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小鼠空肠黏膜微血管内皮细胞糖萼的透射电镜观察
目的 建立可靠的小肠黏膜微血管内皮糖萼显示方法,为探讨其生物学功能提供基础.方法 取小鼠6只,分为对照组和心脏灌注组,每组3只.对小鼠行乙醚吸入麻醉,心脏灌注组使用梯度阿尔新蓝溶液心脏灌注固定后取空肠组织,对照组直接取空肠组织,然后按照常规方法对其黏膜层制备超薄切片,透射电镜观察.结果 透射电镜观察显示,心脏灌注组小鼠肠黏膜微血管内皮细胞膜表面有明显的糖萼结构,呈不连续型和连续型两种形态,不连续性糖萼厚度为50～ 100nm,连续型糖萼厚度为20 ～ 30nm；而对照组未能观察到明显的糖萼结构.结论 常规透射电镜样品处理方法,不能显示肠黏膜微血管内皮细胞的糖萼,而心脏灌注阿尔新蓝溶液进行前固定,能够较好地保存该结构,是一种较为可靠的研究方法.
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氢化可的松对创伤失血性休克后小肠血管内皮糖萼的保护作用
目的 糖萼作为血管内皮的“保护层”具有维持其通透性的作用,本研究期望证实创伤失血性休克能够导致肠道微循环内皮糖萼层的破坏,同时氢化可的松具有糖萼及肠道微循环的保护作用.方法 本研究以大鼠创伤失血性休克模型为基础,采用激光多普勒血流检测法观察小肠血流灌注,通过电镜直接观察及肠系膜上静脉内硫酸乙酰肝素(heparan sulfate)和多配体聚糖-1(syndecan-1)质量浓度检测评估内皮糖萼的破坏程度,分别采用ELISA及Western-blot法检测肠系膜上静脉TNF-α质量浓度及小肠内皮细胞NF-κB的表达,以探讨可能参与的分子机制,同时以氢化可的松治疗作为对照,评估其对创伤休克后小肠微循环功能的保护作用.结果 大鼠在发生休克后早期(3 h)即已出现肠道血流灌注显著下降(P＜0.05),小肠血管内皮糖萼的组成成分硫酸乙酰肝素和多配体聚糖-1在创伤休克早期发生大量降解(P＜0.01),同时电镜亦发现小肠微血管内皮糖萼层发生破坏变薄,氢化可的松的干预不仅缓解了糖萼的破坏,同时改善了创伤休克后小肠血流的灌注.创伤失血性休克后肠系膜上静脉血中TNF-α质量浓度较外周血显著升高,同时小肠内皮细胞NF-κB亦出现高表达,而氢化可的松的干预明显遏制了小肠内皮NF-κB的表达及TNF-α的产生.结论 创伤失血性休克可能导致了糖萼的破坏以及由此造成的小肠微循环障碍,内皮细胞NF-κB/TNF-α系统可能参与了糖萼的破坏的机制.以糖萼作为治疗靶点,氢化可的松可能具有较好的疗效.
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舒洛地特对高糖作用下人腹膜间皮细胞炎症及纤维化因子表达影响
目的 研究高糖对人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)糖萼组成成分透明质酸(hyaluronic acid,HA)、核心蛋白聚糖(decorin,DCN)和炎症及纤维化因子(白细胞介素6,interleukin-6,IL-6);转化生长因子-β1,transforming growth factor-β1,TGF-βl)表达的影响,以及观察舒洛地特(sulodexide,SLX)对上述因子表达的影响.方法 将HPMCs随机分为以下各组:1.对照组;2.高糖组:①不同浓度组:1.5％,2.5％,4.25％葡萄糖作用48h;②不同时间组:2.5％葡萄糖作用不同时间(0,6,12,24,48,72h);3.高糖+SLX组:2.5％高糖+不同浓度舒洛地特(50 μ g/ml,400 u g/ml,800μg/ml,1200 μ g/ml)作用48h.ELISA法检测各组上清液中HA、DCN、IL-6及TGF-β 1的蛋白表达情况.结果 1.与对照组相比,不同浓度的高糖作用下HPMCs HA表达增多[(172.074±3.223)pg/ml比(147.000±1.667) pg/ml,F=20.410,P=0.036],DCN表达增多[(2.435±0.150) ng/ml比(1.021±0.138)ng/ml,F=219.555,P＜0.001],IL-6表达增多[(67.981±1.655ng/l)比(45.637±1.143ng/l),F=160.674,P＜0.001],TGF-β1表达增多[(204.691±2.829)ng/l比(112.716±7.484) ng/l,F=1692.284,P＜0.001];不同时间的高糖作用下HPMCs HA表达增多[(205.986±2.746) pg/ml比(147.000±1.667) pg/ml,F=1225.533,P＜0.001],DCN表达增多[(1.422±0.134) ng/ml比(1.021±0.138)ng/ml,F=112.124,P=0.001],IL-6表达增多[(68.078±2.944) ng/l比(45.637±1.143) ng/l,F=69.690,P＜0.001],TGF-β1表达增多[(194.816±1.854) ng/l比(112.716±7.484) ng/l,F=1160.819,P＜0.001].2.与高糖组相比,SLX作用后能明显上调HA[(196.119±2.260) pg/ml比(172.074±3.223)pg/ml,F=120.845,P=-0.013]和DCN[(3.227±0.067) ng/ml比(2.859±0.175) ng/ml,F=15.413,P=0.008]的表达,明显下调IL-6[(67.927±2.467) ng/l比(75.371±2.386) ng/l,F=50.643,P=0.002]及TGF-β1[(232.778±31.029) ng/l比(292.347±3.857) ng/l,F=21.458,P=0.002]的表达. 结论 HPMCs存在HA和DCN的表达;高糖刺激可以反应性上调HPMCs的HA和DCN表达,但其表达不足以保护腹膜,而补充舒洛地特后HA和DCN表达显著上调,具有修复受损糖萼的作用;高糖可以显著上调IL-6及TGF-β1的表达,舒洛地特可以抑制高糖刺激下HPMCs IL-6和TGF-β1表达,从而抑制炎症和纤维化,保护腹膜功能.
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糖萼作为脓毒症潜在治疗靶点的研究现状
糖萼是血管内皮细胞上的多糖-蛋白复合结构,主要由蛋白聚糖(PG)和糖胺聚糖(GAG)构成,可作为血管壁的选择性通透屏障,并影响内皮细胞功能,它在包括脓毒症在内的许多疾病的病理生理过程中发挥着重要作用.脓毒症是感染引起的全身炎性反应综合征,实质是炎症反应和凝血紊乱.糖萼是脓毒症时先受损的部位,其结构受到破坏,功能受到影响,进而加剧病理变化.因此糖萼已成为脓毒症治疗的潜在靶点,对糖萼的保护和修复将成为脓毒症的新的治疗策略.
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血管内皮细胞糖萼与脂蛋白
血管内皮细胞糖萼是位于内皮细胞表面的一层多糖蛋白复合结构,在内皮细胞表面形成选择性通透屏障.在对糖萼进行概述后,主要针对在流动剪切力作用下,糖萼与物质传输,尤其是与大分子物质如低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)的关系展开论述.其关系体现为:一方面,糖萼的厚度和完整性影响LDL的浓度极化及跨内膜输运;糖萼中的硫酸肝素蛋白聚糖参与残余脂蛋白代谢的全过程.另一方面,LDL的氧化产物ox-LDL会破坏内皮细胞糖萼层的主要成分硫酸肝素.研究糖萼与脂蛋白的关系,将为阐明动脉粥样硬化的发病机理提供新的线索,并为将糖萼作为新的防治靶点提供更多依据.
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高胆固醇、高血压对大鼠脑动脉内皮糖萼的作用
目的:分别给易卒中型肾血管性高血压大鼠、正常血压大鼠饲以高脂饲料6周和16周,在电镜下观察其脑动脉内皮糖萼的变化.结果:高胆固醇可引起大鼠颈内动脉、大脑中动脉内皮糖萼变薄、分布不均匀,常伴缺失、结块现象,且高胆固醇时间越久、损害越严重.高血压也可引起大鼠大脑中动脉内皮糖萼同样的改变.这在增加脑血管的通透性,促进脂质的沉积和动脉粥样硬化的形成中可能起重要作用.
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内皮细胞糖萼对单肺通气肺损伤保护作用机制的研究进展
背景 内皮细胞糖萼位于血管内皮细胞腔面,由氨基葡聚糖、蛋白聚糖(proteoglycan,PG)和膜糖蛋白组成.内皮细胞糖萼是血管屏障的重要组成部分,它在调节血管壁通透性、介导剪切力对内皮细胞信号转导、抑制凝血与血细胞的黏附过程中起着重要调节作用.研究显示,内皮细胞糖萼对单肺通气时肺损伤有一定的保护作用,但其保护作用的机制尚未完全阐明.目的 探索内皮细胞糖萼对单肺通气肺损伤的保护作用和可能机制. 内容 对内皮细胞糖萼保护和被损害内皮细胞糖萼修复的重要意义、内皮细胞糖萼与由单肺通气诱导的肺损伤的密切关系进行综述. 趋向 为预防和治疗单肺通气相关性肺损伤提供一个新的思路.
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内皮细胞在肾小球选择性滤过及蛋白尿形成中的作用
肾小球滤过膜是肾小球选择性滤过功能的结构基础,从内至外由肾小球内皮细胞(EC)、基膜(glomerular basement membrane,GBM)和脏层上皮细胞(足细胞)构成.这三层结构构成了肾小球滤过的机械和电荷屏障,使分子量较大或分子量虽较小但带有负电荷的物质(如白蛋白)不能滤出至肾小囊.一旦肾小球滤过膜结构受到损伤,蛋白等大分子物质将透过滤过膜,形成蛋白尿.滤过膜结构的破坏是各种以蛋白尿为主要表现的肾小球疾病的共同机制.因此,研究滤过膜的生理功能和损伤机制,对于深入理解肾脏病的发生、发展至关重要.
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血管内皮细胞糖萼与心血管疾病
内皮细胞糖萼是覆盖于内皮细胞表面多种活性成分组成的绒毛状细胞结构.内皮细胞糖萼可调控血管通透性,介导剪切力诱导的一氧化氮释放,通过抑制凝血及细胞粘附发挥一系列血管保护作用.而糖萼的降解可能与众多心血管疾病有关.该文就内皮细胞糖萼与心血管疾病的关系作一综述.
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内皮细胞表面糖萼在脓毒症中的研究进展
脓毒症的病死率居高不下,仍是危重患者死亡的重大原因.但其病理生理机制十分复杂,尚未完全明确.内皮细胞在脓毒症的发生发展中扮演着重要角色,保持其表面糖萼的完整性可在一定程度上减轻脓毒症损伤;而糖萼破坏介导了一系列病理生理反应,包括通过细胞旁途径或胞内途径使血管通透性增加、增加白细胞对内皮细胞的黏附以及各种细胞因子促进炎性反应、活化凝血酶等使凝血功能障碍、促进一氧化氮合成使血管紧张度改变.糖萼的严重破坏作为内皮细胞损伤的第一步可作为脓毒症早期诊断和预后指标,为脓毒症诊断治疗提供新的思路.
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脓毒症内皮系统损伤与器官功能障碍的关联
脓毒症是宿主因病原体感染而发生的全身系统性免疫反应,在《第三版国际脓毒症定义共识及相关临床标准》中强调了器官功能障碍的发生.脓毒症的病理生理过程复杂,内皮系统损伤是脓毒症的特征之一,表现为微循环调控障碍、屏障功能丧失、免疫细胞侵袭组织等,导致器官缺血、水肿、炎性损伤进而出现器官功能障碍.近年来对内皮糖萼的研究认为,糖萼在脓毒症内皮损伤中也起到重要作用.随着脓毒症内皮系统损伤与器官功能障碍发生机制的研究深入,临床评估技术与临床试验也有新的进展.
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镧示踪法透射电镜显示肾脏细胞糖萼的方法学研究
目的 不同方案灌注小鼠后电镜观察肾脏各种细胞糖萼的显示情况,探讨镧示踪法显示肾脏细胞糖萼的佳方法.方法 根据灌注方案的不同,将C57/BL6小鼠分为3组:①生理盐水组:小鼠放血后,用生理盐水5 ml自主动脉灌注,取肾脏后用2％硝酸镧一戊二醛固定液固定;②硝酸镧固定液组:用2％硝酸镧一戊二醛固定液5 ml相同方法灌注,取肾脏后固定方法同前;③硝酸镧溶液组:用2％硝酸镧溶液和2％硝酸镧一戊二醛固定液5 ml先后进行灌注,取肾脏后固定方法同前.各组均应用透射电镜观察肾脏的肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞、足细胞和肾间质细胞连接的糖萼的显示情况,计算各组不同肾脏细胞糖萼的显示率,并进行比较.结果 镧示踪法透射电镜显示的小鼠肾脏细胞的正常糖萼表现为附着于细胞表面的一层电子致密物层.生理盐水组的肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞糖萼层的显示率均为0％;足细胞糖萼的显示率为20％;肾间质细胞连接的糖萼显示率(92％)较高.硝酸镧固定液组的肾间质血管内皮细胞和肾小球内皮细胞显示率较低(分别为16％和12％);足细胞糖萼和细胞连接的糖萼层显示率相对较高(分别为84％和96％).硝酸镧溶液组的肾脏各种细胞糖萼均能清晰显示,肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞、足细胞和细胞连接糖萼的显示率分别为100％、96％、92％和100％.与生理盐水组和硝酸镧固定液组比较,硝酸镧溶液组的肾间质血管内皮细胞、肾小球内皮细胞糖萼的显示率均显著增高(P＜0.01).硝酸镧固定液组和硝酸镧溶液组的足细胞糖萼的显示率均较生理盐水组显著增高(P＜0.01).各组的肾间质细胞连接糖萼的显示率无统计学差异(P＞0.05).结论 2％硝酸镧溶液和2％硝酸镧一戊二醛固定液先后灌注小鼠,取肾脏用相同固定液固定后行透射电镜检查,能清晰显示肾脏各种细胞糖萼层,尤其是肾脏血管内皮细胞糖萼层,这为肾脏糖萼的相关研究提供一种可靠的实验方法.
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糖萼的作用及其在脓毒症中的研究进展
糖萼(glycocalyx)作为内皮细胞腔内侧的多糖结构,主要由蛋白聚糖、氨基葡聚糖(glycosaminoglycans,GAGs)、膜糖蛋白及血浆蛋白组成.糖萼对维持内皮细胞的通透性、形态及结构、血管内微环境有着重要作用,参与包括脓毒症在内多种疾病的生理病理过程.而在脓毒症时,各种炎症因子的作用损伤糖萼的完整性,从而导致糖萼的功能障碍.
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糖萼的内皮保护作用与动脉粥样硬化
血管内皮功能障碍在动脉粥样硬化的发病机制中担当着重要角色.作为血管内皮的保护性屏障,糖萼起着调控血管通透性,介导血流剪切力诱导的一氧化氮释放,抑制白细胞、血小板与内皮细胞的粘附及抗凝等一系列作用.本文主要就糖萼的完整性及其内皮保护的重要意义,以及其与动脉粥样硬化的密切关系作一综述.
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乙酰肝素酶对脓毒症肾小球内皮细胞糖萼的影响
目的 观察乙酰肝素酶对脓毒症肾小球内皮细胞糖萼的影响,并探讨其预防措施.方法 C57BL/6小鼠给予脂多糖(LPS)或肿瘤坏死因子α(TNF-α)腹腔注射,1h后处死,镧示踪后透射电镜观察肾小球内皮细胞糖萼变化,Western印迹检测肾皮质的乙酰肝素酶蛋白表达;人肾小球内皮细胞用TNF-α作用1h,Western印迹检测乙酰肝素酶的活化蛋白变化.小鼠注射LPS同时给予肝素钠和肝素酶Ⅲ,电镜观察肾小球内皮细胞糖萼的变化;留取小鼠24 h尿液,检测各组尿白蛋白和尿肌酐,计算尿白蛋白-肌酐比值,进行比较.结果 镧示踪透射电镜显示,LPS组和TNF-α组肾小球内皮细胞糖萼均降解,而足细胞糖萼完整.小鼠注射LPS后1h开始,肾皮质乙酰肝素酶蛋白表达显著增高(P＜0.01).TNF-α刺激人肾小球内皮细胞后乙酰肝素酶活化增加(P＜0.05).小鼠注射LPS同时给予肝素钠抑制乙酰肝素酶,肾小球内皮细胞糖萼完整,尿白蛋白-肌酐比值显著低于LPS组(P＜0.05);同时给予肝素酶Ⅲ使肾小球内皮细胞糖萼降解,尿蛋白-肌酐比值无改善,显著高于对照组(P＜0.01).结论 脓毒症初期,TNF-α使肾小球内皮细胞的乙酰肝素酶表达和活化增加,肾小球内皮细胞糖萼降解,发生蛋白尿;抑制乙酰肝素酶能保护肾小球内皮细胞糖萼,减少尿蛋白.
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血管内皮糖萼研究进展
血管内皮糖萼覆盖于所有血管内皮细胞表面,在血管病理生理活动中起着重要作用.血管内皮糖萼可影响内皮细胞功能,调节血细胞和内皮细胞的相互作用,防止白细胞在内皮细胞上的粘附,此外,还是血管壁的选择性通透屏障和血流作用力的力学感受器.本文介绍了血管内皮糖萼的结构和功能与常用的研究技术,并对我们关于剪切力诱导血管内皮糖萼重构的新研究成果进行了综述.
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低分子肝素钠对阿霉素肾病综合征大鼠糖萼及血浆TNF-α、 IL-6的影响
目的 采用低分子量肝素钠(LMWH)对阿霉素诱导的原发性肾病综合征(PNS)大鼠进行抗凝治疗,观察大鼠肾脏组织Glypican-1、Syndecan-1及血浆HS、HPSE、Syndecan-1、TNF-α和IL-6水平变化,了解其对NS大鼠糖萼(GCX)及血浆TNF-α、IL-6的影响.方法 将30只健康雄性SD大鼠随机平均分为5组:正常对照组,模型组,LMWH治疗5、7、9天组.治疗组于皮下注射LMWH,分别在给药后5、7、9天收集24小时尿液并检测尿蛋白含量,同时用ELISA法检测肾静脉血浆HS、HPSE、Syndecan-1、TNF-α、IL-6和血总胆固醇及血白蛋白含量;用蛋白免疫印迹法(WB)检测大鼠肾皮质GCX核心蛋白Glypican-1及Syndecan-1含量;取大鼠肾脏组织做HE染色,观察行LMWH治疗后的病理改变.结果 LMWH治疗组大鼠血浆HS含量较模型组减少(P＜0.05)、HPSE含量较模型组增加(P＜0.05)、Syndecan-1较模型组升高,Syndecan-1在给药第9天出现下降趋势(P＞0.05);血浆TNF-α、IL-6含量较模型组明显降低(P＜0.05),但治疗组间比较无明显差异;24小时尿蛋白含量显著下降,血浆白蛋白水平回升,血浆TC含量明显减少;WB检测结果示肾皮质内Glypican-1及Syndecan-1含量较模型组增加;HE染色结果显示LMWH治疗组肾小管内透明管型明显减少.结论 LMWH能减少肾小球内皮糖萼的脱落,保护内皮糖萼,并有效降低肾病综合征大鼠血清TNF-α、IL-6含量;减少尿蛋白量,促进血浆白蛋白回升,这可能是其对NS肾脏的保护机制之一.
