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野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用
目的:研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞的凋亡诱导作用,探讨TFC治疗AA的町能机制.方法:SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC 高、中、低剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPI)组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;原位末端标记检测(TUNEL)法观察滑膜组织中滑膜细胞的凋亡改变;流式细胞仪检测体外培养滑膜细胞的凋亡变化.结果:AA大鼠滑膜细胞出现凋亡抑制,增殖过度的类瘤样细胞特征,TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TFC(168,336 mg·kg-1)治疗组大鼠滑膜细胞的凋亡率较模型组显著升高.结论:TFC可抑制AA大鼠滑膜细胞的过度增殖,诱导滑膜细胞凋亡,这可能是其治疗AA的机制之一.
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野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠氧自由基代谢的影响
目的:探讨野菊花总黄酮(total flavonoids of Chrysanthemum indicum,TFC)对佛氏完全佐剂诱导的佐剂性关节炎(AA)大鼠模型的继发性肿胀作用及自由基代谢和免疫调节的影响.方法:用佛氏完全佐剂(FCA)建立大鼠的佐剂性关节炎模型,用足趾容积测量仪检测大鼠的继发性肿胀,观察TFC对其的治疗作用;采用试剂盒检测佐剂性关节炎大鼠的血清和腹腔巨噬细胞培养上清中的SOD活性、MDA含量以及NO水平;采用ConA诱导测定大鼠脾淋巴细胞增殖反应,采用小鼠脾细胞增殖法测定IL-2活性.结果:与模型组比较,TFC能改善佐剂性关节炎大鼠的继发性足趾肿胀,能降低血清和腹腔巨噬细胞中MDA和NO含量,升高SOD活性,同时促进脾淋巴细胞增殖和IL-2活性.结论:TFC可以抑制佐剂性关节炎大鼠的继发性足趾肿胀,其机制可能与其抗氧化作用和免疫调节有关.
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野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡及Caspase-3表达的影响
目的 研究野菊花总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,并探讨其作用机理.方法 20只SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,电镜观察细胞形态改变,Western blotting分析大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白的表达变化,annexinV荧光染色检测caspase-3特异性阻断剂对大鼠滑膜细胞凋亡的抑制作用. 结果 TFC能诱导大鼠滑膜细胞凋亡,电镜规察到典型的凋亡细胞核.大鼠滑膜细胞caspase-3活化片段蛋白表达随TFC浓度增加而明显升高,caspase-3特异性阻断剂可以明显减轻AA大鼠滑膜细胞凋亡. 结论 TFC可促进大鼠滑膜细胞凋亡而达到治疗AA作用,其机制与TFC诱导滑膜细胞凋亡及提高caspase-3的活化有关.
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野菊花总黄酮诱导佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞凋亡
目的 研究野菊花有效成分总黄酮(TFC)对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜细胞凋亡的影响,探讨其治疗作用的机理.方法 SD大鼠右后足跖皮内注射0.1ml弗氏完全佐剂复制AA模型;24d后组织块培养法分离培养大鼠膝关节滑膜细胞,用MTT法检测TFC对滑膜细胞增殖的影响;Hoechst 33258荧光染色,观察滑膜细胞核是否出现凋亡小体;琼脂糖凝胶电泳观察DNA碎片.结果 MTT法显示TFC抑制滑膜细胞增殖,并且呈剂量依赖性趋势,药物作用24h的IC50为112mg/L;TFC能诱导滑膜细胞凋亡,电镜观察到典型的凋亡细胞核,电泳呈现出阶梯状条带,Hoechst 33258染色观察到细胞核出现凋亡小体.结论 TFC可能会通过抑制AA大鼠滑膜细胞的增生,促进滑膜细胞的凋亡而达到治疗类风湿性关节炎的作用.
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野菊花总黄酮对宫颈炎模型大鼠IL-1β、PGE2和TNF-α表达的影响
目的:探讨野菊花总黄酮对宫颈炎模型大鼠的作用机制.方法:60只SD大鼠随机选取10只作为正常组,其余大鼠用苯酚胶浆造模.造模成功后随机分为模型组,野菊花总黄酮低、中、高剂量组及纳米银抗菌凝胶组5组,每组10只.除模型组、正常组外,其余各组用1 mL注射器吸取相应药液(0.1 mL/200 g)注入阴道深处,正常组、模型组给予等量基质.连续阴道给药12 d后,采用放免法测定各组大鼠白介素-1β(IL-1β)、前列腺素E2(PGE2)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,取出子宫组织称重,计算脏器指数.结果:野菊花总黄酮各剂量组大鼠血清IL-1β、PGE2和TNF-α水平及脏器指数较模型组显著降低(P＜0.05).结论:野菊花总黄酮可能通过降低机体IL-1β、PGE2和TNF-α水平从而减轻炎症反应.
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复方总黄酮聚乳酸-羟基乙酸共聚物微囊的制备及体外释药特性
目的:以聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)作为载体材料制备复合骨碎补总黄酮(TFRD)和野菊花总黄酮(TFC)的TF-PLGA缓释微囊,探讨微囊的佳制备工艺及其体外缓释特性.方法:以PLGA、TFRD和 TFC为原料,采用复乳-溶剂挥发法制备TF-PLGA缓释微囊;以包封产率(EE)为评价指标,通过单因素实验及正交实验进行工艺优化,筛选佳的工艺参数;光学显微镜(LM)和扫描电子显微镜(SEM)下观察微囊的形态特征、粒径大小和分布情况;采用提取法测定TF-PLGA微囊的体外累计释药率并绘制累计释放曲线.结果:单因素实验和正交实验优化的佳制备工艺,PLGA浓度为140 g·L-1,油相体积为1.4 mL,乳化速度为1 500 r·min-1,乳化时间为5 min.优化后微囊平均EE为(83.89±2.30)%,平均实际载药量(DL)为(5.90±0.07)%;LM和SEM下观察,微囊形态圆整,平均粒径为(44.34±14.68)μm,粒径分布较窄;体外释放实验检测,24 h累计释药率达40%,第50天后累积释药率超过90%.结论:TF-PLGA缓释微囊具有优良的载药及缓释效果,制备工艺简单,重复性良好.
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野菊花总黄酮-PLGA缓释微球的制备及其工艺优化
目的:制备野菊花总黄酮(TFC)-聚乳酸-羟基乙酸共聚物(PLGA)缓释微球,并对制备工艺进行优化.方法:采用复乳溶剂挥发法制备TFC-PLGA微球,观察初乳搅拌速度、聚乙烯醇(PVA)浓度和TFC与PLGA的投药比等不同因素对微球包封率(EE)的影响.显微镜观察微球大体形态;扫描电镜(SEM)观察微球表面形态和粒径大小;紫外分光光度法测量微球EE及其体外释放结果.结果:在搅拌速度为3000 r·min-1、PVA浓度为3.0％、TFC与PLGA投药比为1∶15的优化条件下,TFC-PLGA微球平均EE为(45.03±1.25)％,平均粒径大小为(102.20±1.97) μm.体外释放实验,24 h时微球累积释放率为22.07％,20 d时累积释放率达92.32％,TFC-PLGA微球具有明显的缓释效果.结论:采用优化的制备工艺可以制备出粒径适宜、分散较均匀、EE较高的TFC-PLGA缓释微球.
关键词： 野菊花总黄酮 聚乳酸-羟基乙酸共聚物 微球 缓释 -
野菊花总黄酮口腔生物黏附双层贴片质量标准研究
目的 研究与建立野菊花总黄酮口腔生物黏附双层片的质量标准.方法 采用TLC法对黏附片中野菊花总黄酮进行定性鉴别;分别以UV法和HPLC法对本品中的总黄酮和蒙花苷的量进行测定.结果 TLC斑点清晰,分离度好.芦丁在8～48 μg/mL范围内呈良好的线性关系,r=0.999 1,平均回收率为99.12％,RSD为1.95％.蒙花苷在0.096 ～1.924 μg范围内呈良好的线性关系,r=0.999 5,平均回收率为100.94％,RSD为1.65％.结论 该方法灵敏、准确、重复性好、专属性强,能够控制本品的质量.
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野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用
目的 探讨野菊花总黄酮联合顺铂对人骨肉瘤MG-63细胞抑制作用及可能的机制.方法 采用不同质量浓度野菊花总黄酮与顺铂单独及联合作用MG-63细胞;倒置相差显微镜观察细胞形态变化;CCK-8法检测细胞生长抑制率,并计算金氏公式Q值进行协同性分析;流式细胞仪和RT-PCR检测凋亡率及凋亡相关基因bcl-2、caspase-3和p21的表达情况.结果 野菊花总黄酮与顺铂单独及联合作用均能够抑制MG-63细胞增殖,诱导其凋亡,并下调bcl-2及上调caspase-3、p21基因的表达;Q值提示两者低质量浓度联合作用具有协同效应,而较高质量浓度联合作用则表现为叠加效应,未显示出拮抗效应.结论 野菊花总黄酮在诱导MG-63细胞凋亡起重要作用,但野菊花总黄酮中的单体发挥抗肿瘤作用和协同抗肿瘤的效果有待进一步深入研究.
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野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞超微结构及分泌功能的影响
目的:从关节滑膜超微结构和分泌功能的角度,探讨野菊花总黄酮(TF℃)对佐剂性关节炎(AA)大鼠治疗作用的机制.方法:SD大鼠复制AA模型;大鼠免疫后12 d开始分别灌胃TFC 84、168、336 mg/kg和对照药雷公藤多件片100mg/kg.组织块培养法分离培养大鼠滑膜细胞,透射电镜分析滑膜细胞内具分泌功能细胞器的形态学改变;放射免疫测定法检测滑膜细胞分泌IL-1β、TNF-α水平;RT-PCR检测滑膜组织IL-1β、TNF-α mRNA表达.结果:TFC 168、336 mg/kg可恢复A、B型滑膜细胞的细胞器分泌功能;纠正AA大鼠滑膜细胞分泌过高的IL-1β、TNF-α功能;RT-PCR也表明TFC可剂量依赖性的抑制IL-1β、TNF-α mRNA表达.结论:TFC可恢复AA大鼠滑膜细胞具分泌功能细胞器的形态,降低滑膜细胞分泌炎性介质的功能是其治疗AA的途径之一.
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野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响
目的 研究野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖功能以及滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响.方法 SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC大、中、小剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)对照组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;运用免疫荧光法检测各组滑膜组织TRAIL、TNF-α蛋白的表达.结果 TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TRAIL在模型组大鼠滑膜组织中的表达明显低于正常组;TFC各剂量组可上调TRAIL的过低表达,而TNF-α的检测结果与之相反.结论 以TNF-α为参照,TRAIL参与AA大鼠的发病过程,TFC可上调TRAIL蛋白的过低表达,这可能是其治疗AA的机制之一.
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野菊花总黄酮对大鼠肺纤维化的干预作用
目的 研究野菊花总黄酮(TFC)对大鼠肺纤维化(PF)的预防作用.方法 30只Wistar大鼠,随机均分为假手术对照组、模型组、TFC(168、336 mg/kg)组、强的松组.除假手术对照组外其余各组大鼠气管内一次性滴注盐酸平阳霉素诱导PF模型.次日TFC两组和强的松组分别给予TFC 168、336 mg/kg及强的松3.22 mg/kg,假手术对照组、模型组用生理盐水代替.给药后第28天处死全部大鼠.观察各组肺间质纤维化形成的病理变化;检测大鼠肺组织羟脯氨酸(HYP)、血清超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)含量;RT-PCR法观察各组大鼠肺组织TGF-β1 mRNA的表达.结果 与模型组比较,TFC组病理变化减轻,TFC能显著降低大鼠肺组织HYP以及血清中SOD、MDA 的含量并能下调大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达.结论 TFC可以改善盐酸平阳霉素诱导的PF大鼠一般情况,并通过抑制大鼠肺组织TGF-β1 mRNA表达,以达到抗纤维化的作用.
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野菊花总黄酮对酒精性脂肪肝大鼠的防治作用
目的 探讨野菊花总黄酮(TFC)对大鼠酒精性脂肪性肝的防治作用及部分机制.方法 以酒精联合脂肪乳剂灌胃,每天2次,连续6周,制备大鼠酒精性脂肪性肝模型.TFC(84、168、336 mg/kg)组和凯西莱组同时灌服相应药物.于实验第6周末采血,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨基转移酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、乙醇脱氢酶(ADH)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肝组织超氧化物岐化酶(SOD)、丙二醛(MDA),并做肝脏病理学检查.结果 TFC(168、336 mg/kg)组能明显降低酒精性脂肪性肝大鼠血清AST、ALT、TC、TG、ADH 、TNF-α水平,降低肝脏中MDA含量,增强SOD活性;同时病理组织学显示TFC能明显改善酒精性脂肪性肝炎大鼠的肝细胞脂肪变性.结论 TFC对大鼠酒精性脂肪性肝炎具有较好的防治作用.其作用机制可能与调节脂质代谢,减轻脂质过氧化损伤、提高血液中ADH含量,抑制TNF-α过表达有关.
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野菊花总黄酮纯化工艺优选
目的:优选大孔吸附树脂纯化野菊花总黄酮的工艺条件.方法:以总黄酮的吸附量和转移率为指标,考察树脂径高比、上样液浓度、上样液流速、吸附时间等影响因素.结果:野菊花总黄酮纯化工艺条件为药液上样浓度1.0～1.5g·L-1,大吸附量6mg·g-1,吸附速度1 BV· h-1,吸附时间0.5h,洗脱剂为体积分数50％乙醇,用量4 BV,洗脱速度2 BV/h.结论:AB-8型大孔吸附树脂能较好地纯化和富集野菊花中的总黄酮.
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野菊花总黄酮口腔生物黏附双层贴片成型工艺优化
目的:研究野菊花总黄酮口腔生物黏附双层片的成型工艺.方法:采用Franz扩散法优选可阻止有效成分渗透的保护层;以黏附力和释放度为指标,采用单因素试验筛选生物黏附材料,以正交试验优选载药量、黏附材料的比例及填充剂用量.结果:该贴片的黏附层为卡波普934P和羟丙基纤维素1∶2混合物,占75.8％,总黄酮20％,乳糖4％,微粉硅胶0.2％,以乙基纤维素作为黏附片的保护层.结论:该成型处方制成的野菊花生物黏附双层片具有较好的生物黏附性,背衬层可阻滞药物释放.
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野菊花总黄酮对人骨肉瘤Saos-2细胞增殖和凋亡的影响
目的:探讨野菊花总黄酮对人骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法:人骨肉瘤Saos-2细胞经野菊花总黄酮在不同浓度及不同时间作用后,倒置相差显微镜下观察细胞形态及细胞密度的变化,并采用CCK法检测野菊花总黄酮对细胞增殖的影响;流式细胞仪和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测不同药物浓度作用细胞48 h后的凋亡率以及凋亡相关基因Caspase-3、BCL-2、BAX的表达情况.结果:野菊花总黄酮对Saos-2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,显微镜下观察可见细胞形态变圆,体积变小,内部颗粒增多等凋亡的形态变化.流式细胞仪检测细胞的凋亡率与药物浓度正相关.药物作用细胞48 h后,Caspase-3和BAX表达上调,BCL-2表达下降,BCL-2/BAX比率下降.结论:野菊花总黄酮对人骨肉瘤Saos-2细胞具有增殖抑制及诱导凋亡的作用,其机制可能与下调BCL-2/BAX比率而激活Caspase-3相关.
