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白疕合剂对体外培养人永生化角质形成细胞分泌血管内皮生长因子及其受体2表达的影响
目的 观察中药白疕合剂干预人永生化角质形成细胞(HaCaT 细胞)后,对其血管内皮生长因子(VEGF)的分泌量及其受体2(VEGFR-2)基因和蛋白表达的影响,并探讨其作用机制.方法 体外培养HaCaT细胞建立银屑病实验模型.SD大鼠随机分为空白血清组、阿维A组和白疕合剂低、中、高剂量组,并单设空白对照组.给药后制备血清,干预HaCaT细胞模型.ELISA检测VEGF分泌量,RT-PCR检测VEGFR-2基因表达,Western blot检测VEGFR-2蛋白表达.结果 与空白对照组比较,白疕合剂低、中、高剂量组干预HaCaT细胞后,VEGF分泌量及VEGFR-2基因和蛋白表达均明显抑制,且呈浓度依赖性.结论 白疕合剂可能通过抑制VEGF分泌量、降低VEGFR-2基因和蛋白表达以达到治疗银屑病的作用.
关键词： 白疕合剂 人永生化角质形成细胞 血管内皮生长因子 血管内皮生长因子受体-2 大鼠 -
模拟失重对HaCaT细胞增殖及细胞骨架的影响
目的 研究模拟微重力环境对人永生化角质形成细胞(HaCaT)生长增殖及细胞骨架的影响.方法 应用RCCS建立模拟微重力细胞培养系统,将HaCaT细胞随机(随机数字法)分为模拟微重力组(SMG)和正常重力对照组(NG),经32 h、36 h和42 h培养后收集两组细胞,应用流式细胞仪技术检测细胞生长周期;ELISA检测细胞上清液hb-EGF浓度;激光共聚焦显微镜和荧光素FITC标记技术观察经42 h培养的两组HaCaT细胞骨架形态变化.采用SPSS 23.0统计学软件进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义.结果 流式细胞仪检测结果显示,与NG组比较,SMG组HaCaT细胞经32 h、36 h和42 h培养,三个时相点的G1和G2/M期细胞数显著增加,S期细胞数显著减少(P<0.05).SMG组HaCaT细胞随培养时间延长,G1期细胞数呈减少趋势.ELISA结果显示,SMG组HaCaT细胞经32 h和36 h后hb-EGF浓度较NG组明显下降(P<0.01).激光共聚焦显微镜观察荧光素FITC标记的HaCaT细胞,发现模拟微重力培养42 h后,HaCaT细胞的荧光强度减弱,微丝排列紊乱,结构破坏明显,部分模糊不可见,细胞间伪足较少且不规则.结论 RCCS模拟微重力环境抑制HaCaT细胞周期转化和增殖,影响hb-EGF自分泌机能,并导致细胞骨架结构发生变化.
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白三烯B4对人永生化角质形成细胞的影响
目的 探讨白三烯B4(leukotriene B4,LTB4)对人永生化角质形成细胞(immortal keratinocytes,HacaT 细胞)的影响.方法 将中波紫外线(ultraviolet B,UVB)和LTB4分别或共同作用于HaCaT细胞,观察端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、细胞增殖指数(proliferation index,PI)及白三烯B4受体(leukotriene B4 receptor,BLT)的变化.分别采用流式细胞仪检测HaCaT细胞周期的变化,RT-PCR检测hTERT mRNA水平,同时采用免疫荧光结合激光共聚焦显微镜和Western-blot法检测BLT的表达.结果 HaCaT细胞存在BLT表达,表达分布于胞膜和胞浆;UVB单次照射HaCaT细胞,BLT的表达升高(P<0.05),PI降低;LTB4使HaCaT细胞hTERT表达上调、PI增高,但BLT表达与空白对照组相似;UVB+LTIM共同作用于HaCaT细胞后,其PI下降,BLT、hTERT mRNA与空白对照组比较无显著性差异(P>0.05).结论 HaCaT细胞可表达BLT蛋白,LTB4能促进HaCaT细胞增殖.UVB照射可能促进HaCaT细胞BLT的表达.
关键词： 白三烯B4 中波紫外线 人永生化角质形成细胞 -
白芍总苷对角质形成细胞增生及ICAM-1表达的影响
目的：探讨白芍总苷(TGP)对人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）增生及分泌细胞间黏附分子(ICAM)-1的影响，探讨可能涉及的信号传导通路。方法用500 U/ml干扰素(IFN)-γ诱导HaCaT细胞，不同浓度TGP（0.5～312.5μg/ml）作用于HaCaT细胞。四甲基偶氮唑盐(MTT)法观察TGP对HaCaT细胞增生活性的影响。酶联免疫吸附试验（ELISA）及荧光免疫组化法检测HaCaT细胞表达ICAM-1的水平。结果 TGP在低浓度（0.5～25.0μg/ml）时对HaCaT细胞增生活性有促进作用，在高浓度（62.5～125.0μg/ml）时对HaCaT细胞增生活性呈抑制作用。0.5～25.0μg/ml TGP可显著降低HaCaT细胞表达ICAM-1的水平（P＜0.05，P＜0.01）。结论 TGP对IFN-γ上调HaCaT细胞分泌ICAM-1有显著的抑制作用，可能是TGP抗炎作用机制之一。
关键词： 白芍总苷 人永生化角质形成细胞 细胞间黏附分子-1 γ干扰素 -
小檗碱衍生物HB-13对角质形成细胞分泌IFN-γ的影响
目的 研究小檗碱衍生物HB-13对人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)分泌γ干扰素(IFN-γ)的影响,探讨HB-13的抗炎机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝法确定HB-13作用于HaCaT细胞的安全浓度；细胞经P物质刺激后,加入不同浓度的HB-13分别孵育12、24、48h,应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测培养上清液中IFN-γ的含量,应用实时荧光定量PCR法检测细胞内IFN-γmRNA表达情况.结果 HB-13浓度为2.5、5、10 μg/ml对HaCaT细胞毒性作用不显著,并可促进P物质诱导的IFN-γ的分泌.结论 促进表皮细胞分泌IFN-γ可能是HB-13在皮肤局部发挥抗炎作用的机制之一.
关键词： 小檗碱衍生物HB-13 人永生化角质形成细胞 γ干扰素 -
枸杞多糖对中波紫外线辐射后角质形成细胞炎症因子表达的影响
目的 研究青海柴达木枸杞多糖(LBP)对中波紫外线(UVB)辐射后人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)白细胞介素1 (IL-1)和白细胞介素6(IL-6)表达的影响.方法 将体外培养的HaCaT细胞随机分成5组:空白对照组、UVB辐射组、低剂量枸杞多糖组、中剂量枸杞多糖组、高剂量枸杞多糖组,空白对照组不进行任何处理,UVB辐射组(30 mJ/cm2照射40 min),低剂量枸杞多糖组(0.5 mg/mL,30 mJ/cm2照射40 min),中剂量枸杞多糖组(1 mg/mL,30 mJ/cm2照射40 min),高剂量枸杞多糖组(2 mg/mL,30 mJ/cm2照射40 min),照射前枸杞多糖预处理12h,酶联免疫吸附测定法(EHSA法)检测各组细胞及上清中IL-1和IL-6的水平.结果 与空白对照组比较,UVB辐射组细胞中IL-1的水平无明显变化(P＞0.05),IL-6的水平明显增高(P＜0.05);上清中IL-1、IL-6水平明显提高(P＜0.05).与UVB辐射组比较,低中高枸杞多糖组无论是细胞中还是上清中IL-1、IL-6水平都明显降低(P＜0.05).结论 青海柴达木枸杞多糖可降低UVB辐射后HaCaT细胞中炎症因子的合成及分泌,减轻紫外线辐射后引起的皮肤损伤.
关键词： 枸杞多糖 人永生化角质形成细胞 中波紫外线辐射 白细胞介素1 白细胞介素6 -
不同剂量亚砷酸钠暴露不同时间对HaCaT细胞活性氧的影响
目的 探索不同剂量亚砷酸钠暴露不同时间对诱导人永生化角质形成(HaCaT)细胞活性氧(ROS)产生的影响以及低剂量亚砷酸钠预处理HaCaT细胞对诱导ROS水平改变的时间效应.方法 设未预处理组[分别加入终浓度为0(对照)、0.15、0.6、2.5、10 μmol/L的亚砷酸钠染毒8、24、72 h]和预处理8h组(加入0.15μmol/L亚砷酸钠预处理8h后,加入10 μmol/L亚砷酸钠染毒8h)及预处理24 h组(加入0.15 μmol/L亚砷酸钠预处理24 h后,加入10 μmol/L亚砷酸钠染毒8h).利用2’,7’-二乙酰二氯荧光素(DCFH-DA)通过流式细胞仪检测细胞内ROS水平.结果 与对照组比较,各浓度亚砷酸钠染毒8h和0.6、2.5、10μmol/L亚砷酸钠染毒24 h及0.6、2.5 μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后HaCaT细胞内ROS水平均较高,而0.15、10μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后HaCaT细胞内ROS水平均较低,差异有统计学意义(P＜0.05).亚砷酸钠染毒8h时,HaCaT细胞内ROS水平达到峰值；之后,低剂量(0.15、0.6 μmol/L)亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞内ROS水平于24 h下降,72 h有所回升,而高剂量(≥2.5 μmol/L)亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞内ROS水平则呈持续下降.预处理8h组HaCaT细胞内ROS水平高于预处理24h组,差异均有统计学意义(P＜0.05)；与10 μmol/L亚砷酸钠染毒未预处理HaCaT细胞8h组比较,预处理8h组HaCaT细胞内ROS水平较高,预处理24 h组HaCaT细胞内ROS水平较低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 HaCaT细胞急性暴露于亚砷酸钠后能够引起HaCaT细胞内ROS产生增加,而不同剂量亚砷酸钠暴露诱导HaCaT细胞ROS水平的改变与暴露时间密切相关,且低剂量亚砷酸钠暴露对HaCaT细胞产生的适应性反应可能取决于其作用时间.
关键词： 亚砷酸盐 活性氧 人永生化角质形成细胞 时间效应 -
砷对人永生化角质形成细胞核转录因子红细胞系-2p45相关因子-2和Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1基因表达的影响
目的 探讨不同剂量亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞(human keratinocytes cell,HaCaT)Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Kcap1)和核转录因了红细胞系-2 p45相关因子-2(Nrf2)基因表达的影响.方法 将HaCaT细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、1.30、3.25、6.50 μmol/L的亚砷酸钠培养基中培养24、48、72 h.采用流式细胞仪检测HaCaT细胞凋亡率,采用实时荧光定量(real-timequantitative PCR)检测HaCaT细胞中Nrf2、Keap1 mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,1.30 μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后HaCaT细胞的凋亡率降低,而3.25、6.50 μmol/L亚砷酸钠染毒48、72 h后HaCaT细胞的凋亡率升高,差异均有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,HaCaT细胞的凋亡率均呈上升趋势.与对照组相比,1.30 μmol/L亚砷酸钠染毒24、48、72 h和3.25 μmol/L亚砷酸钠染毒24 h后HaCaT细胞中Nrf2 mRNA的表达水平均增高,而3.25、6.50 μmol/L亚砷酸钠染毒72 h后HaCaT细胞中Nrf2 mRNA的表达水平均下降,差异有统计学意义(P＜0.05);且随着亚砷酸钠染毒时间的延长和染毒剂量的升高,HaCaT细胞Nrf2 mRNA的表达水平均呈下降趋势.与对照组相比,1.30、3.25 μmol/L亚砷酸钠染毒72 h和3.25、6.50 μmol/L亚砷酸钠染毒48 h后HaCaT细胞中Keap1mRNA的表达水平均增高,差异有统计学意义(P＜0.05).随着亚砷酸钠染毒时间的延长,1.30 μmol/L亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞中Keap1 mRNA的表达水平呈波动性上升,3.25 μmol/L亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞中Keap1 mRNA的表达水平呈逐渐上升趋势,6.50 μmol/L亚砷酸钠染毒组HaCaT细胞中Keap1mRNA的表达水平呈先上升后下降;随着亚砷酸钠染毒剂量的升高,24、72 h时HaCaT细胞中Keap1 mRNA的表达水平呈下降趋势,而48 h时HaCaT细胞中Keap1 mRNA的表达水平呈上升趋势.结论 亚砷酸钠可抑制HaCaT细胞的生长,诱导凋亡和角化的发生,其机制可能与Nrf2和Keap1基因的表达有关.
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银屑Ⅰ号抑制TNF-α诱导Hacat细胞炎症反应的机制研究
目的:观察银屑I号对肿瘤坏死因子α (TNF-α) 诱导的人永生化角质形成细胞 (Hacat) 炎症反应的影响并探讨其机制.方法:采用低、中、高浓度的银屑I号含药血清干预Hacat细胞, ELISA法检测细胞上清液25HVD3、IL-1、IL-17、IL-22浓度, Western-blot法检测维生素D受体 (vitamine D receptor, VDR) 蛋白表达量, RT-PCR检测VDRmRNA相对表达量.结果:与空白组比较, 模型组VDR蛋白、VDRmRNA、25HVD3表达量明显降低, IL-1、IL-17、IL-22明显升高 (P＜0.01);与模型组比较, 银屑I号各组VDR蛋白、VDRmRNA、25HVD3表达量明显升高, IL-1、IL-17、IL-22明显降低 (P＜0.05), 且呈剂量依赖性.讨论:银屑I号可能通过促进VDR蛋白、VDRmRNA及25HVD3因子信号表达发挥对银屑病的治疗作用.
关键词： 银屑Ⅰ号 维生素D受体 人永生化角质形成细胞 白介素-22 炎症反应 -
亚砷酸钠对人永生化角质形成细胞株恶性转化的影响
背景：有研究发现亚砷酸钠可以引起HaCaT细胞的恶性转化，并具有致瘤性，但关于低浓度亚砷酸钠是否引起HaCaT细胞发生恶性转化的研究不多。
目的：分析亚砷酸钠对HaCaT细胞恶性转化的影响。
方法：将HaCaT细胞加入不同浓度的亚砷酸钠进行培养，MTT测定亚硫酸钠对HaCaT细胞形态和增殖能力的影响，流式细胞术测定亚硫酸钠对HaCaT细胞周期的影响，软琼脂集落形成实验测定亚硫酸钠对HaCaT细胞克隆形成能力的影响。
结果与结论：①5 mol/L亚砷酸钠对HaCaT细胞生长没有影响，但10和50 mol/L亚砷酸钠抑制HaCaT细胞生长。②HaCaT细胞经0.1 mol/L亚砷酸钠处理后，传代培养至第20代时，HaCaT细胞的形态没有明显改变，第25代时，细胞体积增大，有多个核仁，有不断增殖趋势。③与原代细胞相比，经0.1 mol/L亚砷酸钠处理后传至第15及25代HaCaT细胞S期细胞和G 2/M期细胞所占比例增加，增殖能力增强，克隆形成率增加，且第25代HaCaT细胞的增殖能力和克隆形成率高于第15代。④实验结果说明，高浓度亚砷酸钠降低HaCaT细胞的活力，低浓度亚硫酸钠对HaCaT人永生化皮肤角质形成细胞的细胞形态、细胞周期、增殖能力以及克隆形成能力均有一定的影响，随着传代的增加，人永生角质形成细胞增殖能力和克隆形成能力不断增强。 -
人参、黄芩仿生化提取物对UVB照射HaCaT细胞HIF-1α表达的影响
目的 探讨人参、黄芩仿生化提取物(SQBE)对中波紫外线(UVB)照射人永生化角质形成细胞(HaCaT)缺氧诱导因子1α(HIF-1α)表达的影响,阐明SQBE预防UVB辐射所致皮肤癌发生的可能作用机制.方法 将对数生长期的HaCaT细胞,接种于含有10％胎牛血清DMEM培养基的培养皿中,于37℃、5％CO2的细胞培养箱内常规培养;分为对照组和SQBE 1组(终浓度为12.5 μg·ml-1的SQBE)、SQBE 2组(终浓度为25.0μg·ml-1的SQBE)、SQBE 3组(终浓度为50.0 μg·ml-1的SQBE),各组在给药4h后与对照组同时进行UVB(0、20、40、60 mJ·cm-2)照射;继续培养24h后,采用MTT法检测细胞生存率,荧光定量PCR法及Western blotting法检测HIF-1 αmRNA及HIF-1α蛋白的表达.结果 与对照组相同照射剂量比较,SQBE 3组的细胞生存率明显提高(P＜0.05),SQBE1组和SQBE 2组差异无统计学意义(P＞0.05);SQBE 3组能够有效降低细胞内HIF-1αmRNA及HIF-1α蛋白的表达.结论 大剂量人参、黄芩仿生化提取物(SQBE)可通过对细胞内HIF-1α表达的影响,预防UVB辐射导致的皮肤癌发生.
关键词： 人参 黄芩 人永生化角质形成细胞 中波紫外线 缺氧诱导因子1α -
UVB辐射角质形成细胞表达低氧诱导因子(HIF1α)初步探讨
目的 研究紫外线(UVB)辐射对人永生化角质形成细胞(HaCaT)表达HIF1α的影响.方法 体外培养HaCaT,不同剂量的UVB辐射,在照射后不同时间收集细胞,Western blot测定HIF1α蛋白含量.Realtime-PCR测定细胞中HIF1αmRNA含量.结果 UVB可增强HIF1α蛋白表达,并呈剂量依赖性和时间依赖性.UVB照射不改变HIF1αmRNA表达.结论 UVB辐射可促进HaCaT细胞表达HIF1α.
关键词： 紫外线(UVB) 人永生化角质形成细胞 HIF1α -
白介素22调控角质形成细胞表达角蛋白17的研究
目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响.方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0 ～ 100 μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA 表达水平,以酶联免疫吸附测定技术(ELISA 法)、蛋白质免疫印记法(Western blot)及免疫荧光染色法检测K17 蛋白表达水平的变化.结果:HaCaT细胞经12.5、25.0、50.0、100.0 μg/L 的IL-22 作用后, 均出现不同程度的K17 表达.与空白对照组的HaCaT细胞相比,12.5 μg/L组的mRNA及蛋白表达无明显差异,而25.0、50.0、100.0 μg/L组的mRNA 及蛋白表达则明显上升(P ＜0.05),并且随着IL-22浓度增高,K17mRNA及蛋白表达量增多.免疫荧光染色图片显示,随着IL-22 浓度的增高,HaCaT细胞胞质中K17蛋白荧光染色增强.结论:IL-22可以剂量依赖方式诱导HaCaT细胞表达K17.
关键词： 白介素22 角蛋白17 人永生化角质形成细胞 -
2型单纯疱疹病毒对HaCaT细胞分泌I型干扰素的影响
目的: 评价2型单纯疱疹病毒(HSV-2)对人永生化角质形成细胞(HaCaT)分泌I型干扰素(IFN-α、IFN-β)的影响,探讨角质形成细胞(KC)对HSV-2 感染的免疫防御机制.方法: 以HSV-2感染HaCaT细胞,采用荧光实时定量PCR检测感染后24 h、48 h、72 h IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达.结果: HaCaT细胞静息状态存在IFN-α1、α2、β1三种细胞因子的mRNA表达,但HSV-2感染HaCaT细胞后IFN-α1、α2、β1 mRNA的表达较对照组明显升高(P<0.05),且在72 h内随时间的递增而逐渐升高.结论: 在HSV-2感染KC的初期,KC分泌的I型干扰素参与HSV-2感染的免疫防御反应,对清除HSV-2及防止其扩散有积极作用.
关键词： 2型单纯疱疹病毒 角质形成细胞 人永生化角质形成细胞 免疫防御 I型干扰素 -
麻黄碱对IL-17诱导的人永生化角质形成细胞HaCaT分泌CCL20的影响
目的 观察麻黄碱对IL-17诱导的人永生化角质形成细胞HaCaT分泌CCL20的影响.方法 将HaCaT细胞随机分为6组.A组加不含药物的培养液,B组加含20 ng/mL IL-17的培养液,C、D、E分别加含20 ng/mL IL-17联合800、1200、1600 μg/mL麻黄碱的培养液,F组加含20 ng/mL IL-17联合50 μg/mL MTX的培养液.培养36h后,采用ELISA法测定细胞上清液CCL20,采用RT-PCR法测定细胞中的CCL20 mRNA.结果 A、B、C、D、E、F组HaCaT细胞上清液CCL20水平分别为(97.72±1.86)、(159.43±7.09)、(147.05±2.25)、(138.60±8.04)、(126.66±7.04)、(114.39±3.90) pg/mL,HaCaT细胞CCL20 mRNA相对表达量分别为0.91±0.08、7.22±0.32、4.95±0.33、2.79±0.19、1.79±0.49、1.80±0.47;B、C、D、E、F组均高于A组(P均＜0.05),D、E、F组均低于B组(P均＜0.05),C、D组均低于F组(P均＜0.05).结论 麻黄碱能有效抑制IL-17诱导的HaCaT细胞分泌CCL20,为麻黄治疗银屑病提供一定的理论依据.
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探究2型单纯疱疹病毒（HSV-2）对人永生化角质形成细胞株（HaCaT）分泌白细胞介素（IL）-19、IL-20的影响
目的：：分析2型单纯疱疹病毒对人永生化角质形成细胞株分泌白细胞介素(IL)-19、IL-20的影响,为临床探讨角质形成细胞对2型单纯疱疹病毒感染初期的免疫防御机制提供依据。方法：应用2型单纯疱疹病毒感染人永生化角质形成细胞,并对感染后24、48、72h 的 IL-19、IL-20mRNA(信使 RNA)的表达量使用荧光实时定量 PCR 进行检测,分析 HSV-2对 HaCaT 细胞分泌白细胞介素(IL)-19、IL-20的影响。结果：实验组 HSV-2对 HaCaT 细胞分泌 IL-19、IL-20mRNA 表达量显著高于对照组,P <0.05。结论：角质形成细胞经2型单纯疱疹病毒感染后可分泌 IL-19、IL-20,并参与2型单纯疱疹病毒感染初期的免疫防御反应。
关键词： 2 型单纯疱疹病毒 人永生化角质形成细胞 IL-1 9 IL-20 影响 -
藏雪莲水提取物减轻中波紫外线辐射后HaCaT细胞凋亡的体外研究
目的：研究藏雪莲水提取物减轻中波紫外线（UVB）照射人永生化角质形成细胞（HaCaT）后细胞凋亡的机制。方法：MTS法检测细胞增殖活性，台盼蓝染色观察细胞形态及死亡情况，酶标法测定超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力、细胞丙二醛（MDA）及谷胱甘肽（GSH）含量，Western Blot及免疫荧光法检测细胞凋亡相关蛋白的表达，流式细胞仪检测细胞凋亡率、线粒体膜电位及细胞内钙离子（Ca2＋）含量。结果：藏雪莲水提取物可以促进 HaCaT 增殖，降低细胞蓝染数量，降低 SOD、CAT 活性及 GSH 含量，增加MDA含量（P ＜0．05），升高B细胞淋巴瘤因子2（Bcl-2）蛋白，降低 Bcl-2相关 x（Bax）蛋白及半胱氨酸蛋白酶3（Caspase-3）的表达（P ＜0．05），降低 UVB辐射后HaCaT细胞凋亡及细胞内Ca2＋浓度，升高线粒体膜电位。结论：藏雪莲水提取物能够降低HaCaT细胞凋亡来减轻UVB辐射后HaCaT细胞的凋亡。
关键词： 藏雪莲水提取物 人永生化角质形成细胞 中波紫外线 细胞凋亡 -
芦荟大黄素对人永生化角质形成细胞增殖和凋亡作用研究
目的：研究芦荟大黄素（AE）对人永生化角质形成细胞（HaCaT）的生长抑制效应和诱导细胞凋亡能力，探讨其治疗银屑病的可能机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测芦荟大黄素对 HaCaT 细胞增殖的抑制作用，倒置显微镜观察细胞形态学变化，流式细胞术检测细胞周期变化及凋亡。结果芦荟大黄素质量浓度在20~80μg / mL 范围内可抑制 HaCaT 细胞增殖且呈剂量依赖性；镜下观察到细胞稀疏，生长减慢，细胞形态拉长，细胞被阻滞于 S 期而凋亡。结论芦荟大黄素能抑制 HaCaT 细胞的增殖、诱导 HaCaT 细胞的凋亡，可用于治疗银屑病。
关键词： 芦荟大黄素 人永生化角质形成细胞 银屑病 -
大气压低温等离子体引起HaCaT细胞凋亡的作用机制
目的:探讨空气中沿面放电大气压低温等离子体(CAP)装置对HaCaT细胞凋亡的影响及机制.方法:将培养获得HaCaT细胞分为正常HaCaT细胞(对照组),CAP组(CAP分别处理1、2、3、4 min,CAP1min、CAP2min、CAP3min及CAP4min组),CAP3min与5 mmol/L N-乙酰半胱氨酸(NAC)处理组(NAC组);采用Annexin V-FITC/PI双染检测各组HaCaT细胞的凋亡率,荧光探针Flu0 3-AM测定细胞内钙离子(Ca2+)浓度的变化;无机磷法检测CAP3min组HaCaT细胞Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活力,JC-1染料检测线粒体膜电位变化,LYCH荧光探针标记溶酶体,观察溶酶体膜稳定性;采用比色法以及Western Blot方法对HaCaT细胞色素C释放、caspase-3和caspase-9活性及蛋白表达水平进行测定.结果:与对照组比较,CAP2min组和CAP3min组HaCaT细胞的凋亡率与Ca2+荧光强度明显升高(P＜0.05);与CAP3min组比较,NAC组HaCaT细胞凋亡率与Ca2+荧光强度降低(P＜o.05);与对照组比较,CAP3min组HaCaT细胞Na+-K+-ATP酶及Ca2+-Mg2+-ATP酶活力均有明显下降(P＜0.001及P＜0.01),CAP3min组继续培养4h及16 h的HaCaT细胞线粒体膜电位下降,CAP组细胞的溶酶体膜通透性增加,caspase-3在细胞接受CAP处理后的3、6及9h均表现活性升高(P＜0.01),caspase-9在处理后3h出现活性明显升高(P＜0.01).结论:大气压冷等离子体处理可能通过多条途径诱导HaCaT细胞发生凋亡.
