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miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用
目的：利用体外细胞模型和基因敲低模型评价 miR-17-92在急性肝脏损伤中的作用。方法利用慢病毒 LV-miR-17-92感染正常人肝细胞系L02，获得稳定过表达 miR-17-92肝脏 L02细胞，利用四氯化碳模拟肝细胞损失，MTS 法检测 miR-17-92高表达L02细胞和对照细胞的存活率。利用 Alb-cre 转基因小鼠和 miR-17-92-loxp 转基因小鼠杂交，获得肝脏组织特异的miR-17-92基因敲低小鼠。利用四氯化碳和伴刀豆球蛋白A，分别建立两种急性小鼠肝损伤模型。取肝脏组织进行 HE染色，眼球取血检测谷丙转氨酶、谷草转氨酶，进而评价miR-17-92在急性肝脏损伤中的功能和作用。结果 Q-PCR 结果显示慢病毒感染显著提高了 L02细胞中 miR-17-92的表达。MTS 结果显示四氯化碳处理明显抑制了 L02细胞的生长，而与对照组相比，miR-17-92过表达提高了四氯化碳处理后细胞的存活率（P <0.05）。基因组PCR 结果和肝脏 Q-PCR 分析均显示肝脏特异 miR-17-92基因敲低小鼠肝脏中 miR-17-92的表达显著降低。小鼠腹腔四氯化碳给药能够显著诱导野生型小鼠肝脏 miR-17-92的水平，而基因敲低小鼠中 miR-17-92表达无明显变化。在四氯化碳和伴刀豆球蛋白 A 肝脏损伤模型中，与对照组相比，miR-17-92肝脏特异性敲低小鼠的肝脏病理学损伤明显加重，提示 miR-17-92可能参与了急性肝损伤的修复过程。结论肝脏损伤能够诱导 miR-17-92表达增加，而miR-17-92过表达对四氯化碳诱导的肝细胞损伤具有保护作用，miR-17-92敲除则加重了四氯化碳和伴刀豆球蛋白 A诱导的急性肝损伤。因此，miR-17-92在急性肝脏损伤中起保护作用。
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ConA 重复给药建立 ACLF 免疫状态动态转变的小鼠模型
背景：慢加急性肝衰竭（ACLF）是我国常见的肝衰竭类型，目前尚缺乏能有效模拟 ACLF 免疫状态动态转变的动物模型。目的：通过刀豆球蛋白 A（ConA）重复给药，建立模拟 ACLF 免疫状态动态转变的动物模型。方法：小鼠随机分为对照组和 ConA 重复给药组，ConA 重复给药组小鼠给予球后内眦静脉丛注射 ConA 15 mg/ kg，每隔48 h 一次，共5次，对照组给予等体积0.9% NaCl 溶液。CBA 法检测外周血 IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α、IFN-γ、MCP-1水平，并测定 IL-10/ TNF-α比值；流式细胞术检测外周血中单核细胞 HLA-DR 表达、CD4+ T 细胞数量及其比例以及 PD-1表达。结果：随着给药次数增加，ConA 重复给药组小鼠外周血细胞因子从促炎细胞因子为主转变成抗炎细胞因子为主。与对照组相比，ConA 重复给药组外周血中单核细胞 HLA-DR 表达下降（P <0.05）；CD4+ T 细胞数量和比例下降（P <0.05），PD-1表达上调（P <0.05）。结论：本研究通过 ConA 重复刺激成功建立了模拟 ACLF 免疫状态从全身炎症反应综合征（SIRS）到代偿性抗炎反应综合征（CARS）动态转变的动物模型。
