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参芪抑瘤方药物血清对胃癌MKN-45细胞周期阻滞及抗侵袭转移的影响
目的：探讨不同浓度参芪抑瘤方药物血清对胃癌 MKN-45细胞周期阻滞及抗侵袭转移作用的相关机制。方法60只SPF级Wistar大鼠，随机分为对照组和参芪抑瘤方低、中、高剂量组，每组15只。参芪抑瘤方低、中、高剂量组分别给予0.25、0.50、1.00 g原药材/mL药液灌胃，空白组给予等量饮用水灌胃，每日2次，连续7 d，末次灌胃2 h后取血，分离血清。MKN-45细胞经不同浓度药物血清处理后，流式细胞术检测细胞周期，免疫组化检测COX-2、PTEN蛋白表达。结果药物血清干预后细胞G0～G1期比例增加， S期比例减少；药物血清可降低MKN-45细胞COX-2蛋白阳性表达率，升高PTEN蛋白阳性表达率（P＜0.05）。结论参芪抑瘤方药物血清阻滞细胞周期及抗侵袭转移作用可能与影响COX-2、PTEN蛋白表达有关。
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胃癌细胞中STAT1的表观遗传学调控机制的研究
目的 研究抑制信号传导和转录激活因子1(STAT1)基因表达对胃癌MKN-45细胞增殖、侵袭、迁移等表观遗传学特性的影响.方法 将胃癌细胞分为三组:空白对照组不做任何处理,空载体对照组、STAT1 SiRNA处理组分别转染SiRNA和特异性干扰STAT1基因表达的STAT1 SiRNA.蛋白质印迹法(Western Blot)检测STAT1、血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白的表达;噻唑蓝(MTT)法检测细胞的增殖活性;Transwell法检测MKN-45细胞侵袭、迁移能力.结果 抑制STAT1表达后,MKN-45细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力显著降低(P＜0.05),且STAT1 SiRNA处理组细胞中VEGF、MMP-2、MMP-9表达量较空白对照组明显降低(P＜0.05);空载体对照组与空白对照组细胞的增殖活性、侵袭以及迁移能力、VEGF、MMP-9、MMP-2表达量比较差异均无显著性(P＞0.05).结论 STAT1可能通过调控肿瘤细胞的转移能力以及血管生成等抑制胃癌细胞增殖及侵袭、迁移能力.
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法米替尼在胃癌细胞MKN-45移植瘤中的作用
目的：探讨法米替尼在胃癌细胞MKN-45移植瘤中的作用。方法胃癌细胞MKN-45移植瘤裸鼠共20只按随机数字法分为对照组、法米替尼50 mg／kg 组、法米替尼100 mg／kg 组、法米替尼500 mg／kg组，5只／组，分别给予0.9％氯化钠注射液和50、100、500 mg／kg 法米替尼；每日1次，连续22 d，口服给药。筛选出高效低毒剂量（50 mg／kg）进行第2次动物实验，方法相同，MKN-45移植瘤裸鼠共40只随机分为8组（5只／组）：对照组（0.9％氯化钠注射液，每日1次，连续18 d，口服给药）；法米替尼组（50 mg／kg，每日1次，口服给药）；5-氟尿嘧啶（5-FU）组（10 mg／kg和20 mg／kg组，隔天1次，腹腔注射）；顺铂（DDP）组（3 mg／kg和6 mg／kg组，每周1次，腹腔注射）；紫杉醇（PTX）组（10 mg／kg组，每周1次；以及20 mg／kg组：每周2次，每次10 mg／kg；腹腔注射），连续18 d。给药过程中，记录裸鼠生长状况、肿瘤体积、裸鼠体质量、结束后肿瘤组织称质量等用来计算肿瘤抑制率和死亡情况，进而评估药物疗效和安全性。通过免疫组织化学CD34染色检测法米替尼用药后肿瘤血管的变化。结果与对照组相比，法米替尼50 mg／kg组和法米替尼100 mg／kg 组在给药第8天后裸鼠肿瘤体积明显生长减缓，用药22 d 后，各组裸鼠肿瘤体积[对照组（2036±805） mm3，法米替尼50 mg／kg 组：（343±167） mm3，法米替尼100 mg／kg组：（304±206） mm3]，差异有统计学意义（P＜0.05）。给药第14日开始至给药结束，法米替尼100 mg／kg组裸鼠体质量较对照组和法米替尼50 mg／kg组明显下降，而对照组和法米替尼50 mg／kg组裸鼠体质量比较差异无统计学意义（ P＞0.05）。用药22 d后，各组裸鼠体质量：对照组（21.58±2.32） g，法米替尼50 mg／kg组：（18.78±1.41） g；法米替尼100 mg／kg组：（15.08±2.63） g。法米替尼50 mg／kg剂量将作为安全有效剂量继续第2次实验。第2次实验对比对照组和各化疗组，法米替尼用药后肿瘤体积和终肿瘤质量均显著降低。法米替尼组抑瘤率为93.0％，远远高于其他单药组（5-FU组：10 mg／kg 16.6％，20 mg／kg组37.9％；DDP 3 mg／kg 54.3％，6 mg／kg 58.2％；PTX：10 mg／kg组22.9％，20 mg／kg组52.2％）。法米替尼组CD34表达较对照组明显降低（法米替尼组CD34－；对照组 CD34＋＋）。结论法米替尼较其他传统化疗药物对于胃癌有更好的抗肿瘤作用，为今后临床试验提供一定的理论支持。
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非甾体类抗炎药对MKN-45细胞影响的研究
目的:观察3种非甾体类抗炎药(non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs)阿司匹林、消炎痛、NS-398对人胃低分化腺癌细胞株MKN-45的影响,探讨非甾体类抗炎药治疗胃癌的可能机制.方法:采用生长曲线、细胞毒性试验、光镜、电镜、免疫细胞化学等技术,研究NSAIDs对胃癌细胞MKN-45的增殖抑制、形态学变化以及对COX-1,2、hMLH1、hMSH2的影响.结果:不同NSAIDs对细胞生长的抑制作用不同,NS-398的抑制作用强.阿司匹林、消炎痛、NS-398对MKN-45细胞的IC50值分别约为60Cμmol/L、80μmol/L、50μmol/L.扫描电镜检查发现MKN-45细胞表面的分泌泡有脱失现象.免疫细胞化学研究发现正常MKN-45细胞COX-2、hMLH1、hMSH2表达,COX-1不表达.30μmol/L NS-398作用于MKN-45细胞后COX-2表达缺失.结论:NSAIDs抑制MKN-45细胞生长,对细胞有毒性作用;COX-2选择性抑制剂NS-398在一定浓度可以抑制COX-2表达,对治疗胃癌有一定作用.
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消痰散结方干预胃癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达影响的研究
目的:观察消痰散结方对胃癌组织增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响,探讨消痰散结方抑制胃癌细胞增殖的作用机制.方法:建立裸鼠人胃癌MKN-45原位移植模型,采用随机数字表法随机分成生理盐水组,消痰散结方低、中、高剂量组,5-氟尿嘧啶(5-Fu)组,每组8只.观察指标有:①观察各组荷瘤鼠肿瘤生长情况及抑瘤率;②观察消痰散结方干预胃癌组织PCNA蛋白表达的影响.结果:消痰散结方对裸鼠人胃癌原位移植瘤有较好的抑制肿瘤生长作用,消痰散结方低、中、高剂量组抑瘤率分别为36.62%、44.82%、58.11%,呈现出剂量依赖效应.结论:消痰散结方有较好的抑制肿瘤生长的作用,其抑瘤作用机制可能与下调肿瘤细胞PCNA蛋白的表达有关,进而抑制细胞增殖、分裂,控制胃癌的复发与转移.
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胃癌组织中G9a表达的预后意义及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响
目的:探究组蛋白甲基转移酶G9a在胃癌组织中的表达及其与预后的相关性,并观察G9a抑制剂对胃癌细胞增殖和凋亡的影响.方法:通过Kaplan-Meier Plotter和Oncomine数据库分析G9a在胃癌组织中的表达水平及其与预后的相关性.选用人胃癌细胞株SGC-7901和MKN-45为研究对象,Western blotting方法检测细胞中G9a蛋白表达水平,以G9a抑制剂BIX01294处理胃癌细胞,观察细胞形态变化,CCK-8法和集落形成实验检测胃癌细胞增殖能力和集落形成率的变化,流式细胞术检测细胞凋亡的变化.结果:G9a在胃癌组织中高表达(P＜0.01),其高表达与预后不良呈正相关(P＜0.01).BIX01294能使胃癌细胞体积缩小、细胞间连接消失,甚至细胞皱缩、变圆、脱落等.BIX01294能显著抑制胃癌细胞集落形成和胃癌细胞的增殖(均P＜0.05),同时促进胃癌细胞凋亡(P＜0.05).结论:G9a在胃癌组织中高表达,其高水平表达与预后不良呈正相关;抑制G9a的表达可显著抑制胃癌细胞的增殖和促进细胞凋亡.
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PPARγ激动剂对MKN-45胃癌细胞系增殖及MMP-7基因表达的影响
目的:研究过氧化物酶增殖因子激活受体γ(peroxisome proliferators activated receptor γ,PPARγ)激活剂罗格列酮对人胃癌细胞系MKN-45增殖和MMP-7基因表达的影响.方法:不同浓度罗格列酮干预细胞后,用台盼蓝拒染法检测胃癌细胞株增殖活性,用RT-PCR法检测MMP-7基因表达情况.结果:罗格列酮作用24h明显降低MKN-45细胞的存活率,与时照组比较有显著差异(P＜0.05),细胞存活率随着药物浓度增加而降低;MMP-7基因表达随着药物浓度增加而下降.结论:在胃癌细胞株MKN-45中,罗格列酮与PPARγ作用而激活下级信号传导,抑制胃癌细胞的增殖,且下调MMP-7基因的表达.
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吡格列酮对胃癌细胞生长的影响及其机制的研究
目的:研究过氧化物酶增殖因子活化受体γ(PPARγ)在人胃癌细胞株MKN-45的表达;观察PPARγ激活剂吡格列酮对胃癌细胞生长的影响以及是否引起凋亡基因c-myc表达的变化,探讨其作用机制.方法:采用RT-PCR法检测PPARγ的表达,以不同浓度的吡格列酮干预细胞的生长,四甲基偶氮唑盐比色法检测吡格列酮激活剂对胃癌细胞株增殖活性的效应,RT-PCR法检测药物干预前后c-myc基因表达的变化.结果:PPARγ在胃癌细胞株MKN-45中有表达.0.01μmol*L-1吡格列酮对MKN-45细胞的增殖无明显影响;1μmol*L-1吡格列酮作用48h则明显降低MKN-45细胞的存活率,与不加吡格列酮的对照组比较有显著差异(P<0.05),随着药物浓度增加和培养时间延长,这一作用愈加明显.随着药物浓度的增加,c-myc基因的表达呈下降趋势.结论:PPARγ在胃癌细胞株MKN-45中有表达,PPARγ激活剂吡格列酮抑制胃癌细胞的生长,且引起c-myc基因表达的下调,其可能是PPARγ激活剂抑制MKN45细胞生长的机制之一.
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RAD001对胃癌MKN-45细胞生长影响的实验研究
目的 探讨RAD001对胃癌细胞株MKN-45细胞生长的影响及可能作用机制.方法 体外培养MKN-45细胞,给予RAD001干预后通过细胞计数检测MKN-45细胞数目,流式细胞术检测细胞周期分布,Western-blot检测核糖体40S小亚基S6K蛋白激酶(p70S6K)、真核起始因子4E(eIF-4E) 结合蛋白1(4E-BP1)、S6蛋白表达及磷酸化情况.结果 RAD001作用于MKN-45细胞24 h:RAD001对MKN-45细胞的生长产生抑制作用,抑制作用具有时间依赖性;MKN-45细胞细胞周期发生改变,停滞在G0-G1期细胞比例增加;MKN-45细胞的4E-BP1、p70S6K、S6无明显变化,phosphate-p70S6K、phosphate - S6表达缺失,phosphate 4E-BP1表达下降.结论 RAD001是通过抑制mTOR 下游通路阻断4E-BP1 及p70S6K的磷酸化和蛋白质翻译进而调节细胞周期以发挥抑制MKN-45细胞生长的作用.
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吉非替尼与5－氟尿嘧啶、紫杉醇联合对胃癌细胞MKN－45的抑制作用
目的：探讨吉非替尼与5－氟尿嘧啶（5－FU）、紫杉醇（ Paclitaxel）联合序贯对人胃癌细胞MKN－45的抑制作用，筛选出体外对胃癌有效的联合用药方案。方法采用免疫组化法鉴定MKN－45细胞内EGFR相关抗原，采用MTT法测定5－FU、紫杉醇与吉非替尼联合对 MKN－45细胞的抑制作用。利用combidrug软件分析联合用药的作用效果。结果表明MKN－45细胞内 EGFR相关抗原表达阳性。先用化疗药物24h序贯吉非替尼48h方式给药时，5－氟尿嘧啶，紫杉醇与吉非替尼均有协同作用，CI值＜1；先用吉非替尼48h序贯化疗药物24h方式给药时，5－氟尿嘧啶，与吉非替尼有协同作用，CI值＜1，紫杉醇与吉非替尼在fa＞0．85时，CI值＞1，呈拮抗作用。结论5－氟尿嘧啶与吉非替尼具有协同作用，联合效果不受序贯给药顺序的影响。先用紫杉醇24h序贯吉非替尼48h具有协同作用，联合效果优于其余两种给药方案。
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乌司他丁对胃癌细胞生物学功能的影响
目的 探讨乌司他丁与胃癌细胞MKN-45增殖、凋亡、侵袭的关系以及可能的作用机制.方法 采用不同浓度的乌司他丁(400 U/ml、800 U/ml、1600 U/ml)作用于体外培养的MKN-45细胞中,分为对照组、400 U/ml组、800 U/ml组、1600 U/ml组;MTT实验检测乌司他丁对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞的凋亡率,Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化,采用免疫印迹法(Western blotting)检测核因子κB(NF-κB)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)水平.结果 与对照组相比,乌司他丁显著抑制细胞的增殖(P<0.05),促进其凋亡(P<0.05),降低细胞的侵袭能力(P<0.05).800 U/ml组与400 U/ml组比较,差异有统计学意义(P<0.05),但与1600 U/ml组比较,差异无统计学意义(P>0.05).乌司他丁显著抑制NF-κB、Bcl-2蛋白水平(P<0.05),显著增加Bax蛋白水平(P<0.05);且随着浓度的增加,抑制作用逐渐增强(P<0.05).结论 乌司他丁可以抑制胃癌细胞的增殖,促进其凋亡,降低细胞的侵袭能力,其作用机制与NF-κB信号通路相关.
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敲低膜联蛋白A5对人胃癌细胞系MKN-45增殖的作用
目的 探讨膜联蛋白A5低表达对人胃癌MKN-45细胞增殖和凋亡的影响.方法 将胃癌MKN-45细胞分为siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组.采用RNA干扰技术将靶向膜联蛋白A5的siRNA和阴性对照siRNA脂质体转染法转染细胞,转染48 h后采用qRT-PCR和Western blot法分别在mRNA水平和蛋白水平进行抑制效率的鉴定,空白对照组不予任何处理.应用MTT、平板克隆形成法检测膜联蛋白A5低表达对胃癌MKN-45细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western blot法检测增殖核抗原PCNA和周期相关蛋白Cyclin D1的表达.结果 靶向膜联蛋白A5的siRNA转染后,胃癌MKN-45细胞中膜联蛋白A5的表达较阴性对照和空白对照组明显降低(P＜0.05).MTT和克隆形成实验可见siRNA干扰组细胞增殖活力和集落形成能力较阴性对照和空白对照组显著增高(P＜0.05);流式细胞术显示细胞凋亡率无明显改变;PCNA和CyclinD1的表达显著上调.结论 膜联蛋白A5低表达能促进胃癌细胞的增殖.
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金丝桃苷诱导人胃癌细胞MKN-45凋亡及其机制
目的 探讨金丝桃苷(hyperoside,Hyp)对人胃癌MKN-45细胞增殖及凋亡的影响及其机制.方法 体外培养MKN-45细胞,对照组不加药物,实验组分别加入不同浓度Hyp(12.5、25、50、100、200 μg/ml)作用24、48 h,MTT法检测Hyp对细胞增殖的影响并筛选适宜药物浓度;流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡率;Western blot法分析NF-κB P65、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白的表达情况.结果 Hyp可明显抑制MKN-45细胞的增殖,阻滞细胞于Go/G1期并促进其凋亡,Western blot结果显示,随着药物浓度的增高,Hyp可使NF-κB P65、Bcl-2蛋白表达降低,casepase-3、Bax蛋-白表达增高.结论 金丝桃苷可抑制MKN-45细胞增殖并诱导凋亡,其机制可能与该药物阻断细胞周期,抑制NF-κB通路,下调NF-κB P65、Bcl-2蛋白,上调casepase-3、Bax蛋白有关.
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E2F-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响
背景与目的:E2F-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性.本研究通过构建E2F-1基因真核表达载体.分析E2F-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响.方法:巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增E2F-1基因片段,用pCMV-HA载体构建真核重组质粒,转染MKN-45细胞(转染COS-7细胞用以鉴定所构建的载体).Western blot检测转染情况.并通过克隆形成实验、MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,观察E2F-1过表达对MKN-45细胞的影响.结果:pCMV-E2F1-HA重组质粒成功转染MKN-45细胞.转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞形成的克隆数为4.7±1.8,明显少于转染空载体组的30.2+6.7(P＜0.01).转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞增殖随时间而减慢,第5、6、7天的细胞增殖率分别为73.5%、63.5%和56.1%,明显低于转染空载体组(P＜0.01).与转染空载体组相比,表达E2F-1基因的MKN-45细胞在G0/G1期所占比例明显提高(71.4% vs.59.7%,P＜0.05),S期所占比例明显下降(18.7% vs.30.7%,P＜0.05).结论:成功构建E2F-1基因真核表达载体,E2F-1过表达可抑制MKN-45细胞的增殖.
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氧化苦参碱抑制MKN-45细胞迁移及其机制的研究
目的:观察氧化苦参碱对MKN-45细胞系体外迁移能力的影响,并探讨其作用机制.方法:取MKN-45细胞为研究对象.随机分为对照组和实验组,实验组按照氧化苦参碱不同浓度(1、2、4 g/L)分为3组.用细胞划痕和Transwell小室法测定对细胞迁移力的影响,Western-Blot法测定对胞内白介素-8(interleukin-8.IL-8)蛋白表达水平的影响.结果:与对照组相比,实验组细胞划痕愈合减缓(P<0.05),Transwell穿膜细胞数明显减少(P<0.05),细胞内IL-8蛋白的表达水平呈药物浓度依赖性降低(P<0.05).结论:氧化苦参碱抑制了MKN-45细胞的迁移能力,其作用与抑制细胞内IL-8蛋白表达水平有关.
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过表达miR-26b抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖
目的 构建miR-26b过表达载体,观察其对MKN-45人胃癌细胞增殖的影响.方法 合成miR-26b DNA寡聚核苷酸单链,经退火形成双链;用限制性内切酶EcoR Ⅰ和HindⅢ对pcDNATM6.2-GW-miR真核表达载体进行双酶切(大片段),纯化后与之前退火形成的DNA双链连接,转化至大肠杆菌感受态细胞DH5α,扩增后提取质粒,经DNA测序和BLAST比对,验证其是否构建成功;将成功构建的pcDNATM6.2-GW-miR-26b载体瞬时转染MKN-45人胃癌细胞,采用实时定量PCR检测miR-26b的表达水平,Western blot法检测细胞分裂周期蛋白6(CDC6)蛋白,MTT法检测细胞增殖的变化.结果 通过DNA测序BLAST比对结果显示成功构建了miR-26b的真核表达载体;瞬时转染MKN-45细胞后,实时定量PCR结果显示miR-26b的表达水平显著增加;Western blot结果表明过表达miR-26b明显抑制CDC6蛋白的表达,MTT法显示过表达miR-26b能显著抑制MKN-45细胞的增殖.结论 过表达miR-26b可抑制MKN-45人胃癌细胞的增殖.
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CO_2气腹对胃癌MKN-45细胞黏着斑激酶的影响
目的 研究CO_2气腹对胃癌MKN-45细胞黏着斑激酶(FAK)的影响.方法 体外模拟不同压力CO_2气腹环境,实验组:人胃癌MKN-45细胞置于5、10、15 mm Hg(1mm Hg=0.133 kPa)CO_2气腹环境培养4 h.对照组:常规条件培养人胃癌MKN-45细胞.采用Western blot法检测各组细胞FAK及磷酸化FAK(FAK Tyr397)的表达量,且分别观察15 mm Hg CO_2作用0.5、2、4 h的情况.多组比较采用单因素方差分析,组间比较采用LSD法检验.结果 实验组5、10、15 mm Hg CO_2气腹环境下,FAK表达量分别为2.14±0.17、2.07±0.21、2.52±0.26;FAK Tyr397表达量分别为1.82±0.28、1.93±0.52、3.71±0.37;而对照组FAK表达量为2.43±0.46,FAK Tyr397表达量为1.71±0.23,两组比较差异有统计学意义(F=2.171,26.951,P<0.01).15 mm Hg CO_2作用0.5、2、4 h后,FAK Tyr397表达量分别为3.41±0.44、4.12±0.56、5.24±0.41,三者比较差异有统计学意义(F=116.119,P<0.01).脱离气腹后恢复至处理前水平(0.72±0.16).结论 不同压力CO_2气腹环境处理胃癌MKN-45细胞4 h不增加其FAK表达,但可使其磷酸化而激活,且压力越高,作用时间越长,磷酸化程度越高,但脱离气腹环境后,其活性迅速降至处理前水平.
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并头黄芩乙醇提取物对人胃癌细胞增殖作用的影响
目的:研究并头黄苓的乙醇提取物对人胃癌细胞MKN-45细胞的体外增殖的抑制作用.方法:采用MTT法检测并头黄芩乙醇提取物对MKN-45细胞的增殖是否具有抑制作用. 结果:并头黄芩乙醇提取物对MKN-45细胞处理24、48和72h后,与对照组相比,均可明显抑制人胃癌细胞的增殖.结论:并头黄芩乙醇提取物体外对人胃癌细胞有抑制作用.
