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三种人类免疫缺陷病毒-1亚型分析方法的比较研究
人类免疫缺陷病毒(HIV)1型,基因具有高度变异性,其传播过程中可产生许多有相对独立的核苷酸序列的亚型;其主要群体(M群:A、B、C、D、E、F、G、H、I、J亚型)和次要群体(O群:O亚型)共11个亚型.A~H亚型间差异在22%~35%之间,而O亚型与A~H亚型间差异高达50%以上[1,2].本研究分别用基因序列测定法(GSA)、血清学(PEIA)和异源双链泳动(HMA)方法进行HIV-I亚型分析和比较.
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应用部分变性高效液相色谱法检测结核分枝杆菌的耐药基因突变
目前耐药问题给结核病的控制造成很大威胁[1].KatG、rpoB、embB、gyrA、pncA和rpsL基因在异烟肼、利福平、乙胺丁醇、氟喹诺酮类、吡嗪酰胺和链霉素的耐药中起关键作用[2].我们采用温度介导的异源双链高效液相色谱分析法(DHPLC)检测了结核分枝杆菌耐药基因的突变[3].
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扩张型心肌病和心肌炎患者的线粒体DNA突变
线粒体疾病中常见心脏受累,近几年在扩张型心肌病(DCM)患者中发现多种线粒体DNA(mtDNA)突变。我们研究了原发性DCM和急性心肌炎患儿外周血淋巴细胞中mtDNA缺失和点突变,探讨mtDNA突变与二者的关系。 一、资料与方法 1.对象:(1)DCM组:DCM患儿15例,平均年龄7.9岁,DCM诊断根据九省市心肌炎协作组1980年制定的小儿原发性心肌病诊断依据;(2)急性心肌炎组:根据第六届全国小儿心血管会议制定的心肌炎诊断标准,临床诊断为急性心肌炎的患儿(病程 < 3个月)13例,平均年龄8.0岁;(3)正常对照组:正常小儿10例,平均年龄8.1岁。 2.方法:常规苯酚/氯仿法抽提外周血淋巴细胞DNA。参照人mtDNA Cambridge顺序合成A1(3 108~3 127位) / A2(3 701~3 720位)、B1(8 286~8 305位) /B2(13 831~13 850位)和C1(同B1,8 286~8 305位) / C2(16 142~16 161位)三对PCR引物。(1)保守区3 108~3 717位检测点突变:A1、A2为引物进行PCR扩增,HET(异源双链)胶检测点突变,出现迁移速率不同的两条带者为有点突变者;(2)5 kb(8 469~13 447位)和7.4 kb(8 637~16 087位)缺失检测:分别以B1、B2和C1、C2为引物进行PCR扩增;(3)定量PCR分析:在同一PCR反应体系中同时加入A1、A2和B1、B2两对引物,A1、A2产物反映正常mtDNA含量,B1、B2产物反映5 kb缺失mtDNA的含量。用上海复日生物科技有限公司的生物电泳分析系统软件定量分析两者的相对含量。
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单链构象多态法和异源双链多态法检测P53基因突变
我们摸索了银染单链多态性技术检测P53基因突变的条件,并用异源双链多态法作为单链多态性检测的补充,结果满意,现报告如下.
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中国人Ⅰ型神经纤维瘤病基因突变分析
目的 对中国人Ⅰ型神经纤维瘤病(NF1)基因20、28、29、39号外显子进行基因突变分析及评价聚合酶链反应一单链构象多态/异源双链(PCR-SSCP/HA)技术在NF1基因诊断中的价值.方法 应用PCR-SSCP/HA技术,结合DNA测序,筛查56例患者NF1基因20、28、29、39号外显子的突变或多态性.结果 在20号外显子发现一个家系父子3人的SSCP/HA出现泳动异常,DNA测序证实为20号外显子上T→G的杂合突变即Leu1141Arg错义突变;发现1例患者28号外显子的SSCP/HA检测有泳动异常,测序证实为28号外显子5'端上游的第28位核苷酸G→T杂合;29、39号外显子未检测到泳动异常的条带.结论 联合应用SSCP/HA的方法可提高基因突变检测敏感度及检出率,NF1基因20、28、29、39号外显子不是突变热点或突变率相对较高的区域.