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防止免疫组化染色组织脱片的处理方法
在免疫组化染色过程中,切片需要长时间在液体中浸泡,并要经受高温、高压、抗原修复的考验,因此脱片现象经常发生,尤其在组织处理不佳时更加明显,为了解决这一难题,我科做了大量的探索工作,终找到了一种简便可行的方法,能有效防止脱片现象的发生.
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介绍一种免疫组化防脱片的制作方法
于免疫组织化学染色步骤多,水洗时间长,组织切片容易从载玻片上脱落,所以免疫组织化学染色时载玻片需要防脱片处理.防脱片处理方法很多,但到目前为止还没有较满意及较规范的方法.我们在长期的实践中总结出一种防脱片的制作方法,此法以小剂量的防脱片制剂制作大量的防脱载玻片,而且操作简便,效果满意.具体方法介绍如下.
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高压锅水浴法修复组织抗原防脱片技术的应用
目前用于免疫组化的抗体近千种,不同抗体对病理切片的要求不尽相同.有些抗体(单抗或多抗)必须在组织切片经高压修复后才能有效使用,如ER、PR、p53及一些多药耐药标记等.用于免疫组化的病理组织,经福尔马林固定后许多抗原决定簇被醛基交联封闭,无法与抗体结合,采用高温高压(下称常规法)处理这些组织,就可破坏醛基交联,使抗原暴露,从而与抗体有效结合.
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介绍一种免疫组化染色防脱片制作方法
免疫组化是一种多步骤、多环节、多因素影响的实验技术,尤其是AP的发展成熟,高压及热处理技术在抗原修复中的广泛应用,进一步要求组织切片提高对物理化学的耐受能力,否则易产生组织脱片,造成人力物力的损耗并延长了诊断的时效,所以高品质的防脱片技术能更好地保证病理诊断工作的质量和速度.我们通过多年的实践,总结出一种简便易于标准化的防脱片制作方法,现介绍如下.
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牙和骨切片的粘片剂防脱片效果及应用方法探讨
牙和骨切片HE尤其是免疫组织化学染色需多次更换试剂、改变温度、反复水洗,经常造成切片易皱褶、卷曲、与载玻片分离(脱片).目前尚无理想的防止牙和骨切片染色脱片的方法,亦未见防止牙和骨切片染色脱片的报道.以下是我们探讨牙和骨切片的氨醛酸乙基硅(APES)、多聚-L-赖氨酸(PLLS)两种粘片剂的防脱片效果和应用方法.
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两种防脱片剂在免疫组化染色中的应用比较
目的:探讨多聚赖氨酸及APES在免疫组化染色中防脱片的作用。方法50例经10%中性甲醛液固定的各种人体组织,同一蜡块切片分成两组,对照组50例使用APES(3-氨丙基-乙氧基甲硅烷)涂胶防脱片,观察组50例使用多聚赖氨酸工作液处理,比较两组脱片情况。结果观察组完整贴片率为100%,对照组完整贴片率为92%,观察组完整贴片率优于对照组(P<0.05)。结论多聚赖氨酸能够促使组织更加粘附于玻片,使实验过程顺利进行。
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免疫组化染色中防脱片的技术改进
应用抗原修复技术暴露被封闭的组织抗原决定簇,是免疫组织化学技术中的关键步骤.微波抗原修复技术是一种有效的抗原修复方法[1],目前该技术已广泛应用于病理切片的免疫组织化学染色操作中.
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提高脑组织冰冻切片质量的几点体会
目的:探讨减少脑组织冰冻切片脱片和增加脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果准确性的方法,为脑组织冰冻切片的广泛使用进一步奠定实验基础.方法:在保证实验真实性和科学性的前提下,将现有的脑组织冰冻切片技术结合在脑组织冰冻切片过程中所遇到的问题,以明胶硫酸铬钾处理载玻片,预冷的NS和4%多聚甲醛灌注固定组织,液氮速冻脑组织进行冰冻切片.结果:明胶硫酸铬钾处理载玻片的方法减少了冰冻切片脱片,预冷的NS和4%多聚甲醛提高了脑组织灌流固定效果,液氮速冻脑组织减少了冰晶产生.结论:此方法使脑组织冰冻切片脱片情况下降,冰晶产生减少,提高了脑组织冰冻切片免疫组织化学染色结果的准确性,该方法值得在临床和科研实验室中积极推广使用.
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一种简单的制作多聚赖氨酸黏附载玻片方法
近年来,由于分子生物学基础研究的飞速发展,免疫组化技术和原位杂交技术等检测方法不断普及,黏附载玻片的应用也日益广泛.其中黏附剂多采用多聚赖氨酸,将其与双蒸水按1∶ 9稀释后浸泡载玻片,晾干后备用.此方法虽可一次制作出大量黏附载玻片,但防脱片效果并不理想.经过不断的探索和实践,我们通过使用棉签直接涂片和降低多聚赖氨酸稀释度的方法,取得了良好的效果,现介绍如下.
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四种制作多聚赖氨酸免疫组化黏附载玻片方法的比较
随着病理学技术的不断发展,免疫组化染色技术以其操作简单、敏感性高、特异性强、可将形态和抗原定位结合起来等优点,在临床肿瘤病理诊断及鉴别诊断中已广泛应用[1].免疫组化染色过程中,切片需经长时间在液体中孵育,并要经受高温、高压、抗原修复等步骤的处理,因此脱片现象时有发生,尤其在组织处理不佳时更加明显.本科室采用同一浓度黏附剂的四种不同涂胶方法比较,发现此四种方法制作的涂胶片对免疫组化染色结果无影响,但防脱片效果不尽相同,现介绍如下.
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网状纤维染色中脱片的解决方法
网状纤维染色技术是一项特殊的病理染色技术.在网状纤维染色过程中,脱片现象经常出现,过去采用的封固防脱方法烦琐,操作过多,切片不洁,很不方便.我们经过长期的观察、实践、改进,用一种简单易行的方法在防脱片方面取得很好的效果,染色的选择性也相应有所提高.现将具体方法介绍如下.
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陈旧石蜡组织块的免疫组织化学染色及防脱片体会?
目的:总结陈旧石蜡组织块的免疫组织化学染色及防脱片经验。方法选取包埋时间为4年的金黄地鼠胰腺和肝脏石蜡组织块各150个,按照本课题组改进的实验方法进行切片及免疫组织化学染色。结果镜下观察显示,切片染色阳性结构清晰,无非特异性背景着色,脱片率约为10%。结论陈旧石蜡组织块在自来水里浸泡3~4 d 后再切能够提高切片质量;在免疫组织化学中烤片、抗原修复、一抗均是影响脱片的关键环节。
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三种粘片剂及不同烘烤温度和时间对免疫组化切片的影响
免疫组织化学染色过程中,因步骤多、微波高温修复、37℃孵育等因素,常出现脱片问题 ,造成染色的失败,浪费人工及试剂.为了解决脱片问题,同时又不使抗原或抗体受到破坏 ,我们选取了经免疫组化染色确定为强、中、弱三种反应强度的标本,分别用硌矾明胶、A PES(3-Amino Propyltriethoxy Silane)、多聚赖氨酸(Poly-L-Lysine)三种粘片剂处理切片,再将切片经37℃、50℃、6 0℃三种烘烤温度分别烤片1hr、2hr、3hr、4hr及12hr,使用同样方法及程序染色,观察切片的肉眼观、粘贴程度及抗原抗体保存情况,结果为:1.三种粘片剂对防脱片效果均较好,对抗原抗体均无影响,只是硌矾明胶处理的切片经复染后,切片外观着色,给人不干净的感觉;多聚赖氨酸较贵(150元/10ml),AP ES经济实用(40元/10ml).2.三种烘烤温度对切片的影响:37℃时需烤片12hr以上切片才粘贴牢固,但有时也有脱片,50℃需3hr以上,60℃烤1~2hr即可.3.五种烘烤时间对切片的影响:37℃时,1hr、2hr、3hr、12hr均有脱片现象,时间越短,脱片越多.50℃3hr~4hr效果较好,60℃时1hr~2hr效果较好,50℃及60℃时烘烤12hr及以上,染色强度减弱,说明有抗原或抗体丢失.综上所述,对于常规的免疫组化染色,以用APES处理,60℃烤片1hr~2hr为佳选择.
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一种节约型叠加法防脱玻片的制作方法
免疫组织化学染色过程中,因步骤多、微波高温修复、37℃孵育等因素,常出现脱片问题,造成染色的失败,浪费人工及试剂,同时在一般的制作过程中,常会剩余很多试剂而浪费.为了解决脱片和浪费问题,我科经过多次的试验,成功地总结出多聚赖氨酸叠加法,操作简单,节省试剂.
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脑组织切片免疫组化技术中防止脱片制作方法
在做人脑组织病检及小鼠、大鼠等小动物要取材脑组织的实验中,因为脑组织本身的组织结构,化学组成等因素,按常规取材、固定、脱水方式,做成组织切片再做免疫组织化学染色时,切片经抗原修复和缓冲液的长时间浸泡后,往往会部分或全部从载玻片上脱落,严重影响实验操作的进行与染色结果的判断~([1-3]).经过查阅资料多次摸索,本技术组总结出一套脑组织切片制片方法,可以有效防止脑组织切片免疫组化技术中组织切片脱片的发生.