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hTRT反义基因对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响
目的:探讨人端粒酶蛋白催化活性亚单位(human telomerasereversetranscriptase,hTRT)反义基因治疗对胃癌细胞端粒酶及凋亡相关基因表达的影响.方法:采用基因重组的方法,构建hTRT正、反义真核表达载体,并用脂质体导入SGC-7901胃癌细胞株,检测转染细胞增殖能力、细胞周期、端粒酶活性、端粒酶亚单位及bd-2,c-myc基因表达的变化.结果:成功构建hTRT正、反义真核表达载体,并导入胃癌细胞,筛选出稳定表达正、反义hTRT的阳性克隆7901-S,7901-AS1和7901-AS2.反义细胞增生能力明显减弱,凋亡细胞和G0/G1期细胞增多,增生指数下降,端粒酶活性下降,端粒酶亚单位hTRT的表达减少,而TP1,hTR无明显变化,进一步研究发现bd-2和c-myc基因的表达在转录和翻译水平均明显下调.结论:hTRT和c-myc,bcl-2基因的调节作用是相互的,反义hTRT基因可以通过下调胃癌细胞hTRT、c-myc、bcl-2基因的表达,一方面降低端粒酶活性,另一方面一定程度增加凋亡细胞的比率,从而抑制细胞的生长.
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急性白血病端粒酶亚单位的表达与端粒酶活性的相关性研究
人端粒酶由人端粒酶RNA(hTR)、端粒酶相关蛋白质(TP1/TLP1)和人端粒酶催化亚单位(hTERT/hEST2)三部分组成[1],研究表明,TP1 mRNA在不同组织的表达无显著差异,hTR的转录水平对端粒酶活性的影响尚存争议,而hTERT 转录水平的表达在端粒酶活性高的癌组织中明显升高.我们通过检测成人急性白血病患者和正常人的端粒酶亚单位在转录水平和蛋白水平的表达及端粒酶的活性,探讨急性白血病的端粒酶活性的调节因子,为进一步寻找急性白血病的治疗靶点提供理论依据.
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端粒酶亚单位与肝细胞肝癌的关系
端粒酶是肿瘤的特异性标志之一，端粒酶活性的检测是诊断肿瘤的有用方法。随着端粒酶亚单位的相继克隆成功，人端粒酶DNA成分(hTR)、人端粒酶逆转录酶(hTERT)及端粒酶相关蛋白(hTEP)等亚单位基因表达的改变及调控是诊断及治疗肝细胞肝癌的有效方法。
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肝细胞癌组织和正常肝组织中端粒酶亚单位的表达
目的检测肝细胞癌组织和正常肝组织中端粒酶RNA成分(human telomerase RNA component,hTR)和蛋白催化亚单位(human telomerase reverse transcriptase,hTERT) 各自表达情况.方法以反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和套式聚合酶链反应(nested-PCR)分别检测肝细胞癌组织和正常肝组织中hTR和hTERT.结果 RT-PCR反应不足以清晰检出hTR的设计扩增条带,在RT-PCR基础上进行套式PCR,则正常肝组织和肝细胞癌组织均检出hTR内引物扩增条带,只是在肝细胞癌组织中hTR表达量相对更高一些.hTERT仅在肝细胞癌组织中检出,正常肝组织中检测不到.结论 hTR在正常肝组织和肝细胞癌组织中均能检测到;hTERT与端粒酶活性间关系更密切,端粒酶的激活可能至少包括两个层次:其一是端粒酶RNA成分的上调,其二是蛋白亚单位的表达.
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抗衰老与去衰老的研究与应用
抗衰老技术(technology of anti-aging)是在衰老生物学(biology of aging)基础研究之上发展起来的.从不同的衰老学说出发进行研究,都有可能获得成功.从衰老的氧化学说出发,Lang等[1]发现,羧酸噻唑烷镁(MgTC)能大大提高果蝇、蚊子、小鼠的谷胱甘肽(GSH)含量和延长寿命.从衰老的端粒学说出发,Bodnar等[2]将端粒酶亚单位hTRT基因通过载体转入视网膜色素上皮细胞和包皮成纤维细胞,大大扩展了这两种细胞的复制寿命.从衰老的基因学说出发,Rogina等[3]发现,用P-element适当插入Indy基因,雄雌果蝇平均寿命增长约1倍(37～70d),高寿命增加了50%.上述的研究结果都有可能发展为抗衰老的药物干预或技术干预.鉴于这方面国内已有很多报道,本文不再赘述.
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人胰腺癌端粒酶亚单位的表达及其意义
目的:探讨端粒酶亚单位表达水平与人胰腺癌发生的关系,以及其表达与端粒酶活性高低的相关性.方法:应用RT-PCR、DNA测序等技术研究端粒酶亚单位在胰腺癌中的表达情况,用ELISA法检测端粒酶活性.结果:24例胰腺癌标本中hTERTmRNA表达阳性率为83.3%,而癌旁组织为8.3%,两者有显著性差异.hTERTmRNA的表达是人端粒酶活性表达的关键性因素.hTR及TP1mRNA在癌组织及癌旁组织中的表达无统计学差异,与端粒酶活性的表达无相关性.结论:端粒酶参与了胰腺癌的发生;hTERTmRNA表达水平的上调可能在胰腺癌形成过程中起重要作用.
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端粒、端粒酶及其亚单位在鼻咽癌中相互作用的研究
目的探讨端粒、端粒酶及其亚单位在鼻咽癌发病中的作用.方法采用Southern杂交等分子生物学方法对鼻咽癌端粒、端粒酶及其亚单位进行检测.结果鼻咽癌平均端粒长度(MTL)为4.5±2.3kb,端粒酶阳性表达为88.0%～100%.对照组MTL分别为14.6±2.8Kb和15.8±3.8Kb,癌旁组织端粒酶阳性表达为64.7%, 对照组为0～8.7%.此外,端粒酶活性增高与晚期鼻咽癌及其颈淋巴结转移也有密切关系.结论端粒及端粒酶与鼻咽癌的发生、发展及转移可能有密切关系.
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端粒酶催化亚单位在肿瘤特异基因治疗作用中的研究
0引言在已知的6个[1]端粒酶亚单位(hTR、TEP1、hTERT、hsp90、p23、dyskerin)中,以端粒酶催化亚单位(human Telomerase Reverse Transcriptase,hTERT)在调控端粒酶(Telomerase)活性中具特异性,二者相关性大于80%.近年研究表明,hTERT仅仅在端粒酶阳性的肿瘤细胞中高表达,在端粒酶阴性的细胞中不表达.hTERT的这种作用特点与其结构上的新认识有关.针对以上特点,研究人员设计了以hTERT启动子为核心,调控其他候选基因(如自杀基因、凋亡基因等)作为肿瘤特异表达杀伤系统,能够特异性杀灭肿瘤细胞,而对正常细胞无作用,这一特异杀伤系统,为肿瘤基因治疗及其临床应用带来了曙光.
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端粒酶亚单位调控端粒酶活性与肿瘤细胞凋亡的研究
0 引言作为维持染色体两端端粒(Telomere)长度的端粒酶(Telomerase)与细胞永生化、恶性变有密切关系.在人体绝大多数恶性肿瘤细胞中端粒酶活性增高,而在正常体细胞中一般为阴性.端粒酶活性受包括5种端粒酶亚单位在内的体内外多种因素的调控.端粒酶活性下调,可诱导恶性肿瘤细胞出现凋亡.这为以端粒酶为靶点的肿瘤基因治疗提供了新突破点.近年发现,端粒酶活性下调诱导的凋亡调控机制涉及体内更为复杂的因素.本文就该领域内新研究作一综述.
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鼻咽癌组织端粒酶各组分基因表达的研究
目的：探讨端粒酶各组分基因在鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）组织及鼻咽慢性炎症粘膜（chronic inflammation of nasopharyngeal epithelium,CINE）组织中的表达情况。方法：利用RT-PCR方法检测鼻咽癌组织及鼻咽慢性炎症粘膜组织端粒酶各组分基因（hTR、TP1mRNA和hTERTmRNA）的表达。结果：43例NPC组织中，hTR、TP1mRNA和hTERTmRNA表达阳性率分别为90.7％、88.4％和88.4％；16例CINE组织中,hTR、TP1mRNA和hTERTmRNA表达阳性率为87.5％、87.5％和0％；仅hTERTmRNA在鼻咽癌组织中的表达显著高于鼻咽慢性炎症粘膜组织中的表达，而hTR或TP1mRNA在鼻咽癌组织中的表达和鼻咽慢性炎症粘膜组织中的表达无明显差异。表明hTR和TP1mRNA广泛存在于鼻咽癌和鼻咽慢性炎症粘膜组织中，而hTERTmRNA仅在鼻咽癌组织中表达。结论：hTERTmRNA可能在端粒酶活性调节中起重要作用；hTERTmRNA的表达水平，可作为鼻咽癌诊断指标之一。
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不同病变胃粘膜端粒酶活性及其亚单位的检测
目的：探讨端粒酶及其亚单位（TP1、hTR、hTRT）在胃粘膜癌变过程中的作用。方法：端粒酶的检测采用端粒末端重复序列扩增技术（telomericrepeatamplificationprotocol,TRAP），端粒酶亚单位的检测采用RTPCR法。结果：端粒酶阳性检出率在慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生、异型增生及胃癌中分别为24.6％(14/57)、38.9％(7/18)、37.5％(3/8)及92.3％(60/65),正常胃粘膜未检测到端粒酶活性，与以上各病变组织有显著性差异（P<0.05～0.01）,而慢性萎缩性胃炎、肠上皮化生和异型增生组织中端粒酶阳性率亦明显低于胃癌组织（P<0.01）；端粒酶的表达与临床病理指标无相关性；RTPCR定性检测发现端粒酶亚单位hTR和TP1在大多数胃粘膜中都有表达，而hTRT主要在胃癌及部分癌前组织中表达，且在胃癌中hTRT的表达与端粒酶活性之间具有明显的相关性（P<0.01）。结论：端粒酶不仅在胃癌组织中高表达，在部分癌前组织中也有表达。提示端粒酶在胃癌的发生过程中可能具有重要作用；端粒酶亚单位hTRT不仅可能作为胃癌的诊断指标，而且还可能作为胃癌基因治疗的靶点。
