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TWIST基因及其在骨肉瘤中的研究进展
TWIST是近年来新发现的一种癌基因蛋白，其被认为在包括骨肉瘤等在内的多种恶性肿瘤的发生、发展中起着重要的作用。骨肉瘤是骨恶性肿瘤中多见的一种，由间质细胞系发展而来，其生长迅速，恶性程度高，预后较差。本文主要综述TWIST基因在临床方面的意义以及其在骨肉瘤发生发展过程中的作用，将为今后骨肉瘤的诊断、治疗与科学研究提供新的方向与指导。
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白细胞介素-1β对胆囊癌细胞生长和迁移的影响
目的 探讨白细胞介素-1β(IL-1β)对胆囊癌细胞生长、迁移和侵袭的影响.方法 ELISA法检测胆囊癌、慢性胆囊炎组织、正常胆囊组织标本以及细胞培养基中IL-1β的含量;实时-PCR技术检测IL-1β在胆囊癌细胞株(GBC-SD和SGC996)和肝内胆管上皮细胞株HIBEpic中的表达水平;采用WST-1法和动物模型检测IL-1β在体内和体外对胆囊癌细胞生长的影响;采用Transwell试验检测胆囊癌细胞迁移能力改变;实时-PCR和蛋白印迹法检测IL-1β作用后Twist基因表达水平,并在沉默Twist基因表达后进一步检测IL-1β对细胞生长和迁移的作用.结果 IL-1β在胆囊癌和慢性胆囊炎组织标本中含量[(616.4±95.7) pg/ml和(422.3±48.9)pg/ml]远远高于胆囊正常组织[(66.4±35.0) pg/ml,P＜0.05];IL-1β在GBC-SD和SGC996细胞培养液中的含量[(587.4±99.8)pg/ml和(657.2±76.6)pg/ml]高于HIBEpic[(38.4±12.1)pg/ml,P＜0.05];加入外源性重组IL-1β可以显著促进GBC-SD和SGC996细胞的生长和迁移(P＜0.05);外源性IL-1β可以诱导Twist表达升高.沉默Twist表达,外源性IL-1β无法促进胆囊癌细胞生长和迁移.结论 IL-1β通过诱导Twist基因表达促进胆囊癌细胞生长和转移.
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Twist基因在肝细胞肝癌中的表达及意义
目的 探讨转录因子Twist 在人肝细胞肝癌、癌旁和肝硬化组织中的表达及其意义.方法 利用免疫组化方法检测26例肝细胞肝癌标本(癌和癌旁组织)和10例肝硬化标本中Twist 的表达情况;利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western蛋白印迹方法检测其中10例标本中的Twist mRNA和其蛋白的表达情况,分析其临床病理意义.结果 免疫组化显示:Twist蛋白在肝癌、癌旁和肝硬化组织中的阳性率分别为84.6%、19.2% 和 20.0 %,Twist 在肝癌组织中的表达明显强于癌旁或肝硬化组织(P＜0.05);大多数癌旁和肝硬化组织无Twist 表达,癌旁与肝硬化组织相比阳性率无差别(P＜0.05).与癌旁组织相比,Twist mRNA和其蛋白在肝癌组织中表达明显上调(P＜0.05).结论 Twist在肝细胞肝癌组织中的过高表达与肝癌的发生发展相关.
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Twist基因在乳腺癌中的研究进展
乳腺癌的发生和进展是一个多种基因参与调解的复杂过程.Twist基因是胚胎发育过程中的重要转录因子,近期研究发现Twist基因的过度表达可诱导上皮细胞向间质细胞转换(EMT),促进乳腺癌细胞的增殖和侵袭,与乳腺癌的复发和转移密切相关.另有研究证实Twist基因在乳腺癌中的表达对评估乳腺癌患者的预后及指导临床个体化治疗有重要意义.
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癌基因Twist在骨肉瘤中的研究进展
Twist属于高度保守的碱性螺旋-环-螺旋结构的转录因子家族,在动物和人胚胎发育、诱导细胞移动及组织塑形中起主要作用.Twist是一种癌基因,与许多肿瘤有密切关系,其中与骨肉瘤发生、侵袭和转移也有重要关系.骨肉瘤是一种常见的原发性恶性骨肿瘤,恶性程度高,愈后差,以截肢术为主的手术治疗是过去标准的治疗手段,随着近年来新辅助化疗、基因靶向治疗等非手术治疗的发展,保肢手术为骨肉瘤患者带来了新的希望.癌基因Twist的深入研究将为骨肉瘤的诊断、治疗及预后提供了一个新的靶点.
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上调Twist基因对人结肠癌SW480细胞增殖凋亡及侵袭能力的影响
目的 上调人结肠癌SW480细胞株中Twist基因的表达,观察其对细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响.方法 将高表达Twist基因的质粒和空载质粒稳定转染SW480细胞,分别命名为转染组和对照组,MTT法、细胞划痕实验和Matrigel侵袭实验分别检测肿瘤细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的变化.FCM检测细胞周期及凋亡情况.将肿瘤细胞接种至裸鼠皮下,对比转染前后肿瘤细胞的成瘤情况.结果 从第4天开始,转染组SW480细胞生长速度明显高于对照组(P<0.05);转染组SW480细胞的增殖指数(PI)和S期细胞比例[(61.279±1.709)%,(33.171±3.154)%]均高于对照组[(26.142±1.518)%,(14.112±2.137)%](P<0.05);转染组的细胞凋亡率(6.831±1.624)%低于对照组(12.223±1.733)%(P<0.05);划痕24 h 及48 h 时后转染组细胞迁移率[(40.06±5.56)%,(75.77±8.06)%]均高于对照组[(25.25±2.65)%,(35.37±6.79)%](P<0.05);Matrigel侵袭实验结果显示转染组侵袭细胞个数明显高于对照组(P<0.05);将两组细胞分别接种裸鼠,16 d左右可见肿瘤结节,转染组肿瘤体积及瘤重均大于对照组(P<0.05).结论 上调Twist基因可提高SW480细胞体外增殖、迁移和侵袭能力,降低SW480细胞凋亡率.
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Twist基因对结肠癌细胞系侵袭转移能力影响的体外研究
目的:探讨Twist基因在SW480、HCT116和HT29结肠癌细胞系上皮-间质转化(EMT)中的作用,明确其对恶性肿瘤侵袭转移能力的影响.方法:利用重组质粒pTracer-CMV/BSD-Twist和pGenesil1.2-Twist-shRNA转染SW480、HT29和HCTI 16;流式细胞术检测转染率;Real time-PCR和Western blot检测Twist、E-cadherin和Vimentin转录及蛋白表达水平;Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力.结果:转染高表达Twist质粒后,各结肠癌细胞系中Twist和Vimentin表达水平显著升高(P＜0.05),E-cadherin显著降低(P＜0.05);转染低表达Twist质粒后,SW480和HT29中各指标均无显著变化(P＞0.05),HCT116中Twist和Vimentin表达水平显著降低(P＜0.05),E-cadherin无显著变化(P＞0.05);Transwell实验表明抑制HCT116细胞系Twist表达后,其侵袭和迁移能力明显减弱(P＜0.01).结论:上调Twist表达可以促进EMT;抑制HCT116中Twist表达能减弱结肠癌细胞的侵袭和转移能力.
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Twist基因在卵巢癌中的研究进展
卵巢癌是继子宫内膜癌和宫颈癌发病率居第三位的妇科恶性肿瘤，其病死率居妇科恶性肿瘤之首。碱性螺旋-环-螺旋( bHLH）转录因子家族成员Twist基因在卵巢癌组织中高度表达，其异常表达在卵巢癌的发生、发展及恶化过程中发挥着重要作用。对Twist基因沉默处理后，卵巢癌细胞的增殖及迁移将受到明显的影响。本文通过结合近年来国内外的研究成果，简述了Twist基因在卵巢癌发生、发展中新的作用机制。
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重组质粒pEGFP-N1-Twist对SKOV3细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响
目的 评估重组质粒pEGFP-N1-Twist对卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响. 方法 将pEGFP-N1-Twist转染入SKOV3细胞系,用real-time PCR和Western blot检测Twist基因与蛋白的表达情况;通过Transwell及MTT试验检测pEGFP-N1-Twist对SKOV3细胞的作用. 结果 转染了pEGFP-N1-Twist的SKOV3细胞中Twist基因/蛋白的表达明显上调;转染组较空白对照组侵袭及迁移能力增强(P＜0.05),细胞增殖能力明显增加(P＜0.05). 结论 成功构建了Twist基因的真核表达载体并能在细胞内稳定表达,Twist基因能增强SKOV3细胞的侵袭及迁移能力、细胞增殖能力.
关键词： 重组质粒 TWIST基因 卵巢癌 真核表达载体pEGFP-N1 基因克隆 -
宫颈癌中P16和Twist基因的表达与预后的关系
目的:探讨宫颈癌中P16和Twist基因的表达情况及其与宫颈癌预后的关系.方法:选取2010年6月～2011年5月该院收治的经病理诊断确诊为宫颈癌的患者150例作为观察组,另选同期在门诊体检的健康妇女60例作为对照组.采集观察组患者宫颈癌组织和对照组受试者的正常宫颈组织作为标本,利用免疫组化法检测P16和Twist基因在两组标本中的表达情况,并分析其与临床资料的关系.对观察组行手术治疗的患者进行为期3年的门诊随访,观察复发率.结果:观察组P16阳性表达率为80.67％,对照组为11.67％;观察组Twist阳性表达率为85.33％,对照组为6.67％;观察组P16和Twist的阳性表达率均显著高于对照组(P＜0.05).P16的阳性表达与年龄、FIGO分期和是否发生淋巴结转移有关(P＜0.05),而与分化程度和病理类型无关(P＞0.05).Twist的阳性表达与年龄、FIGO分期、分化程度和病理类型均无关(P＞0.05),只与是否发生淋巴结转移有关(P＜0.05).有54例患者在3年内发生复发,复发率为72.00％.复发者中,P16表达阳性的复发率为46.43％ (26/56),显著高于P16表达阴性的复发率15.79％ (3/19),差异有统计学意义(P＜0.05);Twist表达阳性的复发率为35.38％(23/65),显著高于Twist表达阴性的复发率20.00％ (2/10),差异有统计学意义(P＜0.05).经Spearman相关性分析发现,宫颈癌组织中P16与Twist基因的表达无相关性(r=0.228,P＞0.05).结论:P16和Twist基因在宫颈癌组织中存在过表达的情况,可能与宫颈癌的发生有关;P16和Twist基因表达阳性的患者,肿瘤3年复发率较高,可以据此初步判定宫颈癌患者的预后.
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RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞增殖的影响
目的 研究RNA干扰沉默Twist基因对人膀胱癌T24细胞周期和增殖的影响.方法 体外构建Twist基因的shBNA表达载体,Li-pefectamin 2000介导转染膀胱癌T24细胞,采用RT-PCR和Western印迹方法检测特异性shRNA对Twist基因沉默效果,转染后采用MTT法检测shR-NA对细胞增殖的作用;应用PI单染流式细胞术分析细胞周期的改变.结果 Twist基因的shRNA表达载体有效下调Twist基因表达(P<0.05).与对照组比较,细胞增殖明显抑制(P<0.05);同时引起细胞G1期阻滞,RNA干扰后,G1期细胞从(48.17±1.62)%增加到(74.34±3.24)%(P<0.05),s期细胞从(33.71±3.54)%减少到(11.58±1.02)%(P<0.05).结论 Twist-shRNA表达载体可以特异高效地抑制膀胱癌T24细胞Twist基因的表达,从而调控肿瘤细胞周期,抑制肿瘤细胞增殖.
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siRNA靶向Twist基因对宫颈癌Caski细胞化疗敏感性的影响研究
目的：沉默宫颈癌细胞中的Twist基因，并予紫杉醇作用，研究其增殖、克隆、凋亡的情况，揭示Twist基因是否引起宫颈癌细胞紫杉醇耐药。方法：1.体外培养宫颈癌Caski细胞，利用Lipofectamine TM 2000将各组siRNA转入宫颈癌Caski细胞中，荧光定量PCR检测Twist mRNA表达，筛选出沉默Twist基因效果佳siRNA；瞬时转染Caski细胞，予1umol/L 浓度紫杉醇溶液作用，MTT法检测细胞半数抑制浓度(IC50)；流式细胞学术检测细胞凋亡情况。结果：在1umol/L（IC50）紫杉醇作用各组Caski细胞不同时间后，si-Twist 组细胞生长抑制率明显高于NC-Twist组及Mock组（p<0.05）：1umol/L紫衫醇作用后, si-Twist组、NC-Twist组凋亡率分别为43.21±6.19％、26.16±5.89％，si-Twist 组凋亡率明显高于NC-Twist组，其差异显著（p<0.05结论：Twist基因在Caski细胞中高表达。沉默Twist基因，予紫杉醇作用后，可抑制Caski细胞增殖及克隆，促进其凋亡，从而提高其化疗敏感性。
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Twist基因介导肿瘤细胞耐药的研究进展
Twist属于高度保守的碱性螺旋-环-螺旋(basichelix-loop-helix,bHLH)结构的转录因子家族,在动物和人的胚胎发育、诱导细胞迁移以及组织塑形中起重要作用.Twist基因具有癌基因特征,在多种恶性肿瘤中高表达,不仅参与肿瘤的发生、侵袭和转移,而且与肿瘤细胞产生耐药性密切相关.Twist基因可以通过抗细胞凋亡、干扰抗微管类药物、诱发上皮-间质转型、诱导产生肿瘤干细胞样特性及影响肿瘤微环境等促使肿瘤细胞耐药,因此有望成为逆转肿瘤耐药的新靶点.
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Twist在宫颈鳞癌中的表达及其与临床生物学行为的关系
目的 探讨转录因子Twist在人宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤样变(CIN)和正常宫颈上皮组织中的表达及临床病理意义.方法 收集宫颈鳞癌标本(宫颈鳞癌组,n=61)、CIN Ⅰ期标本(CIN Ⅰ期组,n=22)、CINⅡ～Ⅲ期标本(CINⅡ～Ⅲ期组,n=44)以及正常宫颈组织标本(正常对照组,n=22),采用免疫组织化学方法检测宫颈组织中Twist蛋白的表达情况,并分析其与宫颈鳞癌临床生物学行为的关系.结果 正常对照组、CIN Ⅰ期组、CINⅡ～Ⅲ期组和宫颈鳞癌组的Twist蛋白阳性率呈逐渐上升趋势,分别为0、40.90%、68.18%和70.49%;CIN Ⅰ期组、CINⅡ～Ⅲ期组和宫颈鳞癌组的Twist蛋白阳性率与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P＜0.01);在CIN Ⅰ期组、CINⅡ～Ⅲ期组及宫颈鳞癌组间比较,Twist蛋白阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).结合临床病理分析,在宫颈鳞癌组中,不同年龄、FIGO临床分期及有无淋巴血管间隙浸润的患者间比较,Twist蛋白阳性率差异均无统计学意义(P＞0.05);Twist蛋白在低分化和未分化肿瘤中的阳性率(94.44%)明显高于高、中分化肿瘤(60.47%),差异有统计学意义(P＜0.05);有淋巴结转移者Twist蛋白阳性率(93.75%)较无淋巴结转移者(62.22%)明显升高(P＜0.05).结论 Twist蛋白在宫颈鳞癌中高表达,在判断肿瘤分化程度及转移潜能方面有辅助诊断价值.
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TWIST基因甲基化在肿瘤发生发展中的研究进展
TWIST基因属于碱性螺旋-环-螺旋(bosic Helix-Loop-Helix farily,bHLH)转录因子家族成员之一,在多种种属的基因组中高度保守并调控胚胎发育.该基因的功能包括参与上皮-间质转变(epithelial-mesenchymaltransition,EMT)、抗细胞凋亡、促进肿瘤血管生成和导致染色体不稳定等,但是其在肿瘤发生发展中的调节机制仍不清楚.近年来,大量文献报道证实了表观遗传学为肿瘤发病重要机制之一,其中TWIST基因启动子的高甲基化与肿瘤的发生、进展以及临床病理特征都有关系,本文就此作一综述.
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Twist、Slug基因在宫颈癌中的表达及与预后的关系
目的 探讨Twist、Slug基因在宫颈癌中的表达水平及与临床预后的关系.方法 用实时定量PCR检测56例宫颈癌患者、120例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者组织和血浆中Twist、Slug mRNA的表达,以35例正常宫颈及慢性宫颈炎组织和血浆作为对照.免疫组化染色检测Twist、Slug蛋白在宫颈癌组织中的表达,并分析其与宫颈癌复发的关系.结果 对照组、CIN组、宫颈癌组组织中Twist mRNA表达水平分别为(1.98±0.48)×10-3、(3.89±0.86)×10-3、(6.53±1.25) ×10-3,血浆中Twist mRNA表达水平分别为(1.62±0.55)×10-4、(1.76±0.68) ×10-4、(2.08±0.90)×10-4;3组组织中Slug mRNA表达水平分别为(1.33±0.32)×10-2、(3.02±0.95)×10-2、(4.69±1.02)×10-2,血浆中Slug mRNA表达水平分别为(2.08±0.75)×10-3、(2.30±0.78)×10-3、(3.09±1.02)×10-3;宫颈癌组、CIN组组织中Twist、Slug mRNA表达水平均高于对照组(F分别为46.69、55.30,P＜0.01);宫颈癌组血浆中Twist、Slug mRNA相对表达水平高(F分别为10.56、17.97,P＜0.01),且术前血浆中Twist、Slug相对表达水平高于术后2周的水平(t分别为2.12、2.03,P＜0.05).宫颈癌组TwistmRNA与Slug mRNA呈正相关(r=0.483,P＜0.01);免疫组化结果表明,宫颈癌组织Twist、Slug蛋白表达阳性率(55.4％、78.6％)高于对照组的表达阳性率(8.6％、37.1％) (x2分别为20.15、15.80,P＜0.01).宫颈癌组Twist蛋白阳性者复发率高于Twist蛋白阴性者(29.0％ vs 4.0％,x2 =5.91,P＜0.05).结论 Twist、Slug基因在宫颈癌组织和血浆中表达上调,Twist阳性表达与宫颈癌的复发关系密切.
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TWIST基因和蛋白与宫颈癌发生发展关系的研究
目的:检测TWIST基因在宫颈癌组织和宫颈正常组织中的表达,探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义.方法:收集56例宫颈癌组织和35例宫颈正常组织,用实时定量PCR检测TWIST mRNA的表达;用Western blot检测TWIST蛋白的表达,并分析TWIST mRNA在宫颈癌中的表达水平与临床病理因素及高危型HPV病毒载量相关性.结果:实时定量PCR结果显示宫颈癌组织中TWIST mRNA表达高于宫颈正常组织,差异具有统计学意义(P＜0.01);Western blot在蛋白质水平上证实了这一点(P＜0.01).宫颈癌组织中TWIST的表达与淋巴结转移相关(P=0.022),但与年龄、FIGO分期、肿瘤大小、病理类型、肿瘤分化程度无关(P均＞ 0.05),Logistic回归分析显示,高水平的TWIST mRNA表达是淋巴结转移的独立危险因子(P＜0.05).而TWIST基因的相对表达水平与高危型HPV病毒载量无相关性(r=0.205,P＞ 0.05).结论:宫颈癌组织中TWIST的表达上调,且与是否有淋巴结转移相关,TWIST的表达可能对宫颈癌的发生、发展及转移有重要作用.
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Twist基因真核表达载体的构建和表达检测
[目的]构建Twist基因读码框架至真核表达载体pCDNA3.1,为进一步研究Twist蛋白的功能做材料准备.[方法]采用RT-PCR方法.以正常人子宫体组织cDNA为模板,扩增Twist基历全长读码框架,并构建列真核表达载体pCDNA3.1中.[结果]经过克隆测序结果证实,成功将Twist基因渎码框架插入真核表达载体pCDNA3.1的相应位置:将pCDNA-Twist载体转染细胞系后,发现Twist蛋白在细胞中得到高水平的表达.[结论]Twist真核表达载体的成功构建,为深入研究Twist蛋白对肿瘤转移的作用提供了理想的材料.
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子宫颈上皮内瘤变和子宫颈鳞癌中Twist基因蛋白及Skp2表达
目的 研究Twist和Skp2在子宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)及子宫颈鳞癌(squamous cell carcinoma,SCC)中的表达及其在癌变中的作用.方法 SP法检测Twist和Skp2在CIN和SCC中的表达,并与正常子宫颈鳞状上皮组对照.结果 正常组、CIN 1级组、CIN 2级组、CIN 3级组及SCC组的Twist和Skp2表达阳性率分别为:0、10%、42.3%、48.3%、52.5%,23.1%、46.5%、73.1%、93.1%和92.5%.Twist和Skp2在正常组与CIN组及SCC组间表达差异有显著性(P<0.005).CIN 1级组与CIN 2级组间表达差异有显著性(P<0.005).结论 Twist和Skp2随着CIN从轻到重至SCC,表达逐渐增强,表明两者在SCC癌变过程中起到协同性作用,共同参与CIN的进展及SCC癌变机制.检测到Twist和Skp2表达增强有助于SCC发生的判断及CIN 1级与CIN 2级分级的临床病理诊断.
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Twist基因在恶性肿瘤中的研究与进展
研究表明,人类恶性肿瘤的发生发展是细胞调控的癌基因、抑癌基因相互作用的结果,多基因变化导致细胞周期紊乱,从而引起细胞失控性生长.因此,近年来对于癌基因和抑癌基因的研究成为讨论肿瘤发生发展的热点.
