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肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体基因对人大肠癌细胞株HT29作用的研究
目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)相关的凋亡诱导配体基因(TRAIL)用于人大肠癌细胞株HT29基因治疗的实验研究.方法将重组腺病毒载体(Ad)介导的TRAIL基因作用于人大肠癌细胞株HT29,通过相差显微镜、MTT比色法和流式细胞仪,研究分析其对HT29细胞作用的效果.结果Ad/GT-TRAIL能引起HT29细胞出现明显的形态学改变,对HT29细胞的生长抑制率和凋亡诱导率分别为54.3%和11.1%;联合Ad/PGK-GV16后,生长抑制率和凋亡诱导率均显著提高(P<0.05),分别为82.7%和24.6%.结论 Ad/GT-TRAIL能有效诱导HT29的凋亡从而抑制HT29的生长,联合Ad/PGK-GV16后将显著提高其疗效.
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Rho A蛋白通路在DLC-1基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制
目的: 探讨Rho A蛋白通路在DLC-1(frequently deleted in liver cancer-1)基因调控人结肠癌HT29细胞周期中的作用及其机制.方法: 构建pcDNA3.1-DLC1质粒载体,脂质体法转染HT29细胞,筛选稳定细胞系;pull-down方法分析Rho A蛋白活性;实时定量PCR检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1、p21的表达变化;流式细胞仪检测细胞周期分布.结果: 野生型人结肠癌HT29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系.与野生型及空载组HT29细胞相比,转染组细胞Rho A蛋白活性下降;Cyclin D1表达下调, p21表达上调;G1期及凋亡细胞数增加,而G2期细胞数下降.结论: 转染DLC-1基因引起人结肠癌HT29细胞Rho A蛋白活性下调,进而可能通过对Cyclin D1、p21表达的调控使细胞周期G1期阻滞并诱导凋亡,同时分裂前期细胞数减少,细胞增殖受抑.
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5-Aza-CdR对HT29细胞DLC-1基因表达及生物学行为的影响
目的 研究去甲基化药物5-氮杂胞苷(5-Aza-CdR)对人结肠癌HT29细胞株牛物学行为及肝癌缺失基因1(DLC-1)表达的影响.方法 5-Aza-CdR处理HT29细胞72 h;RT-PCR检测DLC-1 mRNA的表达;MTT、平板克隆实验、Transwell小室实验分别检测药物处理前后的HT29细胞增殖、侵袭、迁移能力的变化.结果 经5-Aza-CdR作用后,HT29细胞DLC-1恢复表达,细胞增殖活性降低,侵袭能力与迁移能力下降.结论 5-Aza-CAR可抑制HT29细胞增殖、侵袭、迁移,可能与DLC-1基因恢复表达有关.
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ROCK通路在DLC-工基因调控人结肠癌HT29细胞侵袭中的作用
目的 观察肝癌缺失基因1(DLC-1)对HT-29细胞侵袭能力的影响.方法 用脂质体法将重组质粒pcDNA3.1-DLC-1转染HT-29细胞;应用Rho激酶(ROCK)特异性抑制剂Y27632处理HT-29细胞;Western blot检测p-MLC蛋白表达;Transwell小室实验检测细胞侵袭能力.结果 野生型HT-29细胞DLC-1基因表达呈阴性,经转染获得DLC-1稳定表达细胞系;与对照组及空载组HT-29细胞相比,转染组和ROCK抑制剂组p-MLC蛋白表达均下调,细胞侵袭能力受到抑制(P<0.05).结论 转染DLC-1基因可能通过抑制ROCK活性,从而抑制HT-29细胞的侵袭能力.
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表没食子儿茶素没食子酸酯对结肠癌HCT-8和HT29细胞株的作用及对Notch1与Notch2的基因表达的影响
表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶多酚中含量高、活性强的单体,具有抗癌作用[1]。本研究旨在观察EGCG对结肠癌细胞HCT-8和HT29细胞增殖的抑制作用及对Notch1与Notch2基因的影响,探讨其抑癌机制。一、材料与方法1.噻唑蓝(MTT)比色法检测EGCG对细胞增殖的抑制作用:将细胞接种于96孔板中,将孔中添加终质量浓度为0 mg/L(对照组),10、20、35 mg/L EGCG(实验组)的完全培养基,孵育24、72 h,加入CCK-8反应液,酶标仪读数后,计算抑制率。
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慢病毒介导小干扰RNA沉默人结肠癌HT-29细胞芳香烃受体核转位蛋白基因的研究
目的 获取有效沉默人结肠癌HT29细胞的芳香烃受体核转位蛋白基因(ARNT)的短发卡RNA(shRNA)重组慢病毒.方法 构建4组表达ARNT-shRNA的慢病毒载体和1组无效干扰慢病毒载体并测序鉴定.用合成的5组重组慢病毒转染HT29细胞,通过克隆稀释扩大培养获取5组稳定转染细胞株,实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和Western blot检测沉默效率.结果 成功构建4组表达ARNT-shRNA的重组慢病毒,其中1组(LV-ARNT-RNAi-3)转染HT29细胞后能有效沉默ARNT基因,mRNA相对表达下降70％ (P＜0.05),蛋白水平表达下降60％ (P＜0.05).结论 重组慢病毒LV-ARNT-RNAi-3可以下调人结肠癌HT29细胞ARNT基因的表达.
关键词： 慢病毒 芳香烃受体核转位蛋白 RNA干扰 HT29细胞株 -
“10-23”脱氧核酶对突变型p53基因表达的抑制作用
目的 探讨“10-23”脱氧核酶(“10-23”DZ)抑制突变型p53基因表达的效应.方法 设计合成针对mp53( R273H,CGT＞ CAT)的“10-23”DZ:p53DZ7、p53DZ9、p53DZ11及硫代修饰物p53DZ 11-s.在无细胞体系观察“10-23”DZ对p53RNA的切割效应.经脂质体将DZ转染进HT29结肠癌细胞株,RT-PCR检测各种DZ对HT29细胞mp53 mRNA的影响;免疫细胞化学及Image Pro Plus 4.5图像分析系统检测mp53蛋白,观察各种DZ及ASO对mp53蛋白表达的影响.结果 p53DZ11和p53DZ11-s在无细胞体系能有效切割mp53 RNA,而对wp53RNA的作用弱.在细胞内p53DZ11-s在浓度为250nM时,能下调HT29细胞mp53 mRNA水平和mp53蛋白表达.结论 针对mp53的273突变点所设计的p53DZ11、p53DZ11-s在细胞外均能有效切割mp53 RNA,在HT29细胞内p53DZ11-s也能抑制mp53mR-NA及mp53蛋白的表达.
