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沙立度胺对肺腺癌细胞系血管生成因子的影响
血管生成是肿瘤生长与转移的基础,抗血管生成是肿瘤治疗的新策略,沙立度胺(thalidomide,商品名:反应停)是20世纪50年代问世的镇静药物,因其致畸作用而被淘汰,但近来发现它具有免疫调节及抗血管生成活性,对于实体瘤的治疗具有重要意义,但有关肺癌治疗的研究却极少.我们采用逆转录-PCR与免疫细胞化学方法检测沙立度胺处理前后肺腺癌细胞系A549碱性成纤维细胞生长因子(bFGF )与血管内皮生长因子(VEGF)表达水平,旨在探讨沙立度胺对肺腺癌细胞系血管生成因子表达的影响.
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UCN-01提高肺腺癌细胞放射敏感性的实验观察
目的观察p53基因突变的人肺腺癌细胞系973照射后G2期阻滞以及药物7-Hydroxystaurosporine(UCN-01)是否能去除此阻滞并增加放射敏感性,探讨UCN-01增加放射敏感性的机制.方法用细胞培养和流式细胞仪技术分析X射线照射对973细胞周期(特别是G2期阻滞)的影响,观察UCN-01对放射引起的G2期阻滞的影响.应用细胞克隆形成实验观察UCN-01对放射敏感性的影响.结果照射明显导致973细胞G2期阻滞,未照射组(对照组)及2、4和6Gy组的G2期比例分别为14.8%、42.8%、55.9%和60.5%,G2期阻滞的程度与照射剂量呈正相关.UCN-01能够去除放射引起的973细胞G2期阻滞,50、100、200和400nmol/L UCN-01组G2期比例由对照组的35.4%分别降至23.5%、19.6%、16.3%和12.4%,UCN-01去除G2期阻滞的程度与药物浓度呈正相关.UCN-01能明显降低放射后973细胞的存活分数,200和400nmol/L UCN-01组的放射增敏比分别为1.13和1.31.结论 UCN-01对973细胞有放射增敏作用,机制可能与UCN-01去除放射引起的G2期阻滞有关.
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X线反复照射人肺癌细胞系Anip973后的生物特性变化
目的 通过x线反复照射体外培养的肺腺癌细胞系Anip973,初步探寻其生物学特征的变化.方法 应用高能x线反复照射肺腺癌Anip973细胞15次,4 Gy/次,共60 Gy.对亲代和子代细胞采用克隆形成实验测定其放射敏感性.根据生长曲线计算Anip973R细胞及其亲代细胞倍增时间,用流式细胞术检测细胞周期分布特征.结果 与亲代相比Anip973R细胞D0、Dq、SF2均增大,a值减小,分别为1.61、1.29、0.532、0.312,而Anip973细胞分别为1.53、0.42、0.339、0.3524.Anip973R细胞放射耐受性增高,其细胞倍增时间较亲代细胞延长3 h.细胞周期显示G1、S期比例分别增高、减少(P《0.05),G:+M期比例相似(P>0.05).结论 Anip973细胞经X线反复照射后与亲代细胞相比放射耐受性增高、细胞倍增时间延长.
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nm23-H1小干扰RNA增强紫杉醇脂质体对肺腺癌细胞化疗的敏感性
目的 探讨抑制nm23-H1基因的表达后,紫杉醇脂质体对人肺腺癌A549细胞化疗敏感性的影响.方法 以人肺腺癌A549细胞为研究对象,将其分为nm23-H1-小干扰RNA(siRNA)转染组和未转染组.采用Western blot法检测两组A549细胞中nm23-H1蛋白的表达情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测紫杉醇脂质体对两组A549细胞的生长抑制率,以流式细胞仪检测A549细胞的凋亡和细胞周期的变化.结果 转染nm23-H1-siRNA后,A549细胞中nm23-H1蛋白的表达水平明显降低.紫杉醇脂质体作用48 h后,A549细胞的生长抑制率随药物浓度的升高而升高,且转染组细胞的抑制率更高.当紫杉醇脂质体浓度≥5 μg/ml时,转染组的抑制效率明显高于未转染组(均P＜0.05).转染nm23-H1-siRNA后,A549细胞的凋亡率[(65.62±4.36)%]较未转染组明显增加[(43.78±5.56)%,P＜0.05],S期和G2/M期细胞所占的比例则有所下降[S期:分别为(15.73±3.21)%和(25.56±4.01)%,P＜0.05;G2/M期:分别为(31.91±3.12)%和(39.41±4.21)%,P＜0.05].结论 nm23-H1基因与紫杉醇脂质体的化疗抵抗有关,抑制nm23-H1基因的表达可以增强紫杉醇脂质体的化疗敏感性.
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人肺腺癌细胞系A549线粒体差异蛋白质组学研究
目的 研究人肺腺癌细胞系A549与人正常支气管上皮细胞系16HBE线粒体蛋白质组的差异表达.方法 传代培养细胞系A549及16HBE,用线粒体提取试剂盒获取细胞线粒体蛋白质,进行双向凝胶电泳,运用液相色谱串联质谱分析技术筛选出A549和16HBE细胞系线粒体间表达水平显著差异的蛋白,所得结果通过Data Analysis软件标峰,用MASCOT进行结果搜索和数据分析.结果 双向电泳结果显示A549、16HBE细胞系线粒体存在差异的蛋白质点共41个,3倍以上差异的16个,A549细胞系中表达上调的15个,表达下调的26个,其中3倍以上差异表达上调的7个,表达下调的9个.运用液相色谱串联质谱技术鉴定出A549细胞系线粒体表达上调的蛋白质2个:AAA+ ATP酶家族结构域蛋白3B、tRNA鸟嘌呤糖基转移酶,表达下调的蛋白质7个:热休克蛋白75、复合物Ⅲ亚基1、复合物Ⅲ亚基2、鸟氨酸氨基转移酶、异柠檬酸脱氢酶亚基α、SLP-2、抗增殖蛋白.结论 应用亚细胞蛋白质组学方法,鉴定出肺腺癌细胞系线粒体差异表达蛋白,为阐明肺腺癌发生的分子机制、筛选早期诊断标志物提供了有益的线索.
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雌激素对肺腺癌细胞系A549中NOK表达量的影响
目的:探讨雌激素对肺腺癌细胞系A549中NOK基因表达的影响,为研究雌激素与NOK基因在非小细胞肺癌转移中的作用提供参考依据.方法:用MTT法绘制肺腺癌细胞系A549的生长曲线,确定A549的指数增长期;用浓度梯度为1× 10-10-1×10-6 mol/L的雌激素在指数增长期刺激细胞,12h后换液,24 h后提取总RNA及总蛋白,用q-RT-PCR及Westem-blot检测各组细胞中NOK表达量.结果:A549细胞系的指数增长期为第3天;雌激素刺激细胞之后,NOK表达量普遍增高,低浓度时,NOK表达量随雌激素浓度增高而增高,高浓度时,NOK表达量随雌激素浓度增高而降低,但依然高于正常水平,组间有统计学差异,其中,当浓度为1× 10-8 mol/L时,NOK表达量高.结论:雌激素在一定浓度范围内可以促进肺腺癌细胞系A549中NOK基因的表达.
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肺腺癌高、低转移细胞系Anip973、AGZY83-a中野生型p53基因过表达研究
目的探讨野生型p53基因及其表达产物p53蛋白在恶性肿瘤基因治疗中的作用.方法应用腺病毒为载体将野生型 p53基因转入高、低转移的肺癌细胞系Anip973、AGZY83-a,并且对各组转染细胞进行生长曲线、原位末端标记、Western-blotting等技术检测分析.结果野生型p53蛋白的过表达对上述肺腺癌细胞系均呈现出较强的生长抑制作用,野生型p53蛋白的过表达对高转移肺癌细胞系Anip973的抑制作用明显高于低转移细胞系AGZY83-a.结论外源性野生型p53基因的过表达,可以有效抑制上述肿瘤细胞的增殖,同时对高转移肺腺癌细胞系的抑制作用更加显著.
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人肺腺癌多药耐药细胞系的建立
目的:体外建立人肺腺癌多药耐药细胞系.方法:以泰素为诱导药,人肺腺癌细胞系SPC-A1为诱导对象,逐步增加泰素浓度冲击,以一定浓度的泰素维持培养共计24周后,光镜观察细胞形态,用MTS方法进行细胞耐药检测.结果:SPC-A1/TAX形态不规则,对阿霉素、长春地辛、足叶乙甙、顺铂、5-氟脲嘧啶、泰素(紫杉醇)六种抗癌药物有不同程度的耐药性.结论:建立了相对稳定多药耐药细胞系SPC-A1/TAX,用于研究其多药耐药性的机制及逆转等下游实验.
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中药金安粉针剂对人高、低转移性肺癌细胞系作用的异质性研究
目的:研究中药金安粉针剂对体外培养人肺高转移性巨细胞癌系(PG)和人低转移性肺腺癌细胞系(PAa)作用的异质性及其机制.方法:体外培养PG、PAa细胞,分为三组:对照组(C)、顺铂组(DDP)和金安组(JA).采用四唑盐(MTT)法测定金安对PG、PAa的杀伤作用;提取了肿瘤细胞的DNA,电泳检测是否有DNA Ladder出现,以及用活细胞双荧光法观察肿瘤细胞的核形变化和应用TUNEL法检测了两种细胞的凋亡指数,此外用流式细胞仪检测了金安对PG、PAa细胞周期的影响以及应用Annexin V染色检测了两种细胞的早、晚期凋亡率.
