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MALAT-1沉默对口腔鳞癌细胞增殖、凋亡及Caspase-3通路的影响
目的 探究RNA干扰技术(RNAi)沉默肺癌转移相关转录本-1(MALAT-1)基因对口腔鳞状细胞癌(OSCC)细胞增殖、凋亡的影响并探讨其作用机制.方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测MALAT-1在人正常口腔上皮细胞系HIOE和OSCC细胞系SCC25中的表达情况.实验分为四组:空白对照组不转染序列;阴性对照组采用对照序列进行转染;RNAi组采用MALAT-1SiRNA进行转染;inhibitor组在SiRNA转染SCC25细胞前30 min,向培养基中加入Caspase-3抑制剂Ac-DEVD-CHO进行预处理(终浓度为40 μmol/L).采用RNAi技术敲低SCC25细胞中MALAT-1表达,采用透射电子显微镜(TEM)观察SCC25细胞超微结构;采用CKK-8法检测细胞增殖情况;采用流式膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素碘化丙啶(AnnexinV-FITC/PI)法检测细胞凋亡情况;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测Caspase-3 mRNA和蛋白表达情况.结果 与正常细胞比较,MALAT-1在人OSCC细胞系SCC25中表达上调,差异有统计学意义(P <0.05).转染MALAT-1 SiRNA可明显降低SCC25细胞中MALAT-1表达(P <0.05).与阴性对照组和空白对照组比较,RNAi组SCC25细胞增殖抑制率明显升高,细胞凋亡明显增加,差异均有统计学意义(P <0.05);细胞呈现出典型的凋亡特征;细胞中Caspase-3 mRNA和蛋白表达水平均升高(P <0.05).加入Caspase-3抑制剂预处理,细胞凋亡明显减弱(P <0.05).结论 MALAT-1沉默抑制人OSCC细胞系SCC25细胞增殖,促进凋亡,推测可能通过Caspase-3凋亡通路发挥作用.
关键词： 口腔鳞状细胞癌 肺癌转移相关转录本-1 半胱天冬蛋白酶-3 细胞增殖 细胞凋亡 -
黄芪甲苷对Aβ1-42诱导的体外血脑屏障模型损伤的影响及机制探究
目的 探究黄芪甲苷对纤维状Ap1-42诱导的体外血脑屏障(BBB)模型损伤的影响及可能机制.方法 制备Aβ1-42诱导的小鼠脑微血管内皮细胞bEnd.3和原代大鼠星形胶质细胞As非接触式共培养BBB模型,分为对照组、模型组(Aβ1-4230μmol/L)及黄芪甲苷低、高剂量(50、200 μmol/L)组;利用噻唑蓝(MTT)法检测黄芪甲苷对Aβ1-42诱导的bEnd.3细胞活力的影响;通过检测荧光素钠透过体外BBB模型的量鉴定BBB的通透性;Western blotting法检测细胞凋亡执行蛋白半胱天冬蛋白酶-3 (Caspase-3)、活化的半胱天冬蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)的表达水平以及BBB内皮细胞间相关连接蛋白细胞质透明带蛋白-1 (ZO-1)、Ciaudin-5、Occludin的表达水平.结果 MTT结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷低、高剂量组均能显著提高bEnd.3细胞活性(P＜0.001),且保护作用与黄芪甲苷浓度呈正相关;荧光素钠通透性实验结果显示,与模型组相比较,黄芪甲苷预处理可显著降低BBB的通透性(P＜0.001).Western blotting结果显示,与模型组比较,黄芪甲苷预处理后,cleaved Caspase-3/Caspase-3显著降低,ZO-1、Claudin-5、Occludin蛋白的表达水平显著增加(P＜0.001).结论 黄芪甲苷可能是通过抑制Aβ1-42诱导的脑微血管内皮细胞bEnd.3的凋亡及增加其连接蛋白表达而发挥BBB保护作用.
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急性白血病病人XIAP和Caspase-3的表达及其临床意义
目的:通过对急性白血病患者及健康成人骨髓细胞中X连锁凋亡抑制蛋白(x chromosome linked inhibitor of apoptosisprotein,XIAP)、半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)表达的检测,探讨XIAP及Caspase-3在急性白血病(AL)发生、发展过程中的作用以及二者相关性,为临床诊疗及预后提供有价值的参照指标.方法:采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测50例AL患者及30例健康成人骨髓细胞中XIAP及caspase-3的表达情况.数据结果采用SPSS17.0统计软件进行数据分析,计量资料以均数±标准差((x-)±s)表示,组间比较采用独立样本t检验.Caspase-3与XIAP的相关性采用Spearman等级相关进行相关分析,P值＜0.05视为有统计学意义.结果:①急性白血病患者骨髓细胞中XIAP的表达水平明显高于正常健康成人骨髓细胞中XIAP表达水平(P＜0.05);急性白血病患者骨髓细胞中Caspase-3的表达水平明显低于正常健康成人骨髓细胞中Caspase-3表达水平(P＜0.05),二者的表达呈负相关(r=-0.837,P＜0.05);②急性白血病初治患者骨髓细胞中XIAP的表达水平较复发组患者骨髓细胞中XIAP的表达明显减低(P＜0.05).③急性白血病初治患者骨的表达水平明显高于复发组患者骨髓细胞中Caspase-3表达水平(P＜0.05).④在急性淋巴细胞白血病和急性髓细胞白血病患者中XI-AP及Caspase-3的表达水平无明显差异(P＞0.05).⑤初治急性白血病患者XIAP高表达组的完全缓解率低于低表达组,Caspase-3高表达组的完全缓解率高于低表达组(P＜0.05).结论:AL患者XIAP的表达高于对照组,Caspase-3的表达低于对照组,两者呈负相关,提示XIAP高水平表达与Caspase-3低水平表达可能与AL的发生发展密切相关.XIAP高表达及Caspase-3低表达的病人完全缓解率低,预后不良,提示这可能是导致白血病细胞对化疗药物不敏感的原因之一,但XIAP及Caspase-3在AL发生发展中的具体机制还有待于进一步研究.
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Caspase-3和hTERT在Barrett's食管中的表达及其相互关系
目的 研究半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)和端粒酶逆转录酶(hTERT)在Barrett's食管(Barrett's esophagus,BE)及食管炎伴贲门腺或胃底腺化生组织中的表达,探讨其在BE发病中的作用.方法 应用免疫组织化学法(LDP)检测22例BE和38例食管炎伴贲门腺或胃底腺化生组织中Caspase-3和hTERT的表达,比较两者表达的相关性.结果 Caspase-3在BE中的阳性表达率为95.45%,明显高于在食管炎伴贲门腺或胃底腺化生组织中的表达(68.42%)(P=0.000);hTERT在BE中的阳性表达率为27.27%,明显低于在食管炎伴贲门腺或胃底腺化生组织中的表达(65.79%)(P=0.000).BE中Caspase-3与hTERT的表达呈强负相关(r=-1,P=0.000).结论 BE中Caspase-3高表达,hTERT低表达.Caspase-3和hTERT在BE发生过程中起重要作用,可能成为预测BE发生的重要参考指标.
关键词： Barrett's食管 半胱天冬蛋白酶-3 端粒酶逆转录酶 -
半胱天冬蛋白酶-3在高迁移率族蛋白B1诱导小鼠巨噬细胞凋亡中的作用
目的 观察半胱天冬蛋白酶(Caspase)-3与核转录因子(NF)-KB在高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导小鼠腹腔巨噬细胞凋亡中的作用.方法 分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,随机分为对照组、HMCB1组与抑制剂组(HMGB1作用前1 h加入Caspase-3抑制剂Z-DEVD-FMK).采用Hoeehst33342染色观察凋亡的形态学变化、流式细胞术检测巨噬细胞凋亡百分率的变化;应用原位荧光染色及流式细胞术检测Caspase-3活性的变化;同时应用酶联免疫吸附试验检测NF-KB p65蛋白的变化.结果 HMGB1组巨噬细胞凋亡率为(38.21±4.85)%、抑制剂组为(16.47±3.91)%,均显著高于对照组(4.21±1.64)%(P＜0.01).经Hoechst33342染色,荧光显微镜观察HMGB1组凋亡细胞明显增多;原位荧光染色观察到HMGB1组Caspase-3荧光强度明显增强,Caspase-3阳性细胞百分率(29.74±4.55)%显著高于抑制剂组(3.02±1.91)%与对照组(7.19±2.46)%(P＜0.01).同时,HMGB1组、抑制剂组细胞核NF-KB活性较对照组显著降低(P＜0.05或P＜0.01).结论 Caspase-3和NF-KB是HMGB1诱导巨噬细胞凋亡的重要途径,Caspase-3抑制剂可部分阻断HMGB1诱导的巨噬细胞凋亡.
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Livin和Caspase-3在胃癌组织中的表达及其与预后的关系
目的:探讨Livin和半胱天冬蛋白酶-3 (Caspase-3)蛋白在胃癌组织中的表达及临床意义.方法:(1)用免疫组化PV-9000二步法检测76例胃癌组织和30例癌旁正常组织中Livin和Caspase-3蛋白表达情况.(2)用原位末端标记(TUNEL)法检测胃癌组织中细胞凋亡情况.结果:(1)Livin和Caspase-3分别在胃癌组织和癌旁正常组织中的阳性表达率具有统计学意义(P＜0.05).(2)Livin阳性表达率与组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移相关(P＜0.05)；Caspase-3的阳性表达率与组织分化程度、淋巴结转移相关(P＜0.05).(3)Livin阳性组平均凋亡指数(AI)低于阴性组(P＜0.05)；Caspase-3阳性组AI高于阴性组(P＜0.05).(4)有随访结果的56例中,5年总生存率为46.8％.单因素和多因素分析显示,Livin和淋巴结转移是影响胃癌患者预后的独立风险因素(P＜0.05).结论:(1) Livin和Caspase-3在胃癌组织中的异常表达,导致细胞凋亡不足,可能是胃癌形成的机制之一.(2)Livin和淋巴结转移是影响胃癌患者预后的独立风险因素.
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益阴通络胶囊对大鼠局灶性脑缺血Caspase-3表达的影响
目的:通过动物模型实验观察益阴通络胶囊时局灶性脑缺血的影响,并探讨该药治疗缺血性脑血管病的可能机理.方法:围绕益阴通络胶囊的主要药效学研究,采用线栓法行右侧大脑中动脉阻塞造模,分组观察实验脑缺血大鼠脑组织半胱天冬蛋白酶～3(Caspase-3)的表达在假手术组、模型组中以及在益阴通络胶囊组和血塞通片对照药的作用下的不同变化,并进行统计分析.结果:采用线栓法行右侧大脑中动脉阻塞造模后,实验动物模型组大鼠脑组织中半胱天冬蛋白酶～3(Caspase-3)的含量显著增高,与假手术组相比有非常显著性差异(P＜0.01).益阴通络胶囊组Caspase-3较模型组明显减少,与模型组比较有非常显著性差异(P＜0.01).血塞通片对照组Caspase-3的含量较模型组无明显变化,无显著性差异(P＞0.05).结论:益阴通络胶囊对线栓法造成大鼠局灶性脑缺血具有很好的疗效,益阴通络胶囊可以下调局灶性脑缺血脑组织中Caspase-3的表达,间接或直接反应该药能清除自由基,降低炎性细胞因子及抑制病理产物,减轻脑水肿,减少神经元的损伤,从而抑制神经细胞调亡,保护脑细胞.
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凋亡相关因子XIAP和Caspase-3在胃癌组织中的表达及其临床意义
目的 探讨X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)和半胱天冬蛋白酶-3(Caspase-3)在胃癌组织中表达及其与临床病理特征的相关性.方法 采用免疫组化PV-9000二步法检测70例胃癌组织、30例胃良性病变组织和30例癌旁正常组织中XIAP和Caspase-3蛋白的表达情况.结果 胃癌组织中XIAP的阳性表达率明显高于胃良性病变组织和癌旁正常黏膜组织(P＜0.05).胃癌组织中Caspase-3的阳性率明显低于胃良性病变组织和癌旁正常黏膜组织(P＜0.05),差异有统计学意义(P＜0.05).胃良性病变组织和癌旁正常黏膜组织中XIAP、Caspase-3的阳性率差异无统计学意义(P＞0.05).XIAP和Caspase-3的蛋白表达呈负相关(P＜0.01),XIAP和Caspase-3的阳性表达率与胃癌患者的组织分化程度、浸润深度、淋巴结转移、临床分期相关(P＜0.05),与年龄、性别、肿瘤大小无相关性(P＞0.05).结论 随着胃癌恶性程度的增加,XIAP的表达增高,而Caspase-3的表达降低;XIAP和 Caspase-3可能参与了胃癌的发生发展,是评估胃癌预后的潜在指标.
