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华蟾素注射液联合含奥沙利铂方案肝动脉化疗栓塞治疗肝癌临床疗效观察
目的 探讨华蟾素注射液联合含奥沙利铂方案肝动脉化疗栓塞(TACE)治疗晚期原发性肝癌的临床疗效及毒副作用.方法 将51例肝癌患者随机分为两组,联合治疗组(华蟾素注射液联合含奥沙利铂方案TACE)26例,对照组(含奥沙利铂方案TACE)25例.观察患者治疗前后临床主要症状的变化.结果 联合治疗组与对照组有效率分别为65.4%和64.0%(P>0.05);联合治疗组和对照组中位疾病进展时间(TTP)分别为6.5个月和6.0个月,差异无统计学意义(P>0.05),中位总生存期(OS)分别为13个月和12个月,两组差异无统计学意义(P>0.05).治疗后联合治疗组与对照组间血清血管内皮生长因子(VEGF)、缺氧诱导因子(HIF)-1α水平差异有统计学意义(P<0.05),联合治疗组患者的体力状况改善优于对照组(P<0.05).两组治疗后不良反应发生率无差异,两组间常见毒副反应均为转氨酶升高、发热,不良反应均可耐受.结论 华蟾素注射液联合含奥沙利铂方案TACE可作为中晚期肝癌安全有效的治疗方法.
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华蟾素与子宫内膜癌HHUA细胞MMP-2和TIMP-2表达关系的研究
目的 探讨华蟾素对子宫内膜癌HHUA细胞基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和金属蛋白酶-2组织抑制剂(TIMP-2)表达的影响及临床意义.方法 体外培养子宫内膜癌HHUA细胞,以子宫内膜癌空白对照组为A组,按不同浓度的华蟾素干预后分为B、C、D组(华蟾素终浓度分别为0.25 mg/ml、2.5 mg/ml、25 mg/ml),应用SABC免疫组化法检测MMP-2和TIMP-2的表达.结果 体外培养的子宫内膜癌HHUA细胞可表达MMP-2和TIMP-2；A、B、C和D组细胞MMP-2表达分别为4.65±0.93、4.27±1.02、3.10±0.92和2.69±0.77;A、B、C和D组细胞TIMP-2表达分别为1.59 ±0.90、2.07±0.92、3.32±1.02和3.88±0.95;B组内膜癌HHUA细胞MMP-2和TIMP-2的表达无显著影响(p＞0.05)；C组子宫内膜癌HHUA细胞MMP-2的表达下降,TIMP-2的表达升高(p＜0.05)；D组与C组对子宫内膜癌HHUA细胞MMP-2和TIMP-2表达的影响无统计学差异(p＞0.05).结论 2.5mg/ml华蟾素可显著降调子宫内膜癌HHUA细胞MMP-2的表达,升调TIMP-2的表达.
关键词： 基质金属蛋白酶-2 金属蛋白酶-2组织抑制剂 华蟾蜍毒素 子宫内膜肿瘤 -
华蟾蜍毒素在大鼠体内的组织分布研究
目的 研究华蟾蜍毒素在大鼠体内的组织分布特征,为临床合理用药提供依据.方法 大鼠舌下iv 0.5、1mg/kg华蟾蜍毒素.采用HPLC法测定大鼠组织中不同时间点的药物浓度,组织生物样品用液-液萃取法处理.结果 大鼠舌下iv华蟾蜍毒素后,组织分布较快,给药后30 min,除脂肪外其余8个组织均可测到华蟾蜍毒素;给药后60 min,大部分血流丰富组织即达到药物浓度峰值,其中肝脏药物浓度高;当给药浓度成倍增加时,华蟾蜍毒素在各组织中的达峰时间并没有变化,只是相应时间点的药物浓度均略有升高,药物消除的时间也相应延长.结论 华蟾蜍毒素在大鼠组织中分布广泛,吸收和消除均较快,在脑组织中也可达到较高药物浓度.
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华蟾酥毒基诱导骨肉瘤细胞凋亡的体外实验研究
目的 研究华蟾酥毒基(cinobufagin)对多种骨肉瘤细胞系的增殖抑制和诱导凋亡作用,并探讨其相关机制.方法 不同浓度的华蟾素毒基分别处理骨肉瘤细胞系U2OS、MG63和SaO2后,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同骨肉瘤细胞系的增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期的变化,细胞核荧光染色及Annexin V/PI染色检测细胞凋亡,Western blot检测IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP、xIAP、cIAP-1、survivin及p65的表达.结果 MTT检测显示,华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞U2OS、MG63和SaO2的增殖,其抑制细胞增殖的作用呈剂量和时间依赖性,其对U2OS、MG63和SaO2细胞的48 h IC50值分别为(104.83±16.96) nmol/L、(47.07±7.5) nmol/L和(136.72±10.08)nmol/L.100 nmol/L华蟾酥毒基处理骨肉瘤细胞12 h后,流式细胞仪检测可见骨肉瘤U2OS、MG63和SaO2的GdG1期细胞比例下降,GJM期细胞比例增加,表明华蟾素毒基主要通过将细胞阻滞在GJM期,以抑制骨肉瘤细胞的增殖.进一步Hoechst 33258细胞核染色发现,华蟾素毒基可诱导骨肉瘤细胞产生典型凋亡小体,Annexin V/PI检测100 nmol/L华蟾酥毒基作用48 h后,U2OS、MG63和SaO2细胞凋亡率分别为33.6％±6.4％、36.4％±7.8％及29.3％±5.1％.表明华蟾酥毒基的抗骨肉瘤效果是通过诱导骨肉瘤细胞凋亡来实现.在探讨其诱导骨肉瘤细胞凋亡的相关机制中,通过Western blot检测发现其诱导凋亡的作用机制是通过上调IAPs和Bcl-2家族凋亡相关蛋白Bax、cleaved-PARP,下调xIAP、cIAP-1、survivin及p65蛋白来实现.结论 华蟾酥毒基可明显抑制骨肉瘤细胞株U2OS、MG63和SaO2细胞增殖,阻滞细胞在G2/M期,并诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用机制为调节IAPs和Bcl-2凋亡相关家族蛋白的活性.
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华蟾素与子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的实验研究
目的:探讨华蟾素对体外培养的子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的影响和意义.方法:体外培养内膜癌HHUA细胞,以0.25、2.5和25 g/L的华蟾素干预后,四唑盐比色试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应检测CD44s表达,transwell小室分析细胞的体外侵袭力.结果:华蟾素对内膜癌HHUA细胞的半数抑制浓度(IC50)为华蟾素生药(0.79±0.21) g/L.对照组CD44s mRNA表达为1.31±0.25、侵袭细胞数为60.50±2.52; 0.25 g/L华蟾素对内膜癌HHUA细胞CD44smRNA表达和侵袭力无影响(均P＞ 0.05)；2.5 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44smRNA表达为1.02±0.23、侵袭细胞数为30.50±3.95,与对照组比较差异有统计学意义(均P＜0.05)；25 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44s mRNA表达为0.97±0.39、侵袭细胞数为22.50±4.22,与对照组比较差异有统计学意义(均P＜0.05)；25g/L和2.5g/L华蟾素2个浓度组差异无统计学意义(均P＞0.05).结论:2.5 g/L华蟾素可抑制内膜癌HHUA细胞的侵袭性生长.
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蟾蜍毒素对S180小鼠移植瘤的抑制作用及其毒副作用的实验研究
目的探讨醇溶性蟾蜍毒素在小鼠体内对S180肿瘤细胞的抑制作用及其毒副作用.方法本研究用乙醇溶解蟾蜍分泌物原浆,采用减压蒸馏等方法进一步部分分离纯化,获得醇溶性的蟾蜍毒素混合物(ethanol extract of toad venom,EET),将其作用于S180荷瘤小鼠模型,计算肿瘤抑制率和生命延长率,同时通过血生化和病理等检测观察其对各脏器的毒副作用.结果5 mg/kg和0.5 mg/kg的EET对S180荷瘤小鼠实体瘤组织的抑瘤率分别是47.0%和34.1%(P＜0.05);对腹水瘤小鼠的生命延长率分别是46.2%和36.5%(P＜0.05);同时,0.5 mg/kg的EET可明显升高白细胞达(11±4)×109/L(P＜0.05).但EET在5 mg/kg时可引起总胆红素升高达(30±5)μmol/L(P＜0.05).结论0.5～5 mg/kg的EET可以明显抑制荷瘤小鼠体内S180肿瘤细胞的生长,但EET的剂量达到5 mg/kg时可以损伤肝脏.
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超声引导下经皮肝穿刺注射华蟾素治疗原发性肝癌伴门静脉癌栓的临床效果
目的 探讨超声引导下经皮肝穿刺注射华蟾素治疗门静脉癌栓的临床应用价值.方法 选取2009年1月-2012年3月解放军第九四医院收治的25例原发性肝癌伴门静脉癌栓患者,行超声引导下经皮肝门静脉穿刺注射华蟾素,每周3次,4～5周为一个疗程,治疗后观察患者的临床疗效及生存期,并比较其治疗前后的甲胎蛋白(AFP)、ALT水平.计量资料比较采用t检验.结果 17例门静脉癌栓患者不同程度缓解,总有效率为68％,患者AFP及ALT水平降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).治疗后随访3、6、12、24个月生存率分别为88％、76％、60％、32％.结论 超声引导下经皮肝穿刺注射华蟾素对门静脉癌栓疗效肯定,有较好的临床使用价值.
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华蟾素诱导U937细胞凋亡及其作用机制
目的:研究华蟾素诱导白血病U937细胞凋亡,探讨其可能的作用机制.方法:MTT法检测细胞存活率,瑞氏染色及荧光染色观察细胞凋亡形态学改变,琼脂糖凝胶电泳观察DNA片段化改变,TdT原位标记计算凋亡率,流式细胞术检测bcl-2表达,半定量RT-PCR检测Fas和Fas-1 mRNA水平.结果:与对照组相比,0.225～1.8 μg/mL华蟾素作用1～3 d明显抑制U937细胞生长,具有剂量-时间相关性,24 h时的IC50为1.36 μg/mL.0.9 μg/mL华蟾素作用1 d,U937细胞出现凋亡典型形态学改变;DNA电泳出现凋亡特有"梯子"条带.0.225、0.45和0.9 μg/mL华蟾素作用1 d,TdT原位标记检测凋亡率分别为4.8%、13.57%和24.33%.凋亡细胞bcl-2表达及Fas-1 mRNA水平下降,Fas mRNA水平增高.结论:华蟾素可能通过抑制bcl-2、Fas-1基因及活化Fas基因的途径来抑制U937细胞生长并诱导凋亡.
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华蟾素诱导NB4细胞凋亡及其作用机制
目的研究华蟾素(cinobufagin)对人早幼粒白血病细胞株NB4的诱导凋亡作用,并探讨可能的分子机制.方法通过细胞计数观察华蟾素对细胞的生长抑制作用,荧光染色观察细胞凋亡的形态学改变,DNA凝胶电泳观察DNA的片段化改变,流式细胞术定量分析细胞凋亡.免疫荧光结合流式细胞术检测bcl-2表达、半定量RT-PCR检测Fas和FasL的表达.结果与对照组相比,1:100～1:25浓度的华蟾素能明显抑制NB4细胞生长.经华蟾素作用后,NB4细胞出现凋亡典型的形态学改变,核浓聚、核碎裂、凋亡小体形成;DNA电泳出现凋亡特有的"梯子"条带;流式细胞术也证实凋亡的存在.在经1:100、1:50、1:25浓度的华蟾素作用2 d后,细胞凋亡率分别为12.49%、18.53%、37.76%.凋亡细胞的bcl-2的表达下调,Fas表达上调,FasL表达无变化.结论华蟾素能抑制NB4生长并诱导凋亡,可能是通过下调bcl-2的表达,增加Fas的表达来实现.
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华蟾素对原位膀胱癌大鼠的影响
目的:建立荷人膀胱癌的原位动物模型,通过磁共振成像(MRI)监测肿瘤生长过程,并利用此模型评价华蟾素抗膀胱癌作用.方法:直视下经尿道机械BALB/c裸鼠膀胱黏膜,将人膀胱癌细胞T24经尿道种植于25只裸鼠膀胱,建立荷人膀胱癌原位动物模型.以钆-二乙三胺五乙酸作为膀胱造影剂,用MRI监测肿瘤的生长,同时取裸鼠膀胱组织标本行HE染色进行病理学检奁.同法建立膀胱癌动物模型18只,分为对照组和给药组,各9只.膀胱灌注6次后,荷瘤膀胱称质量.结果:25只裸鼠在种植T24细胞后均形成膀胱肿瘤.种植后7 d,裸鼠膀胱MRI检查无明显变化,14,21,28 d MRI检查均可发现膀胱不同程度的充盈缺损,MRI图像与肿瘤实际大小吻合.病理检查显示,种植后7 d,肿瘤生长于裸鼠膀胱黏膜或浅层肌肉,14～28 d局限于肌层,35 d时侵及浆膜层.华蟾素给药组抑瘤率为46.9%.结论:成功建立了裸鼠原位膀胱癌动物模型,肿瘤生长基本模拟了人膀胱癌的发生、发展过程,MRI检查可作为对裸鼠膀胱原位肿瘤动态观察的可靠方法,华蟾素确有明显的抗膀胱癌的作用.
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华蟾毒精抗癌作用的体外研究
目的了解中药成分华蟾毒精(cinobufagin, CBG)的体外抗癌活性及其主要作用机制. 方法采用流式细胞术检测华蟾毒精对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721、人白血病细胞株HL-60的细胞毒作用;经透射电子显微镜观察CBG作用后培养的SMMC-7721及HL-60细胞超微结构的改变. 结果华蟾毒精有显著的抗癌活性;对HL-60细胞的IC50为1.25 μg*L-1 ,对SMMC-7721细胞的IC 50为2.72 μg*L-1,能非常显著地减少HL-60,SMMC-7721细胞S期DNA含量及增值指数,诱导癌细胞凋亡;透射电镜观察显示:华蟾毒精作用后,可见成片的细胞坏死,细胞凋亡,内质网肿胀、线粒体肿大呈空泡样,溶酶体增多等细胞结构改变. 〖HTH〗结论〓〖HTSS〗华蟾毒精有确切的抗癌作用,其作用产生的机制是多方面的,既能抑制癌细胞DNA的生物合成,又能诱导细胞凋亡.
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华蟾素注射治疗老年三叉神经痛56例分析
目的：探讨华蟾素外周神经分支注射治疗老年原发性三叉神经痛的疗效。方法：对56例老年原发性三叉神经痛患者进行外周神经分支注射华蟾素治疗后观察疗效。结果：48例疼痛缓解，疼痛缓解率为89．29％。结论：华蟾素三叉神经外周分支注射治疗老年原发性三叉神经痛创伤小、并发症少，效果可靠。
