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体外大量扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞及其生物学特性的初步分析
目的：探讨体外大量培养扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞（TILs）的新方法，并初步研究其分子表型和功能特征。方法20例手术切除的原发性肝癌组织经混合消化酶消化为单个细胞后，应用密度梯度离心法分离其中的淋巴细胞，然后应用两步培养法大量扩增 TILs，并检测它们的生长扩增速度。应用流式细胞仪检测扩增淋巴细胞的分子表型， ELISA法检测其 IFN-γ的分泌水平，并分析高表达 PD-1和低表达 PD-1分子 TILs分泌 IFN-γ的能力。结果18例标本中的 TILs在体外经两步法培养后可以扩增达到1010数量级。扩增的 TILs中 CD3+细胞的比例为（91.7±7.4）%，CD3+CD56+细胞的比例为（28.5±11.7）%， CD3+CD4+细胞的比例为（32.5±19.6）%，CD3+CD8+细胞的比例为（62.5±29.1）%。PD-1分子在 CD3+CD8+细胞的比例为（23.5±16.1）%。扩增的 TILs分泌 INF-γ的水平为（827.8±307.7）pg/ml，其中9例 PD-1分子低表达的 CD3+CD8+细胞的分泌 INF-γ的水平为（1087.5±249.6）pg/ml，6例 PD-1分子高表达的 CD3+CD8+细胞的分泌 INF-γ的水平为（478.6±69.3）pg/ml，两者相比有明显差异（P <0.05）。结论应用两步培养法从原发性肝癌中大量扩增 TILs简便易行，扩增的TILs主要为 CD3+CD8+T淋巴细胞，且 TILs中 PD-1的表达与其分泌 IFN-γ的能力呈负相关。
关键词： 肿瘤浸润淋巴细胞 干扰素 γ 程序性细胞死亡受体 1 原发性肝癌 -
结核杆菌γ-干扰素体外释放试验对结核性胸腔积液的诊断价值
目的：探讨体外释放酶联免疫法检测结核杆菌γ-干扰素（TB-IGRA）对结核性胸腔积液的诊断价值。方法收集济宁医学院附属医院呼吸科2014年1～9月诊治的55例结核性和49例恶性胸腔积液患者的病例资料，对患者进行 TB-IGRA、细菌涂片镜检、结核菌素皮试（PPD）和结核杆菌抗体等检测，并对以上诊断方法进行比较分析。同时联合检测血清癌胚抗原（CEA）及胸腔积液腺苷脱氨酶（ADA），以评估 TB-IGRA 联合 CEA 和 ADA 对鉴别诊断结核性胸腔积液的意义。采用 SPSS 17．0统计软件进行数据分析，阳性例数以率表示，并进行卡方检验。CEA 和 ADA 的测定值用均数±标准差表示，显著性检验用 t 检验。结果55例结核组患者 TB-IGRA 阳性53例，达96．36％；49例恶性组患者 TB-IGRA 阳性1例，仅2．04％，两组差异有统计学意义（χ2＝88．62，P＜0．05）。结核组血清CEA 水平[（2．34±1．80）μg/L]显著低于恶性组[（2358．68±1069．40）μg/L，t ＝-15．42，P ＜0．05]；胸腔积液 ADA 水平[（57．51±26．90）U /L]显著高于恶性组[（14．43±3．57）U /L，t ＝11．76， P ＜0．05]。结核组中 TB-IGRA、涂片镜检、PPD 试验以及结核杆菌抗体的阳性率分别为96．36％、22．64％、46．67％和35．14％，TB-IGRA 的阳性检测率高（χ2＝78．60，P＜0．05）；TB-IGRA 对诊断结核性胸腔积液的敏感度（95．65％）、特异度（96．77％）、阳性预测值（97．78％）、阴性预测值（93．75％）及准确性（92．42％）高。结论与传统的检测指标相比，TB-IGRA更具灵敏性和特异性；TB-IGRA联合 CEA、ADA 检测对诊断结核性胸腔积液具有极为重要的临床价值。
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利巴韦林联合布地奈德雾化吸入治疗小儿毛细支气管炎的临床疗效及其对血清白介素4、干扰素γ水平的影响研究
目的：探究利巴韦林联合布地奈德雾化吸入治疗小儿毛细支气管炎的临床疗效及其对血清白介素4（IL-4）、干扰素γ（IFN-γ）水平的影响。方法选取2012年3月—2015年3月延安大学附属医院儿科收治的毛细支气管炎患儿69例，按照治疗方法分为对照组34例和观察组35例。两组患儿入院后均给予吸氧、控制喘憋与抗病原体等常规治疗，对照组患儿在常规治疗基础上给予利巴韦林注射液雾化吸入治疗；观察组患儿在常规治疗基础上给予利巴韦林注射液联合布地奈德混悬液雾化吸入治疗。比较两组患儿临床疗效、临床症状缓解/消失时间、心率恢复正常时间及住院时间，治疗前后 T 淋巴细胞亚群（CD +3细胞分数、CD +4细胞分数、CD +8细胞分数、CD +4/ CD +8细胞比值）和血清 IL-4、IFN-γ水平。结果观察组患儿临床疗效优于对照组（ u =1.772，P <0.05）。观察组患儿气促缓解时间、哮鸣音消失时间、湿啰音消失时间、咳嗽消失时间、心率恢复正常时间及住院时间均短于对照组（P <0.05）。两组患儿治疗前 CD +3细胞分数、CD +4细胞分数、CD +8细胞分数及 CD +4/ CD +8细胞比值比较，差异无统计学意义（P >0.05）；观察组患儿治疗后 CD +3细胞分数、CD +4细胞分数、CD +4/ CD +8细胞比值高于对照组，CD +8细胞分数低于对照组（P <0.05）。两组患儿治疗前血清 IL-4、IFN-γ水平比较，差异无统计学意义（P >0.05）；观察组患儿治疗后血清 IL-4水平低于对照组，血清 IFN-γ水平高于对照组（P <0.05）。结论利巴韦林联合布地奈德雾化吸入治疗小儿毛细支气管炎的临床疗效确切，可有效调节血清 IFN-γ、IL-4水平，改善免疫功能。
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解毒利水膏联合香菇多糖治疗恶性胸腔积液的疗效观察
目的：探讨解毒利水膏外敷联合香菇多糖胸腔灌注治疗恶性胸腔积液的临床疗效。方法选取癌症晚期合并恶性胸腔积液的确诊病例62例，随机分为联合组34例及对照组28例，对照组在常规治疗基础上予香菇多糖胸腔灌注，联合组在对照组基础上加敷解毒利水膏。利用酶联免疫吸附测定法检测并比较治疗前、治疗2周及4周后患者 INF-γ与 IL-4的水平。结果联合组总有效率84.37%明显高于对照组的40.00%，差异有统计学意义（P <0.05）。治疗前2组 INF-γ偏低，IL-4偏高，治疗后2组 INF-γ均升高，IL-4均下降，且联合组 INF-γ升高程度与 IL-4下降程度均较对照组明显，差异有统计学意义（P <0.05）。结论解毒利水膏外敷联合香菇多糖胸腔灌注治疗恶性胸腔积液的临床疗效明显，在 INF-γ与 IL-4水平调节方面更加突出，值得临床推广应用。
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复方中药对链球菌性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子的影响研究
目的：探讨复方中药对链球菌性肺炎小鼠肺组织炎性细胞因子白介素（ IL）-6、IL-2、干扰素γ（INF-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、IL-10表达水平的影响。方法2014年3—10月选取健康 BALB/ c 小鼠36只，采用随机数字表法分为3组：正常组、链球菌性肺炎模型组（模型组）、复方中药治疗组（中药组），每组12只。模型组、中药组小鼠分别破损鼻黏膜，滴入50μl 配好的肺炎链球菌标准菌株溶液；正常组小鼠破损鼻黏膜，滴入50μl 无菌0.9%氯化钠溶液。中药组小鼠给予7.5 g·kg -1·d -1复方中药灌胃，正常组和模型组小鼠给予等剂量双蒸水灌胃，均2次/ d，连续给药7 d。给药第7天，取肺组织，观察病理学表现，酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组小鼠肺组织IL-6、IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-10表达水平。结果苏木素-伊红（HE）染色光镜下显示，正常组肺泡结构及上皮完整，肺泡腔清晰，肺泡内无渗出物，肺泡间隔均匀一致，无增厚，毛细血管无明显扩张、充血及炎性细胞浸润；模型组肺泡腔内充满渗出的纤维素，出现大量炎性细胞浸润，肺泡间隔增厚及毛细血管扩张、充血；中药组肺泡腔内纤维素渗出较少，肺间质有少量炎性细胞浸润，少量红细胞，部分肺泡破坏融合，与模型组比较有所减轻。模型组小鼠肺组织IL-6、IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-10表达水平较正常组升高（P <0.05）；中药组小鼠肺组织IL-6、IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-10表达水平较模型组降低（P <0.05）；中药组小鼠肺组织IL-6、IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-10表达水平与正常组比较，差异无统计学意义（P >0.05）。结论复方中药能有效抑制链球菌性肺炎小鼠肺组织IL-6、IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-10的过度表达，缓解炎性反应。
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急性一氧化碳中毒迟发型脑病IL 10、MDA及IFN γ水平变化的意义
目的：探讨急性一氧化碳中毒迟发型脑病白介素10(IL 10)、丙二醛(MDA)及干扰素γ(IFN γ)水平变化的意义。方法选取海南省中医院收治的急性一氧化碳中毒迟发型脑病病人54例作为研究组,并根据智力状态分为轻度认知功能障碍组(A组),中度认知功能障碍组(B组)和重度认知功能障碍组(C组)。另选取40名同期健康体检者作为对照组,比较各组 IL 10、MDA、IFN γ水平。结果血清和脑脊液 IL 10、MDA及 IFN γ水平比较,研究组高于对照组(P<0.05),A组显著低于B组和C组(P<0.05),治疗2周后显著低于入组次日(P<0.05)。而 B组脑脊液 IL 10和血清 MDA水平显著低于C组(P<0.05)。结论 IL 10、IFN γ水平变化说明急性一氧化碳中毒迟发型脑病可能与神经免疫损伤有关；MDA提示自由基参与该病的病理生理过程。
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Faecalibacterium prausnitzii基因组 DNA 上调外周血单个核细胞 Th1型免疫应答增强对人结肠癌 LoVo 细胞的杀伤活性
背景：Faecalibacterium prausnitzii（Fp）是一种具有抗炎和免疫调节作用的肠道共生菌，研究发现结直肠癌患者肠道内 Fp 数量明显减少，可能与肿瘤发生有关。目的：探讨 Fp 及其基因组 DNA（fDNA）干预对外周血单个核细胞（PBMCs）对人结肠癌 LoVo 细胞杀伤活性的影响及其免疫学机制。方法：将 Fp、fDNA 或酶解 fDNA（d-fDNA）与分离自健康成人的 PBMCs 体外共培养，MTT 实验检测 PBMCs 对 LoVo 细胞的杀伤活性，ELISA 法检测 PBMCs 培养上清液中的 Th1、Th2型细胞因子干扰素-γ（IFN-γ）、白细胞介素-4（IL-4）含量，real-time PCR 检测 PBMCs Th1、Th2特异性转录因子 T-bet、GATA3表达。结果：与未予干预的 PBMCs 相比，fDNA 干预能显著增强 PBMCs 对 LoVo 细胞的杀伤活性（P <0.05），同时促进 PBMCs 的 IFN-γ分泌和 T-bet mRNA 表达（P <0.05），抑制 IL-4分泌和 GATA3 mRNA 表达（P <0.05）。Fp 和 d-fDNA 均未显示出上述作用。结论：fDNA 能增强 PBMCs 对人结肠癌细胞的杀伤活性，其机制可能与上调 Th1型免疫应答有关。
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银屑病调节性 T 细胞的功能异常及 STAT3通路调控机制研究
目的研究银屑病患者外周血调节性 T 细胞（Treg）的功能，探讨与功能异常相关的 STAT3信号通路机制。方法寻常性银屑病患者81例，银屑病面积和严重度指数（PASI）评分10～30，均为慢性斑块状。对照组46例，为健康献血者。采用流式细胞仪检测外周血中 Treg 细胞的比例，用体外淋巴细胞混合培养方法检测银屑病患者和健康人外周血中 Treg 细胞的增殖活性及对效应性 T 细胞（Tresp）的抑制功能，用流式细胞仪及qRT-PCR 检测 Treg 细胞中磷酸化 STAT3的比例及分泌促炎因子干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素17（IL-17）的水平。后，用 STAT3通路抑制剂 Stattic V 处理银屑病患者 Treg 细胞，观察其增殖及抑制功能的恢复及分泌促炎因子的变化。结果银屑病患者组外周血 Treg 细胞数量（6.437%±0.186%）与对照组（6.812%±0.241%）比较差异无统计学意义（t =1.224，P ＞0.05），但银屑病患者组外周血 Treg 细胞增殖活性及对 Tresp 细胞的抑制功能明显降低，磷酸化 STAT3表达水平显著升高，分泌促炎因子 IFN-γ、TNF-α、IL-17的水平显著升高（均 P ＜0.05）。经50μg/L Stattic V 作用后，银屑病患者 Treg 细胞对 Tresp 抑制率为61.670%±4.640%，未处理组为28.820%±11.490%，两组差异有统计学意义（P ＜0.05）；50μg/L Stattic V 作用后，促炎因子 IFN-γ、TNF-α、IL-17 mRNA 表达量（2-△△Ct）分别为1.654±0.879、0.850±0.705、0.572±0.135，均显著低于未处理组（分别为23.350±6.721、4.847±1.525、3.095±0.650），差异均有统计学意义（P ＜0.05）。结论银屑病患者 Treg细胞对 Tresp 细胞的负向调控功能降低，其机制与 STAT3信号通路异常活化有关，抑制 STAT3通路的活化有可能一定程度地恢复 Treg 细胞功能。
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养阴益气合剂对口腔扁平苔藓患者血清及唾液干扰素γ和白细胞介素10水平的影响及临床意义
目的：评价养阴益气合剂联合西药治疗口腔扁平苔藓的临床疗效及对患者血清及唾液干扰素γ（IFN-γ）、白细胞介素10（IL-10）表达水平的影响。方法将60例口腔扁平苔藓（OLP）患者按照随机分组法分为对照组和观察组，每组30例。对照组病损基底部注射曲安奈德和利多卡因；观察组在对照组治疗方法的基础上，口服养阴益气合剂。两组患者均治疗2个月。比较两组临床疗效、客观指标评分、血清及唾液IFN-γ、IL-10表达水平、不良反应。结果观察组总有效率（86．67％）显著高于对照组（63．33％）（χ2＝11．64，P ＜0．01）；两组客观指标评分均显著低于治疗前（t ＝8．52、12．51，均 P ＜0．01），且观察组显著低于对照组（t ＝4．38，P ＜0．05）；观察组治疗后血清及唾液中的 IFN-γ水平分别为（25．39±1．29）pg／mL 和（12．76±1．28）pg／mL，与治疗前相比较显著升高（t ＝10．35、8．15，均 P ＜0．01），对照组治疗后较治疗前亦显著升高（P ＜0．05）；观察组治疗后血清及唾液中的 IL-10水平分别为（27．54±1．82）pg／mL 和（9．92±0．86）pg／mL，两组均较治疗前显著降低（t ＝8．76、9．39，均 P ＜0．01，t ＝4．65、4．94，均 P ＜0．05），治疗后，观察组血清及唾液中的 IFN-γ表达水平均明显高于对照组（t ＝4．68、4．32，均 P ＜0．05），IL-10表达水平显著低于对照组（t ＝5．41、5．25，均 P ＜0．05）；治疗过程中未发现明显不良反应发生。结论养阴益气合剂联合西药治疗 OLP 具有较好的临床疗效，并能够显著升高患者血清及唾液中的 IFN-γ表达水平，降低 IL-10表达水平，对 OLP 治疗具有重要的指导价值。
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辅助性T细胞1、2及白细胞介素4、12在椎间盘突出症患者髓核组织中的表达
目的：探讨辅助性 T 细胞1（Th1），辅助性 T 细胞2（Th2）及细胞因子白细胞介素12（IL-12）和白细胞介素4（IL-4）在椎间盘突出症患者髓核组织中的表达水平和临床意义。方法选取接受手术治疗的腰椎间盘突出症患者30例作为观察组，同时选取腰椎骨折需摘除椎间盘的患者10例作为对照组，运用流式细胞术检测 Th 细胞亚群中 Th1和 Th2的分布情况；酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定髓核组织中 Th1型细胞因子干扰素γ（IFN-γ）和 IL-12的表达水平及 Th2型细胞因子 IL-4的表达水平；运用 RT-PCR 检测 Th1细胞转录因子 STAT4以及 Th2的转录因子 STAT6的表达水平。结果与对照组比较，Th1、Th2细胞在观察组髓核中，细胞数量明显增加[（6．24±2．89）比（25．12±3．20），t ＝16．26，P ＜0．05；（2．68±0．58）比（8．16±1.20），t ＝3．84，P ＜0．05]；Th1型细胞因子 IL-12和 IFN-γ在观察组体内表达水平高于对照组[（23．47±5.61）比（7．65±3．21），t ＝8．422，P ＜0．05；（1．52±0．87）比（5．34±1．39）pg／mL，t ＝8．135，P ＜0．05]；而在对照组织中未检测到 Th2型细胞因子 IL-4的表达；而在观察组中，IL-4在某些髓核组织中有一定的表达。且IL-12、IFN-γ和 IL-4在椎间盘突出症患者体内的表达呈负相关（r ＝－0．57，P ＜0．05；r ＝－0．23，P ＜0．05）；STAT4的表达水平在观察组患者髓核内明显高于对照组[（3．21±0．49）比（1．12±0．24），t ＝13．15，P ＜0.05]，差异有统计学意义（P ＜0．01），而 STAT6在腰椎间盘突出症患者与对照组差异无统计学意义（P ＞0.05）。结论Th1和 Th2细胞及其分泌的细胞因子在椎间盘突出症的发病机制中可能有重要的作用。
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血清干扰素γ、肿瘤坏死因子α、白细胞介素10在溃疡性结肠炎中的水平变化及其与幽门螺杆菌感染的相关性
目的：探讨血清干扰素γ（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素10（IL-10）在溃疡性结肠炎（UC）中的水平变化及其与幽门螺旋杆菌（Hp）的相关性。方法选择80例 UC 患者为研究对象，80例 UC 患者中50例处于活动期，30例处于缓解期。50例 UC 活动期患者中：轻度14例，中度26例，重度10例。选择30名健康者为健康对照组。检测血清 IFN-γ、TNF-α、IL-10水平及 Hp 感染情况。结果活动期组血清 TNF-α、IL-10水平高于缓解期组和对照组，差异有统计学意义[（54．75±5．92）ng／L 比（23．69±4．15）ng／L与（20．45±4．01）ng／L，F ＝36．79，P ＝0．000；（35．16±6．72）ng／L 与（25．12±5．37）ng／L 与（23．96±5．21）ng／L，F ＝35．68，P ＝0．000]，活动期组血清 IFN-γ水平低于缓解期组和对照组，差异有统计学意义[（14．98±3．15）ng／L 与（26．06±4．31）ng／L 与（27．16±4．39）ng／L，F ＝35．68，P ＝0．000]。随着 UC 活动期患者病情的加重，TNF-α、IL-10水平呈升高趋势（F ＝32．81、24．95，均 P ＜0．05），IFN-γ呈降低趋势（F ＝22.29，P ＜0．05）。50例 UC 活动期患者中，18例 Hp 阳性，32例 Hp 阴性。UC 活动期组 Hp 阳性患者血清TNF-α、IL-10水平高于 Hp 阴性患者，差异有统计学意义（t ＝4．62、4．35，均 P ＜0．01），UC 活动期组 Hp 阳性患者血清 IFN-γ水平低于 Hp 阴性患者，差异有统计学意义（t ＝5．91，P ＜0．01）。结论UC 活动期患者 TNF-α、IL-10高表达，IFN-γ低表达，IFN-γ、TNF-α、IL-10的表达与 Hp 感染密切相关。
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ITP 小鼠外周血 CD4＋T 细胞 PD-1表达及血清 IFN-γ、IL-10水平观察
目的：观察原发免疫性血小板减少症（ITP）小鼠外周血 CD4＋T 细胞程序性死亡分子1（PD-1）表达及血清 IFN-γ、IL-10水平情况。方法20只 Balb ／c 小鼠随机分为正常组、模型组各10只。正常组不做特殊处理，模型组隔日给予腹腔注射豚鼠抗小鼠血小板抗血清（GP-APS）100μL／20 g，建立 ITP 模型，造模成功后继续隔日注射GP-APS，连续7 d。第8天取两组小鼠外周血，流式细胞术检测 CD4＋T 细胞表面 PD-1的表达，同时分离血清，用CBA 法检测 IFN-γ、IL-10水平。结果模型组、正常组小鼠外周血 CD4＋T 细胞 PD-1表达率分别为8．16％±1．03％、6．82％±0．38％，两组相比 P ＜0．05。模型组、正常组小鼠血清 IFN-γ水平分别为（3．58±0．68）、（1．42±0．61）pg／mL，IL-10水平分别为（18．25±1．94）、（27．66±4．98）pg／mL，两组相比 P 均＜0．05。结论 ITP 小鼠外周血CD4＋T细胞表面 PD-1表达增高，血清 IFN-γ水平升高，血清 IL-10水平降低，ITP 疾病中存在 Th1／Th2失衡。
