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下调G3BP对抑制肿瘤细胞迁移能力的研究
目的：探讨利用 siRNA和靶向 G3BP的多肽药物下调 G3BP后对多种肿瘤细胞迁移能力的影响。方法采用人纤维肉瘤 HT1080细胞、乳腺癌 MCF-7细胞以及人非小细胞肺癌 H1299细胞，应用 siRNA特异性干扰 G3BP后，通过划痕实验观察其对肿瘤细胞迁移能力的影响；用多肽药物 GAP161作用于肿瘤细胞后，利用划痕实验以及 Transwell迁移实验观察其对肿瘤细胞迁移能力的影响；在 MCF-7细胞中高表达 G3BP1，在 MDA-MB-231细胞中用 siRNA下调 G3BP1后，采用人全基因芯片分析 G3BP1高表达和低表达后的基因表达谱，并进行信号通路分析。结果 siRNA特异性下敲 G3BP1和 G3BP2后，HT1080、MCF-7和 H1299细胞的迁移能力显著降低。利用靶向 G3BP的特异性多肽药物 GAP161作用于多种肿瘤细胞后，肿瘤细胞的迁移能力显著下调。全基因组芯片分析表明：多个基因同时在 G3BP1高表达和低表达组中发生变化，该变化与细胞迁移相关的细胞黏附、整合素、MAPK 等信号通路有关。结论 G3BP下调后能够显著降低肿瘤细胞的迁移能力。靶向 G3BP的多肽药物具有显著抑制肿瘤细胞迁移的作用。下调或者高表达 G3BP后可通过下调或者上调多种与细胞黏附、整合素、MAPK 等信号通路相关基因发挥作用。
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G3BP和TIP30基因表达与子宫颈癌细胞转移潜能相关性的初步研究
目的:检测肿瘤转移基因G3BP和肿瘤转移抑制基因TIP30在正常子宫颈组织及子宫颈癌组织中的表达水平,探讨两者对子宫颈癌细胞转移潜能的影响.方法:选取2010-2011年我院妇检及行宫颈癌根治术的患者90例.采用Taqman探针实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法,检测正常子宫颈组织(30例)、子宫颈浸润癌(均为子宫颈鳞状细胞癌)未转移组及转移组组织(各30例)中G3BP、TIP30基因表达情况,并对其进行比较分析.结果:1)G3BP基因在子宫颈癌转移组中的表达水平(0.088±0.081)显著高于未转移组(0.006±0.003)及正常子宫颈组织(0.000±0.000),P值均＜0.001 ;子宫颈癌未转移组的表达水平高于正常子宫颈组,差异有统计学意义,P＜0.001.2)TIP30基因在子宫颈癌转移组中的表达水平(0.000±0.000)显著低于未转移组(0.001±0.000)及正常子宫颈组织(0.012±0.001),P值均＜0.001,子宫颈癌未转移组的表达水平低于正常子宫颈组,差异有统计学意义,P＜0.001.结论:G3BP在正常子宫颈组织、子宫颈癌未转移组及转移组中呈升序表达,而TIP30基因则呈降序表达,G3BP和TIP30基因在子宫颈癌细胞的转移中发挥一定作用,从而影响子宫颈癌的发生、发展.
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GST-G3BP Domain 1～5原核表达质粒的构建及其表达
目的:构建GST-G3BP Domain 1～5的融合表达质粒,并在大肠杆菌中稳定表达.方法:PCR扩增G3BP Domain 1～5片段,利用限制性内切酶geaR I和Not I将其连接至载体pGEX-4T-1,将连接产物转化大肠杆菌,挑取单菌落,提取质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序.将转化正确的大肠杆菌过夜培养,IPTG诱导融合蛋白表达,immobilized Glu-tathione beads钓取目的蛋白.结果:G3BP Domain 1～5片段均成功连接至载体pGEX-4T-1,在大肠杆菌BL21中可得到稳定表达的融合蛋白.结论:GST-G3BP Domain 1～5的融合表达质粒构建成功.
关键词： G3BP 质粒构建 GST-pull down 融合蛋白 -
G3BP和VEGFR-3在大肠癌中的表达及意义
[目的]探讨G3BP和VEGFR-3在大肠癌中的表达及其意义.[方法]选取60例经手术切除癌组织后的大肠癌病人分别选取癌组织和癌旁组织,应用Western blot方法分别测定G3BP和VEGFR-3在癌组织和癌旁组织中的表达,分析其相关性.[结果]大肠癌组织中G3BP表达的阳性率为70.0%,癌旁组织中未检出G3BP表达;G3BP表达与大肠癌Dukes分期(P＜0.05)、淋巴结转移(P＜0.05)有显著性相关.大肠癌组织VEGFR-3阳性表达率为58.3%,明显高于癌旁组织VEGFR-3的阳性表达率18.2%(P＜0.05);VEGFR-3表达与大肠癌患者的Dukes分期(P＜0.05)、淋巴结转移(P＜0.05)有显著相关性.G3BP和VEGFR-3在大肠癌组织中表达呈正相关(r=0.376,P＜0.05).[结论]大肠癌中G3BP和VEGFR-3存在明显的高表达,与患者Dukes分期、淋巴结转移关系密切,G3BP和VEGFR-3之间存在显著性相关.
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G3BP在肿瘤细胞中的研究进展
G3BP是1996年在法国Rhone PoulencRorer 实验室于由Parker F等从生长状态的中国仓鼠肺成纤维细胞中首次克隆.它是一种位于细胞质中RasGAP SH3结构域特异性结合蛋白,参与Ras下游信号通路.有研究发现,RAS GAP的SH3结构域对于信号转导途径发挥作用是必不可少的,而且还能以RAS非依赖方式调节Rho介导的细胞骨架重建以及细胞凋亡.G3BP是第一个被证实与GAP的.
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鼻腔、鼻窦内翻性乳头状瘤中G3BP、Stathmin的表达及意义
目的 检测Stathmin、G3BP蛋白在鼻腔、鼻窦内翻性乳头状瘤(NIP)、下鼻甲黏膜(INCM)及鼻鳞状细胞癌(NSCC)中的表达情况,及其在NIP中可能的作用及相互关系.方法 采用免疫组织化学法(PV-9000二步法)检测G3BP及Stathmin蛋白在34例NIP病理标本蜡块切片中的表达情况,并同时检测20例下鼻甲黏膜以及12例鼻鳞状细胞癌组织标本蜡块切片中两蛋白的表达作为对照,运用SPSS 13.0软件进行统计学分析,观察两指标在不同组织中的表达情况,分析其在NIP中的表达有无相关性.结果 按本实验所采用计数标准,Stathmin、G3BP 蛋白在NIP组织中的阳性表达率分别为52.9％、73.5％,均明显高于在下鼻甲黏膜组织中的表达率0％、0％,两者差异有统计学意义(P ＜0.05)；Stathmin蛋白及G3BP蛋白在鼻鳞状细胞癌组织中的阳性表达率分别为75％、83.3％,均高于在NIP组织中的表达,Stathmin在两组织中的表达差异具有统计学意义(P＜0.05),G3BP在两组织中的表达差异无统计学意义(P＞0.05)；两种蛋白在NIP中的表达具有正相关性(rs＞0,P＜0.001).结论 Stathmin、G3BP蛋白在NIP组织中高表达,提示其可能与NIP的复发性、侵袭性有密切联系；Stathmin、G3BP蛋白的表达具有相关性,两者的联合检测可能对肿瘤的诊断及检测具有积极意义.
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G3BP与肿瘤的关系
肿瘤严重威胁到人类的健康,但是它的发病机制和特异性治疗方法现在仍然困扰着我们.G3BP(Ras -GTPase- activating protein SH3 domain binding protein)是Ras信号传导通路中GTP酶SH3结构域特异性连接蛋白,在真核生物进化中高度保守.在受生长因子或活性Ras刺激后,Ras信号通路中GTP酶SH3结构域在细胞骨架的形成、细胞粘附和基因表达中发挥一定作用.G3BP是早发现的能与Ras通路中GTP酶SH3结构域结合的蛋白.
