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HIV-1感染引起组蛋白乙酰化和增加p21WAF1表达
目的 DNA甲基化和组蛋白乙酰化是基因表达调控的主要形式.人类免疫缺陷病毒(HIV-1)可引起T淋巴细胞DNA甲基化酶上调.本文旨在明确HIV-1对细胞周期依赖激酶抑制剂p21WAF1表达的影响. 方法建立HIV-1感染的Hut 78细胞系;以RT-PCR和Western blotting分析p21WAF1表达情况;以亚硫酸氢钠修饰DNA和基因测序,研究p21WAF1基因启动子甲基化,以Western blotting和染色体免疫测定探究总组蛋白和与p21WAF1基因启动子相关的组蛋白乙酰化水平.并以GST pull-down和免疫沉淀分析HIV-1导致乙酰化及乙酰化引起p21WAF1过表达的可能机理. 结果 HIV-1感染后,其反式激活蛋白Tat与辅助转录因子P/CAF、hGCN5结合,共同刺激组蛋白H3乙酰化.尽管p21WAF1启动子部分区域有甲基化发生,但p21WAF1表达仍上调 .这可能与E2A对p21WAF1的作用有关. 结论 HIV-1感染可引起T淋巴细胞p21WAF1基因的甲基化和乙酰化紊乱,导致p21WAF1表达增强.
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乳腺癌组织p21WAF1基因多态性与EGFR和TGF-β1表达的关系
目的:探讨乳腺癌组织p21WAF1基因多态性与EGFR、TGF-β 1表达的关系.方法:采用SSCP-PCR法检测100例乳腺癌组织p21WAF1DNA结构改变,同时运用免疫组化SP法检测EGFR和TGF-β1蛋白表达水平.结果:18例乳腺癌组织出现p21WAF1基因多态性,48例EGFR阳性,49例TGF-β 1阳性;p21WAF1基因多态性与EGFR(x2=18.97,γ=0.19,P＜0.01)和TGF-β 1(x2=4.74,γ=0.22,P＜0.05)呈正相关.结论:由此推测乳腺癌组织p21WAF1基因多态性与EGFR和TGF-β1表达有关.
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细菌内同源重组构建人p21WAF1基因重组腺病毒
目的构建人p21WAF1基因重组腺病毒载体,并在293细胞中包装制备重组腺病毒.方法将人p21WAF1基因亚克隆连接到腺病毒转移质粒pshuttle-cmv,得到阳性重组转移质粒psh-p21.先将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1转化BJ5183菌,筛选得到AdBJ5183菌,再将Pme Ⅰ线性化的psh-p21转化AdBJ5183菌,经细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdp21.经Pac Ⅰ和BstX Ⅰ酶切及PCR鉴定,将正确的重组腺病毒质粒pAdp21转染293细胞包装病毒,用RT-PCR和PCR鉴定重组腺病毒及其稳定性.结果所构建的重组腺病毒质粒pAdp21,经PCR鉴定,可扩增出约500 bp的片段,与预期大小相符.转染293细胞可包装成p21WAF1基因重组腺病毒,经电镜观察,具有典型的腺病毒特征.结论已成功地构建了重组腺病毒质粒pAdp21,并制备出重组腺病毒rAdp21.
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贵州地区汉族妇女p53PIN3和p21WAF1基因多态性与乳腺癌的相关性
目的 探讨p53PIN3和p21WAF1基因多态性与贵州地区汉族妇女乳腺癌遗传易感性之间的关系.方法 采用序列特异性引物,以PCR方法检测117例乳腺癌患者和123例对照个体外周血DNA p53基因第3内含子和p21WAF1基因第2外显子密码子31的基因多态性分布情况.结果 乳腺癌组与对照组p53基因第3内含子16 bp插入/缺失序列(PIN3)的A、A'等位基因频率分别为93.59%、6.41%及97.56%、2.44%,两组比较,差异有显著性(x2=4.521,P=0.033);乳腺癌组及对照组AA、AA'、A'A'基因型频率分别为87.18%、12.82%、0和95.12%、4.88%、0,将AA'、A'A'基因型合并后与AA基因型比较,差异有显著性(x2=4.738,P=0.030).乳腺癌组与对照组间p21WAF1基因第2外显子密码子31的Arginine(Arg)、Serine(Ser)等位基因频率分别为54.27%、45.73%及50.00%、50.00%,两组比较,差异无显著性(x2=0.878,P=0.349);携带Ser/Arg和Arg/Arg基因型的个体与携带Ser/Ser基因型的个体比较,乳腺癌患病风险无明显增加(OR,0.902;95%CI,0.471～1.728).结论 贵州地区汉族妇女乳腺癌遗传易感性与p53基因第3内含子多态性存在相关性;与p21WAF1基因第2外显子密码子31多态性无明显相关性.
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p21WAF1基因遗传多态性与乳腺癌发病关系的风险
目的 探讨p21WAF1基因多态性与乳腺癌遗传易感性之间的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)方法检测117例乳腺癌患者和123例健康对照组外周血DNA p21WAF1基因第2外显子密码子31多态性的分布情况.结果 乳腺癌与健康对照组间p21WAF1基因第2外显子密码子31的A(arginine)、C(serine)等位基因频率分别54.27%、45.73%及50.00%、50.00%(P＞0.05).携带Ser/Arg和Arg/Arg基因型的个体与携带Ser/Ser基因型的个体比较,乳腺癌患病风险无明显增加(OR,1.108;95%CI,0.579-2.122).结论 p21WAF1基因第2外显子密码子31多态性可能与贵州地区汉族妇女乳腺癌的发病风险无相关性.
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p53、p16、p21WAF1、c-erbB-2在星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤分化和预后的关系
目的分析p53、p16、p21WAF1、c-erbB-2在星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤分化和预后的关系.方法应用免疫组化LSAB法对42例星形细胞瘤中p53、p16、p21WAF1、c-erbB-2的表达进行观察,对其中25例有随访资料的肿瘤患者存活因素进行分析.结果 p53的表达与肿瘤分化和预后密切相关(P<0.01),高表达者预后差.p16、p21WAF1在分化好的星形细胞瘤中表达较强,预后较好;c-erbB-2在分化差的星形细胞瘤中表达较强,预后差.结论 p53能客观反映肿瘤的增殖速度、分化和恶性程度,可以作为判断肿瘤预后有价值的参考指标.星形细胞瘤也存在p21WAF1、p16、c-erbB?2基因异常,对分析肿瘤的形成和判断预后有一定价值.
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人骨肉瘤p21WAF1基因表达及其DNA序列分析
目的检测人骨肉瘤组织中p21 WAF1 基因的表达及其DNA序列变化。方法采用原位杂交及免疫组化法检测p21 WAF1 mRNA及p21蛋白的表达，SSCP方法检测骨肉瘤p21 WAF1 exon3 DNA突变,双脱氧核苷酸末端终止法进行DNA的直接测序。结果①免疫组织化学结果显示：p21蛋白表达阳性率在骨肉瘤中为17.7%（8/45）；在骨纤维结构不良中为50%（5/10）。二者的差异有统计学意义(P<0.05)；②原位杂交结果显示：p21 WAF1 mRNA表达阳性率在骨肉瘤中为42%（19/45）；在骨纤维结构不良中为80%（8/10）。二者的差异有统计学意义(P<0.05);③DNA序列分析结果显示：骨肉瘤中p21 WAF1 exon3的609位碱基处发生C→T突变，突变率为44.4%（16/36）。结论①随着骨肿瘤恶性度的升高，p21 WAF1 mRNA及p21蛋白的表达下降。②p21 WAF1 mRNA在骨肉瘤中的表达对预后有影响。③该实验对中国人群骨肉瘤中的p21 WAF1 基因的DNA多态性位点进行了新的定位，这些位点可能会对今后该基因的研究提供有意义的参考。
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胃癌及癌前病变组织中幽门螺杆菌感染与p53、p21WAF1、PCNA、cyclinA蛋白表达的相关性研究
目的 探讨胃癌及癌前病变中p53、p21WAF1、PCNA、CyclinA蛋白的表达及其与幽门螺杆菌感染的关系.方法 应用免疫组化SP法染色及Warthin-Starry银染色、PCR、尿素酶法检测胃癌及有关病变中p53、p21WAF1、PCNA 、CyclinA蛋白的表达和幽门螺杆菌感染情况.结果 在慢性浅表性胃炎(CSG)、慢性萎缩性胃炎、(CAG)、肠上皮化生(IM)、不典型增生(Dys)及胃癌(GC)中,p53阳性表达率随病变发展而逐渐升高,p53阳性表达率分别为0、3.3%、6.7%、25.0%、70.6%.p21WAF1阳性表达率随病变发展而降低,p21WAF1阳性表达率分别为100.0%、96.7%、86.7%、75.0%、42.6%.PCNA和cyclinA阳性表达率随病变发展而升高,PCNA阳性表达率分别为 45.0%、60.0%、70.0%、87.5%、85.3%;CyclinA阳性表达率分别为 0、6.7%、20.0%、47.5%、58.8%.在同一病变中HP阳性组p53、p21WAF1、PCNA、cyclinA阳性表达率高于HP阴性组,GC组有显著差异(P＜0.05).就1种基因的表达而言,HP阳性组各类病变之和与阴性组比较均有显著性差异(P＜0.05).胃癌中p21WAF1与p53蛋白表达呈负相关关系(P＜0.01,γ=- 0.598),PCNA与cyclinA蛋白表达呈正相关关系(P＜0.01,γ= 0.956).结论 p53突变及p21WAF1失活和PCNA、cyclinA蛋白的高表达及HP感染共同参与胃癌的发生、发展.
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丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞增殖的抑制作用及其机制
目的 观察脱乙酰化酶抑制剂丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞增殖的抑制作用,并探讨其作用机制.方法 MTT法观察丁酸钠对人胃癌MKN-28细胞的生长抑制作用;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;RT-PCR检测丁酸钠作用前后p21WAF1 mRNA的表达.结果 1.0、2.5、5.0 mmol/L丁酸钠作用24、48、72 h均可抑制 MKN-28细胞增殖,其效果具有时间、剂量依赖性(P＜0.05);丁酸钠1.0、2.5、5.0 mmol/L处理72 h后,MKN-28细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P＜0.05);细胞凋亡率分别为13.7%±0.8%、20.8%±2.4%、33.6%±2.6%,与对照组2.8%±0.4%相比P均＜0.05;与对照组比较,丁酸钠处理后p21WAF1 转录水平上调.结论 丁酸钠可显著抑制人胃癌MKN-28细胞的生长,其可能的机制是通过上调p21WAF1基因的表达,诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G0/G1期.
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乳腺癌p21 WAF1基因多态性及其临床意义
目的探讨乳腺癌组织p21 WAF1基因多态性及其临床意义.方法采用聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR-SSCP)法检测100例乳腺癌组织p21 WAF1基因的结构变异,同时应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌组织p21 WAF1的蛋白表达.结果 5%(2/40)的对照组组织出现多态性,18%(18/100)的乳腺癌组织出现两种多态性,两组间差异有显著性(x2=30.94,P＜0.05);p21 WAF1基因多态性与蛋白表达(r=0.576,P＜0.01)和组织学分级(r=0.360,P＜0.01)呈正相关.结论 p21 WAF1基因多态性在乳腺癌组织中明显增加;p21 WAF1基因多态性可能与促进细胞增殖和增强对癌的易感性有关.
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p21WAF1 基因在胃癌及癌前病变中表达的临床病理意义
目的探讨p21WAF1蛋白表达与胃癌发生、发展、浸润转移及临床分期的关系.方法采用S-P免疫组化法,分别检测20例正常胃粘膜、40例不典型增生胃粘膜和108例胃癌p21WAF1蛋白表达.结果 p21WAF1阳性表达率:正常与不典型增生胃粘膜分别00%、92%,显著高于胃癌39%(P <0.05 );高分化腺癌63%,分别与低分化腺癌35%、未分化癌26%、粘液癌30%及印戒细胞癌20%比较,皆具有显著性差异(P<0.05);临床Ⅰ期60%和Ⅱ期56%显著高于Ⅲ期27%和Ⅳ期22%(P < 0.05);伴淋巴结转移35%与未转移62%有显著差异(P < 0.05);浸润浅肌层60%较浸润深肌层35%差异有显著性意义(P < 0.05)而与性别、年龄无关.结论 p21WAF1蛋白失表达与胃癌发生、分化程度、浸润、淋巴结转移及临床分期相关.挝
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表皮生长因子受体为靶向的多肽基因导入系统介导 p21 WAF1对人喉癌的基因治疗
目的:评价靶向性非病毒载体系统介导的p21WAF1对人喉癌基因治疗的可行性和有效性.方法:利用组建的表皮生长因子受体(EGF-R)介导的多肽基因导入系统与p21WAF1基因构成基因载体复元物,分别体外转染人喉癌Hep-2细胞,通过荧光显微镜观察和通过转染喉癌细胞生长曲线及流式细胞仪检测等方法观察新的受体介导多肽基因导入系统对外源基因的导入和导入后对人喉癌细胞的抑制作用.结果:荧光显微镜观察到标记基因的表达产物绿色荧光蛋白,转染后48 h呈弱阳性,72 h呈强阳性;p21WAFl基因转染后喉癌细胞生长受到明显抑制,第4天抑制率为79%;流式细胞仪检测到p21WAF1转染的Hep-2细胞发生了明显的凋亡.结论:EGF-R介导的多肽基因导入系统可靶向性地将治疗基因导入Hep-2人喉癌细胞,p21WAF1基因可明显抑制Hep-2细胞的生长并有效诱导基因凋亡.
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p21WAF1基因多态性及其蛋白表达与乳腺癌组织学分级的关系
目的探讨p21WAF1基因多态性及其蛋白表达与乳腺癌组织学分级的关系.方法分别采用聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCR-SSCP)和免疫组织化学LSAB法检测100例乳腺癌组织p21WAF1基因多态性和蛋白表达.结果具有p21WAF1DNA多态性和无多态性的乳腺癌组织p21WAFI蛋白表达阳性分别为18例(100%)和32例(39.0%),前者明显高于后者(P＜0.01);在乳腺癌组织腺管形成1,2,3组中具有p21WAF1DNA多态性改变和蛋白阳性的病例数分别为1(5.0%),6(14.0%),11(29.7%)和7(35.0%),20(46.5%),23(62.2%);在细胞核多形性1,2,3组中具有p21WAF1DNA多态性改变和蛋白阳性的病例数分别为1(5.9%),2(4.8%),15(36.6%)和5(29.4%),15(35.7%),30(73.2%);在组织学分级1,2,3组中具有p21WAF1DNA多态性改变和蛋白阳性的病例数分别为3(8.8%),4(8.7%),11(55.0%)和14(41.2%),21(45.7%),15(75.0%),在核分裂象计数1(＜5个),2(5-10个),3(＞11个)组中p21WAF1蛋白阳性例数分别为7(36.8%),19(43.2%)和24(64.8%).以上各指标组间比较差异有显著性,p21WAF1DNA多态性与其蛋白表达呈正相关关系(P均＜0.01).结论 p21WAF1基因多态性及其蛋白表达与组织学分级有关,两者趋于一致;p21WAFI基因多态性可能是造成乳腺癌组织学分级低的一个因素.
关键词： 乳腺肿瘤 p21WAF1基因 p21WFA1蛋白质 多态性 组织学分级
