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体外大量扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞及其生物学特性的初步分析
目的:探讨体外大量培养扩增原发性肝癌肿瘤浸润淋巴细胞(TILs)的新方法,并初步研究其分子表型和功能特征。方法20例手术切除的原发性肝癌组织经混合消化酶消化为单个细胞后,应用密度梯度离心法分离其中的淋巴细胞,然后应用两步培养法大量扩增 TILs,并检测它们的生长扩增速度。应用流式细胞仪检测扩增淋巴细胞的分子表型, ELISA法检测其 IFN-γ的分泌水平,并分析高表达 PD-1和低表达 PD-1分子 TILs分泌 IFN-γ的能力。结果18例标本中的 TILs在体外经两步法培养后可以扩增达到1010数量级。扩增的 TILs中 CD3+细胞的比例为(91.7±7.4)%,CD3+CD56+细胞的比例为(28.5±11.7)%, CD3+CD4+细胞的比例为(32.5±19.6)%,CD3+CD8+细胞的比例为(62.5±29.1)%。PD-1分子在 CD3+CD8+细胞的比例为(23.5±16.1)%。扩增的 TILs分泌 INF-γ的水平为(827.8±307.7)pg/ml,其中9例 PD-1分子低表达的 CD3+CD8+细胞的分泌 INF-γ的水平为(1087.5±249.6)pg/ml,6例 PD-1分子高表达的 CD3+CD8+细胞的分泌 INF-γ的水平为(478.6±69.3)pg/ml,两者相比有明显差异(P <0.05)。结论应用两步培养法从原发性肝癌中大量扩增 TILs简便易行,扩增的TILs主要为 CD3+CD8+T淋巴细胞,且 TILs中 PD-1的表达与其分泌 IFN-γ的能力呈负相关。
关键词: 肿瘤浸润淋巴细胞 干扰素 γ 程序性细胞死亡受体 1 原发性肝癌