察显示,呈现绿色荧光的TassC-GFP有膜性结构,可与标记了红色荧光的过氧化物酶体共定位；感染1h的RAW-DT胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可招募TassCGFP和过氧化物酶体；感染1h的RAW-D胞内鼠伤寒沙门菌吞噬泡可与iNOS和过氧化物酶体共定位；在1h的观察期间,一旦鼠伤寒沙门菌进入巨噬细胞,膜性小泡(SCV)周围即可募集较多过氧化物酶体.结论 野生型鼠伤寒沙门菌可诱导巨噬细胞产生iNOS,iNOS和TassC均可与过氧化物酶体结合,可能具有一定的杀菌作用.
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姜黄素预先给药对肠缺血再灌注大鼠肺损伤时iNOS活性的影响
目的 评价姜黄素预先给药对肠缺血再灌注大鼠肺损伤时诱导型一氧化氮合酶(iN-OS)活性的影响.方法 健康清洁级雌性SD大鼠24只,体重180～220 g,采用随机数字表法分为3组(n=8):假手术组(Sham组)、肠缺血再灌注组(H/R组)和姜黄素预先给药组(Cur组).采用夹闭肠系膜上动脉75 min后再灌注的方法制备肠缺血再灌注诱发大鼠肺损伤模型.于模型制备前5dCur组每天胃饲姜黄素200 mg/kg(采用生理盐水稀释),Sham组和H/R组胃饲等容量生理盐水.于再灌注4h时放血处死大鼠,取肺组织标本,称重,计算肺湿/干重(W/D)比值,光镜下观察病理学结果并行肺组织损伤评分,采用硝酸还原酶法测定NO含量,采用比色法检测iNOS的活性.结果 与Sham组比较,H/R组和Cur组大鼠肺组织损伤评分、W/D比值、NO含量及iNOS活性升高(P＜0.05);与H/R组比较,Cur组大鼠肺组织损伤评分、W/D比值、NO含量和iNOS活性降低(P＜0.05).Cur组肺组织病理学损伤程度较H/R组明显减轻.结论 姜黄素预先给药减轻肠缺血再灌注大鼠肺损伤的机制与其降低iNOS活性有关.
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辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠胸主动脉诱导型一氧化氮合酶及内皮型一氧化氮合酶表达的影响
目的 探讨辛伐他汀预处理对脓毒症大鼠胸主动脉诱导型一氧化氮合酶(iNOS)及内皮型一氧化氮合酶( eNOS)表达的影响.方法 清洁级雌性Wistar大鼠80只,4月龄,体重200～250 g,采用随机数字表法,将其随机分为4组:正常对照组(Ⅰ组,n=8)、假手术组(Ⅱ组,n=8)、脓毒症组(Ⅲ组,n=32)和辛伐他汀预处理组(Ⅳ组,n=32).Ⅱ组打开腹腔找到盲肠后还纳腹腔,缝合腹壁切口.Ⅲ组和Ⅳ组采用盲肠结扎穿孔法制备大鼠脓毒症模型.Ⅳ组制备脓毒症模型前经胃管灌注辛伐他汀20 mg/kg,1次/d,连续2周,Ⅰ组～Ⅲ组给予等容量生理盐水.Ⅱ组于假手术后6h处死动物,Ⅲ组和Ⅳ组于盲肠结扎穿孔后3、6、24、48 h分别取8只动物,处死,取胸主动脉,采用Western blot法测定iNOS和eNOS表达水平.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组iNOS和eNOS表达差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅲ组和Ⅳ组iNOS表达上调,eNOS表达下调(P＜0.05)；与Ⅲ组比较,Ⅳ组iNOS表达下调,eNOS表达上调(P＜0.05).结论 辛伐他汀预处理可下调脓毒症大鼠血管内皮细胞iNOS表达和上调血管内皮细胞eNOS表达,对血管内皮细胞功能有保护作用.
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青藤碱对大鼠肾缺血再灌注时NF-κB及iNOS水平的影响
目的 探讨青藤碱对大鼠肾缺血再灌注时NF-KB及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠72只,6～9周龄,体重180～220 g,采用随机数字表法分4组(n=18):对照组(C组)、青藤碱组(SIN组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和青藤碱+肾缺血再灌注组(SIN+I/R组).采用夹闭左肾肾蒂45 min,再灌注即刻切除右肾的方法制备肾缺血再灌注损伤模型.SIN+I/R组再灌注前30 min、SIN组于相应时点腹腔注射青藤碱60 mg/kg.于再灌注6、8和12h时,心脏穿刺采集血标本,测定血清Cr和BUN浓度.取左肾组织,光镜下观察肾脏病理学结果,采用非生物素二步免疫组织化学法检测大鼠肾脏NF-KB阳性细胞率及iNOS的表达.结果 与C组比较,I/R组和SIN+I/R组血清Cr和BUN浓度升高,肾组织NF-KB阳性细胞率升高,iNOS表达上调(P＜0.05),SIN组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R组比较,SIN+I/R组血清Cr和BUN浓度降低,肾组织NF-κB阳性细胞率降低,iNOS表达下调(P＜0.05).SIN+I/R组肾组织病理学损伤较I/R组减轻.结论 青藤碱减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制与抑制NF-KB活性,下调iNOS表达有关.
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异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶表达的影响
目的 评价异丙酚对高血压大鼠胸主动脉内皮型一氧化氮合酶(eNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响.方法 SD大鼠,雌雄各半,体重240～ 280 g,采用皮下注射去氧皮质酮的方法制备高血压模型,采用随机数字表法,将64只造模成功的大鼠随机分为4组(n＝16):高血压组(H组)、小剂量异丙酚组(P1组)、中剂量异丙酚组(P2组)和大剂量异丙酚组(P3组).P1组、P2组和P3组分别静脉输注异丙酚20、30、40 mg·kg-1·h-13 h,H组给予等容量生理盐水.分别于给药前、给药1h、3h时记录平均动脉压(MAP).给药3h时处死大鼠,摘眼球法采集血样,硝酸还原酶法测定血清一氧化氮(N0)浓度,取胸主动脉,采用RT-PCR和Western blot法测定eNOS mRNA、iNOS mRNA及其蛋白表达水平.结果 与H组比较,P1组、P2组和P3组给药3h时MAP降低,血清NO浓度升高,主动脉eNOS mRNA及其蛋白表达上调,主动脉iNOS mRNA及其蛋白表达下调,且呈剂量依赖性(P<0.05或0.01).结论 异丙酚降低高血压大鼠血压的机制与下调iNOS表达,上调血管内皮细胞eNOS表达,促进NO释放有关.
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NF-κB信号通路在异丙酚抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶基因表达上调中的作用
目的 探讨NF-κB信号通路在异丙酚抑制脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞诱导型一氧化氮合酶( iNOS)基因表达上调中的作用.方法 体外培养RAW264.7细胞,以5×105/ml密度接种于6 cm培养皿(3 ml/皿)或6孔板(2 ml/孔),采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):正常对照组(C组)、LPS组(L组)和LPS+异丙酚(LP组).C组不做任何处理；L组和LP组均加入1μg/mlLPS,LP组于加入LPS前2h加入50 μmol/L异丙酚.于LPS孵育30 min时,每组取6皿和6孔,收集细胞,分别采用免疫印迹法测定磷酸化IκB激酶(p-IKK)和NF-κB活性；于LPS孵育6h时,每组取6皿,收集细胞,测定iNOS mRNA表达.结果 与C组比较,L组p-IKK和iNOS mRNA表达上调,NF-κB活性升高(P＜0.05)；与L组比较,LP组p-IKK和iNOS mRNA表达下调,NF-κB活性降低(P＜0.05).结论 NF-κB信号通路参与了异丙酚抑制脂多糖诱导的RAW264.7细胞iNOS基因表达上调.
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诱导型一氧化氮合酶基因多态性与中国汉族人群缺血性卒中的关联性
目的 探讨诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)基因多态性与中国汉族人群缺血性卒中的相关性.方法 纳入首发缺血性卒中的患者和年龄、性别相匹配的健康体检对照者,采用Taqman探针荧光定量聚合酶链反应技术检测rs2779248 C/T和rs1137933 C/T多态性的基因型分布.结果 共纳入246例缺血性卒中患者和246名对照者.rs2779248 CC、CT和CC基因型在病例组的分布频率分别为57.7％、36.6％和5.7％,对照组为68.7％、28.0％和3.3％,病例组T等位基因频率显著高于对照组(24.0％对17.3％;P=0.015);多变量logistic回归分析显示,在校正年龄、性别、高血压、糖尿病等危险因素后,CT十TT基因型携带者缺血性卒中风险是CC基因型携带者的1.64倍(优势比1.64,95％可信区间1.07 ～2.51;P=0.022).rs1137933 CC、CT和TT基因型在病例组的分布频率分别为58.1％、37.8％和4.1％,对照组为68.3％、29.3％和2.4％,病例组T等位基因频率显著高于对照组(23.0％对17.1％;P=0.013);多变量logistic回归分析显示,在校正传统危险因素后,TT+ CT基因型携带的缺血性卒中风险是CC基因型携带者的1.60倍(优势比1.60,95％可信区间1.05 ～2.46;P=0.030).结论 iNOS基因rs2779248 C/T和rs1137933 C/T多态性与中国汉族人群缺血性卒中的发病风险有关.
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白藜芦醇对UVA照射人角质形成细胞株的保护作用及机制探讨
目的 研究白藜芦醇对UVA照射后人角质形成细胞的保护作用及其机制.方法 5 J/cm2UVA照射人角质形成细胞株HaCaT细胞后,立即予以0.01、0.1 mmol/L白藜芦醇干预,噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,半定量RT-PCR和Western印迹方法检测细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA和蛋白的表达,电镜观察细胞形态学方面的改变.结果 UVA照射组HaCaT细胞的增殖活性(A490为0.542±0.004)较未照射对照组(A490为0.889±0.083)明显下降,iNOS mRNA和蛋白的表达水平(1.532±0.041和1.331±0.046)较未照射对照组显著增加,电镜下可见典型的凋亡细胞.HaCaT细胞经UVA照射加0.01、0.1 mmol/L白藜芦醇处理后,细胞的增殖活性升高,A490为分别为0.753±0.435和0.892±0.173,iNOSmRNA和蛋白的表达水平分别为0.853±0.038/0.809±0.018和0.392±0.033/0.412±0.026,与单独UVA照射组相比,差异均有统计学意义(P<0.05),而且0.1 mmol/L白藜芦醇组作用效果更明显.另外,电镜观察UVA+白藜芦醇组未见凋亡细胞及明显的细胞坏死征象.结论 白藜芦醇对UVA照射损伤的HaCaT细胞有保护作用,其机制可能与白藜芦醇抑制UVA诱导的iNOS表达有关.
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RNA干扰诱导型一氧化氮合酶基因表达对人胆管癌细胞生长的影响
目的:探讨RNA干扰诱导型一氧化氮合酶(iNOS)基因的表达对人胆管癌细胞生长的影响.方法:针对iNOS设计并合成3种iNOS-siRNA序列(siRNA1、siRNA2、siRNA3)及阴性对照siRNA序列后,分别转染人胆管癌细胞QBC939细胞,用荧光显微镜下观察转染效率,通过iNOS mRNA与蛋白的变化分析干扰效果,选择干扰效果为明显的iNOS-siRNA序列,观察其干扰后QBC939细胞增殖、细胞周期及细胞凋亡的变化.实验以无处理的QBC939细胞为空白对照.结果:合成的3种iNOS-siRNA序列均可有效转染人胆管癌QBC939细胞,且转染后均能明显降低QBC939细胞中iNOS mRNA与蛋白的表达(均P＜0.05),其中siRNA2对iNOS的抑制作用为明显,阴性对照siRNA序列对QBC939细胞中iNOS mRNA与蛋白的表达无明显影响(均P＞0.05).转染siRNA2后,QBC939细胞增值明显降低、出现明显的G0/G1期阻滞、凋亡率明显增加(均P＜0.05);转染阴性对照siRNA序列的QBC939细胞无上述改变(均P＞0.05).结论:RNA干扰能有效降低iNOS基因在胆管癌细胞中的表达,从而抑制胆管癌细胞的增殖,并促进其凋亡.
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氯化镧对内毒素/脂多糖诱导巨噬细胞株一氧化氮合酶表达的抑制作用
目的 了解氯化镧(LaCl3)对内毒素/脂多糖(LPS)刺激的巨噬细胞诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达的影响,并探讨其机制.方法 将小鼠巨噬细胞株RAW 264.7分为空白对照组、LaCl3组、LPS组和LaCl3+LPS组.前3组细胞分别用常规培养液、含2.5 μmol/L LaCl3的培养液、含1 mg/L LPS的培养液培养24 h,LaCl3+LPS组用含2.5 μmol/L LaCl3的培养液培养24 h后,换为含1 mg/L LPS的培养液培养24 h.采用免疫细胞化学染色法检测iNOS在各组细胞中的表达强度;蛋白质印迹法检测iNOS的蛋白表达水平;反转录-PCR测定iNOS的mRNA表达水平;硝酸还原酶法测定各组细胞培养上清液中一氧化氮(NO)含量.结果 免疫细胞化学染色结果显示,iNOS主要分布于各组细胞的胞质中,空白对照组和LaCl3组荧光强度极弱;LPS组荧光强度强,阳性细胞百分率为44.4%,明显高于LaCl3+LPS组(11.8%,P＜0.05).LPS组iNOS蛋白及其mRNA表达量和细胞培养上清液中NO含量均高于其余各组(P＜0.05).结论 LaCl3可在mRNA水平和蛋白水平抑制LPS诱导的iNOS过度表达,减少NO生成,提示LaCl3能拮抗LPS诱导的iNOS过度活化.
