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肝癌缺失基因1与原发性肝癌的研究进展
肝癌缺失基因-1（DLC-1）是从原发性肝癌组织中分离出来的一种肿瘤抑制基因。它在人类多种恶性肿瘤中表达缺失或下调，是近年来研究比较热门的肿瘤抑制基因之一。本文将对DLC-1基因的结构及生物学功能作一介绍，结合目前关于DLC-1在肝癌中的新研究成果，探讨DLC-1基因在肝癌发生发展中的作用机制，并对DLC-1在肝癌中表达缺失的遗传学和表观遗传学机制进行了深入讨论。
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新的抑癌基因DLC-1
肝癌缺失基因1(DLC-1)是一种新的肿瘤抑制基因,在人体许多正常组织中呈高表达,在多种肿瘤如肝癌、乳腺癌、食管癌、宫颈癌、鼻咽癌、结肠癌、霍奇金淋巴瘤中呈低表达或缺失,其与肿瘤的发生、发展及侵袭转移关系密切.DLC-1抗肿瘤的机制有两种:依赖Rho蛋白和不依赖Rho蛋白.现就DLC-1基因的结构及生物学功能,抗肿瘤机制及其意义进行综述.
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肝癌缺失基因1在肝细胞肝癌中的表达及临床意义
目的：研究肝癌缺失基因1（deleted in liver cancer－1，DLC－1）在肝癌组织中的表达情况及与肝细胞肝癌临床病理特征的关系。方法：收集50例肝细胞癌患者术后的癌组织及相应癌旁组织的石蜡包埋病理标本及其临床病理资料，另选取10例正常肝组织标本作为对照。应用免疫组织化学法检测上述组织中DLC－1表达情况。结果：DLC－1在肝细胞癌组织中表达阳性率为44％（22／50），显著低于癌旁组织的72％（P＝0．005）和正常肝组织的100％（P＝0．001），差异有统计学意义（P＜0．05）。DLC－1的表达与癌组织病理分化程度、侵袭倾向高低及肿瘤TNM分期有关（P＜0．05），而与患者的性别、年龄、HBsAg、肿瘤大小、AFP 浓度、纤维包膜及肝硬化程度均无明显相关（P＞0．05）。结论：DLC－1在肝细胞癌组织中低表达，且与肿瘤TNM分期、侵袭倾向高低及病理分化程度有关，是肝癌预后的不良因素。
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抑癌基因DLC-1的研究进展
DLC-1(肝癌缺失基因1)是近年来被发现的一种重要的抑癌基因,目前研究发现其在多种肿瘤的发生、发展过程中产生了重要的作用.随着基因技术及分子生物技术的飞速发展,关于DLC-1基因以及与之相关的上、下游靶基因,DLC-1基因的甲基化修饰及其相互作用的信号传导通路的研究将更深入、更彻底、更清楚.通过构建肿瘤动物实验模型,我们可以对人类各种肿瘤进行去甲基化药物治疗,分析实验结果,综合评估治疗指征,为临床上对肿瘤的治疗提供理论基础及实践指导.相信在不久的将来,针对DLC-1基因在肿瘤分子生物学研究有望成为多种肿瘤诊断、治疗的突破.
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肝癌缺失基因1甲基化及其表达在二乙基亚硝胺诱导大鼠肝癌发病中的机制
目的 探讨二乙基亚硝胺(diethylnitrosamine,DEN)诱导的大鼠肝癌模型肝组织肝癌缺失基因1(DLC1)启动子甲基化及其蛋白表达的可能机制.方法 雄性Wistar大鼠,随机分为正常对照组(n=25)、模型组(n=40).除正常对照组外,模型组在1～12周饮用含DEN 80 mg/L的饮水以诱癌(每日8 mg/kg),共12周.于20周时大鼠全部剖腹取肝,观察肝脏外观,计算病死率和腹水生成率,应用MSP法检测各组肝组织DLC1启动子甲基化和非甲基化；并应用免疫组织化学法检测肝组织DLC1蛋白表达水平.结果 在20周实验结束时,正常大鼠无死亡,而模型大鼠死亡率为10％(4/40),20周时模型组腹水发生率为22.2％(8/36).至第20周,模型组成瘤率达到100％.MSP结果表明,模型组肝癌组织DLC1甲基化率达91.67％,而正常组肝组织甲基化率为12％,两者比较差异有统计学意义(P＜0.01).免疫组织化学法检测结果显示,模型组肝组织DLC1蛋白表达较正常组下调.结论 DLC1启动子甲基化及DLC1的表达下调与DEN诱导的大鼠肝癌发病密切相关,其机制值得进一步深入研究.
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miR-483-3 p对结直肠癌DLC1基因表达的影响
背景：抑癌基因表达抑制在肿瘤发生、发展过程中起重要作用。一些microRNAs可通过调节抑癌基因的表达影响肿瘤发生。目的：探讨miR-483-3p对结直肠癌肝癌缺失基因1（DLC1）表达的靶向调节作用。方法：纳入2012年10月~2013年4月南京鼓楼医院收治的结直肠癌患者16例，采用蛋白质印迹法检测癌组织及其相应癌旁非癌组织的DLC1表达，qRT-PCR检测miR-483-3p表达。构建含DLC13’非翻译区（3’UTR）的双荧光素酶报告基因质粒，在人结肠癌细胞株HCT116中验证miR-483-3p对DLC1表达的调节作用。以miR-483-3p mimic转染HEK293T细胞，采用蛋白质印迹法检测DLC1表达；以miR-483-3p mimic转染HCT116细胞，采用CCK-8实验检测细胞增殖。结果：结直肠癌组织的DLC1表达水平显著低于癌旁非癌组织，miR-483-3p表达水平显著高于癌旁非癌组织（ P<0.05）。miR-483-3p mimic可靶向结合DLC1的3’UTR而抑制其表达。转染miR-483-3p mimic的HCT116细胞增殖能力显著增强（ P<0.05）。结论：DLC1是miR-483-3p的靶基因，miR-483-3p可在转录后水平抑制DLC1表达，参与促进结直肠癌发生。
关键词： miRNA-483-3p 肝癌缺失基因1 结直肠肿瘤 表观遗传学 细胞增殖 -
肝癌缺失基因1对人卵巢癌细胞OVCAR-3增殖和迁移的影响
目的:初步探讨肝癌缺失基因1 (deleted in liver cancer 1,DLC1)对人卵巢癌细胞株OVCAR-3增殖和迁移的影响.方法:采用脂质体介导重组质粒pEGFP-C3-DLC1转染人卵巢癌OVCAR-3细胞后,RT-PCR及蛋白质印迹法检测DLC1 mRNA和蛋白的表达.MTT法、FCM法和Transwell小室法分别评价DLC1基因转染前后细胞增殖、细胞周期和细胞迁移能力的变化,蛋白质印迹法检测黏着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)和c-Jun氨基末端蛋白激酶(c-Jun NH2-terminalprotein kinase,JNK)蛋白及其磷酸化水平的变化.结果:成功转染pEGFP-C3-DLC1后,OVCAR-3细胞中可检测到DLC1 mRNA和蛋白的稳定表达.稳定转染DLC1基因后,OVCAR-3细胞的增殖和迁移能力受到明显抑制,而且停滞于G0/G1期的细胞比例增加,差异均有统计学意义(均为P<0.01).转染DLC1基因后的OVCAR-3细胞中p-FAK (Y925)和p-JNK(Thr183/Tyr185)蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.01).结论:DLC1基因转染OVCAR-3细胞后可能通过下调p-FAK (Y925)和p-JNK(Ihr183/Tyr185)蛋白表达水平,使OVCAR-3细胞停滞于G0/G1期,从而抑制OVCAR-3细胞的体外增殖和迁移能力.
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DLC1不同亚型对结肠癌细胞增殖及迁移的抑制作用
目的 探讨肝癌缺失基因1(DLC1)不同亚型对结肠癌细胞系增殖及迁移的抑制作用.方法 通过qRT-PCR检测DLC1不同亚型在17对结肠癌组织与正常组织中的表达水平;同时过表达不同亚型的慢病毒感染结肠癌细胞SW1116,通过CCK8及Transwell实验观察不同亚型对结肠癌细胞株增殖及迁移的作用.结果 DLC1不同亚型在结肠癌组织中的表达均显著低于癌旁组织;过表达DLC1能够抑制结肠癌细胞系SW1116的增殖及迁移,其中DLC1亚型2(DLC1-isoform2)的作用效果强.结论 DLC1的不同亚型在结肠癌组织中的表达均低于癌旁组织,DLC1-isoform2对抑制结肠癌细胞的增殖及迁移作用强.
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视网膜母细胞瘤中DLC-1启动子甲基化异常
目的 探讨肝癌缺失基因1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)启动子在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)中的甲基化情况及与临床参数的关系.方法 收集37例RB石蜡切片,4例正常眼部组织标本和2株RB细胞系(WERI-Rb1及Y79).用甲基化敏感性高分辨率熔解(MS-HRM)法定量检测DLC-1甲基化情况,用亚硫酸氢盐测序对其进行验证,并用RT-PCR检测WERI-Rb1和Y79细胞系中DLC-1 mRNA的表达.结果 35,1％的RB中存在DLC-1启动子甲基化,而在正常眼部组织中未发现甲基化；WERI-Rb1和Y79检测出DLC-1 mRNA表达.DLC-1启动子甲基化与肿瘤分化、伴随其他肿瘤和家族史均无显著关系,但单侧RB患者中的DLC-1甲基化率明显高于双侧患者(P＜0.05).结论 RB患者DLC-1启动子存在一定程度的甲基化,DLC-1甲基化在RB的发生、发展中具有一定的作用.
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结直肠癌血清中DLC1,p16和RUNX3基因甲基化检测的临床意义
目的 分析检测结直肠癌(CRC)患者血清肝癌缺失基因1(DLC1)、p16和RUNT相关转录因子3(RUNX3)基因甲基化状态的临床意义.方法 留取85例CRC及45例肠道良性病变患者血清标本,甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测基因启动子区域甲基化.结果 85例CRC血清中,DLC1、p16和RUNX3基因甲基化比例分别为42.4％(36/85)、44.7％(38/85)和34.1％(29/85),均显著高于良性病变组(P＜0.01).DLC1、p16和RUNX3基因甲基化与患者临床病理特征无相关性.三者联合检测可显著提高CRC检出率,并且特异性未降低.结论 血清DLC1、p16和RUNX3甲基化可望成为CRC诊断的新型分子标记,三者联合可进一步提高诊断效能.
关键词： 结直肠癌 肝癌缺失基因1 p16 runt相关转录因子3 -
5-Aza-CdR对HT29细胞DLC-1基因表达及生物学行为的影响
目的 研究去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌HT29细胞株牛物学行为及肝癌缺失基因1(DLC-1)表达的影响.方法 5-Aza-CdR处理HT29细胞72 h;RT-PCR检测DLC-1 mRNA的表达;MTT、平板克隆实验、Transwell小室实验分别检测药物处理前后的HT29细胞增殖、侵袭、迁移能力的变化.结果 经5-Aza-CdR作用后,HT29细胞DLC-1恢复表达,细胞增殖活性降低,侵袭能力与迁移能力下降.结论 5-Aza-CAR可抑制HT29细胞增殖、侵袭、迁移,可能与DLC-1基因恢复表达有关.
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ROCK通路在DLC-工基因调控人结肠癌HT29细胞侵袭中的作用
目的 观察肝癌缺失基因1(DLC-1)对HT-29细胞侵袭能力的影响.方法 用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-DLC-1转染HT-29细胞;应用Rho激酶(ROCK)特异性抑制剂Y27632处理HT-29细胞;Western blot检测p-MLC蛋白表达;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.结果 野生型HT-29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系;与对照组及空载组HT-29细胞相比,转染组和ROCK抑制剂组p-MLC蛋白表达均下调,细胞侵袭能力受到抑制(P<0.05).结论 转染DLC-1基因可能通过抑制ROCK活性,从而抑制HT-29细胞的侵袭能力.
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DLC1对人卵巢癌细胞H0-8910增殖和迁移能力的影响
目的 探讨肝癌缺失基因1(DLC1)基因对卵巢癌细胞H0-8910增殖和迁移能力的影响及其作用机制.方法 脂质体介导DLC1 cDNA转染H0-8910细胞,Western blotting检测DLC1、FAK、FAK-Y925蛋白的表达,MTT法、划痕实验测定转染前后HO-8910细胞增殖及迁移能力的变化.结果 DLC1cDNA转染成功细胞中表达DLC1蛋白,FAK蛋白表达水平无明显变化,FAK-Y925蛋白表达水平明显下调.MTT法、划痕实验结果显示,DLC1 cDNA转染后H0-8910细胞增殖和迁移能力明显降低.结论 DLC1 cDNA导入细胞后可能通过下调FAK-Y925磷酸化水平,可抑制卵巢癌细胞体外增殖和迁移能力.
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肝癌缺失基因-1和黏着斑激酶基因对肿瘤OVCAR-3细胞增殖和凋亡的影响
目的 观察肝癌缺失基因-1(DLC-1)和黏着斑激酶(FAK)对肿瘤OVCAR-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 构建DLC-1表达载体、FAK特异性小发卡RNA(shRNA)载体和FAK-shRNA联合DLC-1表达载体,分别转染OVCAR-3细胞,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot检测OVCAR-3细胞中DLC-1和p-FAK(Y397)的表达,细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞仪检测细胞增殖和凋亡,Western blot检测磷酸化细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERK1/2)的表达.结果 DLC-1表达增加或/和FAK基因沉默后,OVCAR-3细胞增殖显著受抑(0.737±0.094,P＜0.05)、凋亡明显增加(15.21±1.05)％ (P＜0.05),p-ERK1/2表达水平显著降低(0.151±0.010,P＜0.05).结论 DLC1可能通过调节FAK及其下游的ERK信号通路参与肿瘤细胞的增殖和凋亡.
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肝癌缺失基因1的表达及其甲基化与甲状腺乳头状癌的关系
目的 探讨肝癌缺失基因1 (DLC1)在甲状腺乳头状癌(PTC)及癌旁甲状腺组织(PCTT)蛋白表达、启动子甲基化及其临床意义.方法 采用免疫组织化学(IHC)、Westem blot和甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法检测40例PTC及PCTF标本.IHC检测蛋白表达部位,Western blot检测蛋白表达差异,MSP法检测启动子甲基化.结果 DLC1蛋白位于甲状腺细胞的胞质,PCTT阳性率为90.0％(36/40),高于PTC阳性率[47.5％ (19/40)] (x2=26.36,P＜0.05)；Western blot显示DLC1蛋白在PTC中的表达水平(0.18 ±0.12)低于PCTT(0.33 ±0.14),差异有统计学意义(P＜0.05).PT℃中DLC1蛋白表达率与肿瘤大小、淋巴结转移状况、TNM分期相关(x2=18.050,15.132,7.020,P＜0.05).PTC中DLC1甲基化率为40.0％(16/40)高于PCTT中DLC1甲基化率[12.5％ (5/40)],差异有统计学意义(x2=7.813,P ＜0.05).PTC中DLC1甲基化与肿瘤大小相关(x2=12.857,P＜0.05).DLC1甲基化与DLC1蛋白表达相关(r=0.526,P＜0.05).结论 启动子甲基化可能是DLC1基因失活的一个重要的因素,其在PTC的发生和演进中起重要作用.
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癌基因AKT2和肝癌缺失基因-1的表达与大肠癌生物学行为的关系
目的 探讨癌基因AKT2和肝癌缺失基因-1(DLC-1)与大肠癌生物学行为的关系.方法 收集70例大肠癌患者手术切除的肿瘤组织和癌旁组织,运用免疫组织化学法检测AKT2和DLC-1在组织中表达水平.结果 AKT2在癌旁组织中阳性表达率为21.43％ (15/70),在大肠癌组织中阳性表达率为60.00％ (42/70),两者差异有统计学意义(P＜0.01),DLC-1在癌旁组织中阳性表达率为84.29％ (59/70),在大肠癌组织中阳性表达率为31.43％(22/70),两者差异有统计学意义(P＜0.01).AKT2表达水平与大肠癌组织学分化程度、浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05),DLC-1表达水平与大肠癌浸润深度、TNM分期、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 检测AKT2和DLC-1有助益于评估大肠癌生物学行为.
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肝癌缺失基因1和磷酸化粘着斑激酶蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义
目的 研究肝癌缺失基因1(DLC1)和磷酸化粘着斑激酶(FAK)在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理指标的关系,加深对乳腺癌癌变和转移分子机制的理解.方法 采用免疫组化ABC法检测61例乳腺癌和30例乳腺良性纤维瘤及其周围正常组织中DLC1和磷酸化FAK蛋白的表达情况；并结合临床病理资料分析二者在乳腺癌中表达的意义,采用SPSS10.0统计学软件分析数据.结果 DLC1在乳腺癌、良性组织和正常组织中的表达率分别为34.43％,80.00％和76.67％ (P＜0.001),磷酸化FAK在3组中的表达率为77.05％,33.33％和26.67％(P＜0.001).并且DLC1和磷酸化FAK蛋白在乳腺癌组织中的表达呈明显负相关（Kappa值=-0.4591）；DLC1和FAK均与乳腺癌的发生、分期、PR和淋巴结转移关系密切(P＜0.05),而与乳腺癌的年龄、家族史、分型、雌激素(ER)和CerbB-2无明显相关性(P＞0.05).结论 DLC1低或无表达和磷酸化FAK高表达与乳腺癌的发生发展有关,DLC1和磷酸化FAK的表达与孕激素受体表达有关,有可能成为乳腺癌早诊和预后判断的候选标志物.
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DLC-1启动子甲基化与垂体腺瘤侵袭性的关系
目的：研究肝癌缺失基因1(DLC-1)启动子区CpG甲基化与人垂体腺瘤侵袭性的关系，探讨垂体腺瘤发生发展的分子机制。方法收集84例垂体腺瘤标本和6例尸检时获得的正常人垂体组织标本，利用实时荧光定量PCR的方法检测标本中DLC-1的表达水平，利用特异性聚合酶链反应(MSP)检测DLC-1基因启动子区CpG甲基化状态。结果 DLC-1在垂体腺瘤标本中表达下降。6例正常人垂体组织标本中DLC-1基因启动子区无甲基化，49例侵袭性垂体腺瘤标本中有19例发生甲基化(38.78%)，35例非侵袭性垂体腺瘤标本中有3例发生甲基化(8.57%)，52例功能性垂体腺瘤标本中有15例发生甲基化（28.84%），32例无功能性垂体腺瘤标本中有7例发生甲基化(21.88%)。DLC-1在侵袭性垂体腺瘤组与非侵袭性垂体腺瘤组之间发生甲基化率比较差异有统计学意义（P<0.05)，而在功能性垂体腺瘤组与无功能性垂体腺瘤组之间发生甲基化率比较差异无统计学意义(P>0.05)。DLC-1启动子甲基化与垂体腺瘤DLC-1表达量呈负相关(r=-0.67，P=0.01)。结论 DLC-1基因启动子甲基化跟垂体腺瘤的发生发展有关，可作为垂体腺瘤侵袭性发生的重要标志。
